彭琼乐
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 乳腺癌前病变组织原代成纤维细胞生物学特征初步研究被引量：2
- 2012年
- 目的比较乳腺导管不典型增生成纤维细胞(atypical intraductal hyperplasia fibroblasts,AFs)与正常乳腺成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)、乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)在生物学特征上的差异。方法采用Ⅰ型胶原酶法分离并培养AFs、NFs和CAFs,免疫细胞荧光化学检测其粘连蛋白(fibronectin,FN)表达以鉴定细胞纯度。比较3种细胞的细胞生长曲线、细胞周期和周期蛋白cyclin D1、p21waf1及p53的变化。结果获得并鉴定了NFs、AFs、CAFs;其生长速度依次增加(P<0.05),细胞周期S期百分比(8.24±2.47)、(16.94±4.77)、(33.31±7.90)依次增大(P<0.05);与NFs相比,AFs周期蛋白cyclin D1表达增加(P<0.05),p21waf1和p53蛋白表达降低(P<0.05);与CAFs相比,AFs的周期蛋白cyclin D1没有升高(P<0.05),p21waf1蛋白和p53蛋白表达更强(P<0.05)。结论 AFs相对于NFs和CAFs,细胞生长增殖具有特异性,这种变化提示乳腺肿瘤的癌前病变阶段AFs可能是NFs逐步向CAFs转变的过渡阶段。
- 孙艳彭琼乐王黎阳赵浏阳袁泉李俊柳满然
- 关键词：微环境成纤维细胞细胞周期
- let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响被引量：2
- 2011年
- 目的研究let-7a对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的影响及其可能的分子机制。方法将A549细胞、稳定转染let-7a重组质粒的A549-let-7a细胞及稳定转染对照质粒的A549-control细胞分别接种至BALB/c裸鼠背部皮下,观察各组细胞在裸鼠体内的生长情况,测量肿瘤体积并绘制生长曲线;30 d后处死裸鼠,取出瘤体,称重并计算抑瘤率;HE染色观察瘤组织的形态学改变;Western blot及免疫组化法检测各组瘤组织中k-Ras蛋白的表达情况。结果与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组裸鼠的瘤体生长速度明显减慢,瘤体重量显著降低(P<0.01),抑瘤率为27.51%,A549-control细胞组差异无统计学意义(P>0.05);HE染色显示,A549-let-7a细胞组癌细胞体积较其他两组减小,核浆比例明显缩小,核分裂相显著减少;Westernblot及免疫组化结果表明,与A549细胞组相比,A549-let-7a细胞组瘤组织中k-Ras蛋白的表达明显降低(P<0.01),而A549-control细胞组中k-Ras蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 let-7a能显著抑制A549细胞在裸鼠体内的生长能力,其机制可能与下调k-Ras蛋白的表达有关。
- 何晓燕彭琼乐张政彭惠民
- 关键词：微RNASA549细胞K-RAS
- Tribble3与糖尿病大鼠心肌病变的相关性研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨TRB3(Tribble3)在糖尿病大鼠心肌组织中的表达及与心肌细胞凋亡和间质纤维化的相关性。方法:24只SD雄性大鼠随机分对照组12只,糖尿病组12只。建立糖尿病大鼠模型,成模8周后,检测空腹血糖和糖化血红蛋白,HE染色观察心肌组织病理改变,Masson染色观察心肌组织间质胶原含量,Tunel观察心肌细胞凋亡情况,荧光定量PCR、Western blot分别检测心肌组织TRB3 mRNA及蛋白水平的变化。结果:与对照组相比,糖尿病组大鼠空腹血糖及糖化血红蛋白水平明显升高(P<0.01);心肌细胞排列紊乱,肌纤维溶解、萎缩、断裂,炎症细胞浸润;间质胶原表达增加(P<0.01);心肌细胞凋亡明显增多(P<0.01);心肌组织TRB3 mRNA及蛋白水平表达升高(P<0.01)。相关性分析显示,TRB3蛋白表达与心肌细胞凋亡成正相关(r=0.668,P<0.05),与间质纤维化程度成正相关(r=0.595,P<0.05)。结论:糖尿病大鼠心肌组织中TRB3 mRNA及蛋白表达增多。TRB3可能通过促进心肌细胞凋亡,增加间质纤维含量参与糖尿病心肌病的发病机制。
- 柴李殷肖谦马楼艳张颖彭琼乐
- 关键词：糖尿病心肌病凋亡间质纤维化
- 人端粒酶蛋白催化亚单位基因逆转录病毒真核表达质粒的构建及其对人乳腺癌相关成纤维细胞增殖的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建人端粒酶蛋白催化亚单位(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)逆转录病毒真核表达质粒,并检测其在人乳腺癌相关的成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)中的表达及其对CAF增殖的影响。方法扩增pIRES-EGFP-hTERT质粒,酶切回收hTERT片段,正向克隆至逆转录病毒载体pBABE-puro上,构建重组质粒pBABE-puro-hTERT,转染PT67细胞,进行逆转录病毒的包装。将PT67细胞上清感染原代培养的人乳腺癌CAF,荧光定量PCR和Westernblot分别检测hTERT基因在人乳腺癌CAF中的转录和表达,流式细胞术检测细胞的增殖情况。结果重组质粒pBABE-puro-hTERT经酶切和测序证实构建正确;与未处理的人乳腺癌CAF和感染pBABE-puro的细胞相比,感染重组质粒的人乳腺癌CAF中hTERT基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平均明显增强,其增殖指数也明显增加(P<0.05)。结论成功构建了hTERT基因逆转录病毒真核表达质粒,其能增强人乳腺癌CAF的增殖能力,为乳腺癌微环境CAF的研究提供了良好的细胞模型。
- 彭琼乐王黎阳赵浏阳孙艳柳满然彭惠民
- 关键词：逆转录病毒乳腺癌细胞增殖
- c-ski基因重组腺病毒质粒的构建及其对肿瘤相关成纤维细胞增殖的影响
- 2013年
- 目的构建携带c-ski基因的重组腺病毒质粒,并检测其对肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)增殖活力的影响。方法以pcDNA3-c-ski质粒为模板,PCR扩增c-ski基因,与腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV连接,构建重组穿梭质粒pAdTrack-c-ski,经PmeⅠ线性化后,转化感受态大肠埃希菌BJ5183,获得重组腺病毒质粒,经PacⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,获得重组腺病毒,经扩增及纯化后测定病毒滴度。将纯化的重组腺病毒感染乳腺癌CAFs,采用Western blot法检测感染细胞中c-Ski蛋白的表达水平;MTT法和细胞计数法检测重组腺病毒对CAFs细胞增殖活力的影响。结果重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;转染HEK-293细胞48 h后可见大量绿色荧光蛋白的表达,纯化的重组腺病毒的滴度为3.11×1010IFU/ml;感染重组腺病毒的乳腺癌CAFs中c-Ski蛋白的表达水平明显高于空病毒组和空白对照组(P<0.001),且增殖活力明显高于空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了表达c-ski基因的重组腺病毒质粒,其可明显促进CAFs的增殖,为进一步研究c-Ski对CAFs增殖分化等生物学功能的影响及作用机制提供了实验依据。
- 王黎阳赵浏阳彭琼乐孙艳柳满然
- 关键词：腺病毒成纤维细胞细胞增殖
- 癌相关成纤维细胞在肿瘤发生发展中的作用被引量：3
- 2013年
- 肿瘤微环境在肿瘤发生、浸润、转移过程中扮演着十分重要的角色,癌相关的成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境中最主要的基质细胞,在肿瘤的发生发展中有不可忽视的作用。CAFs对肿瘤的起始创造良好的"土壤",又分泌大量生长因子促进肿瘤的生长,分泌血管生成因子促进肿瘤血管的生成,并招募大量的炎症因子和分泌大量的可溶性产物到微环境中促进肿瘤细胞浸润和转移。因此,CAFs成为肿瘤靶向治疗的新目标,为临床肿瘤的综合治疗提供新的思路。
- 彭琼乐孙艳赵浏阳王黎阳彭惠民柳满然
- 关键词：肿瘤微环境肿瘤靶向治疗
- miRNA-451表达质粒的构建及其对iNOS基因表达的抑制被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨miRNA-451对肾小球系膜细胞中诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因表达的影响。方法:依据miRBase数据库中mmu-miR-451序列,设计两条寡核苷酸片段,退火处理后克隆至pGenesil-1质粒,构建pGenesil-1-miRNA-451质粒及阴性对照质粒pGenesil-1-control。将pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control质粒分别转染小鼠肾小球系膜细胞,经G418筛选,建立稳定表达pGenesil-1-miRNA-451及pGenesil-1-control的细胞株。采用MTT比色法检测活细胞数并绘制生长曲线;RT-PCR、Western blot及免疫细胞化学检测iNOS基因表达的差异。结果:经测序证实重组质粒构建成功,与未处理的小鼠肾小球系膜细胞和稳定表达pGenesil-1-control的细胞相比,在稳定表达pGenesil-1-miRNA-451的小鼠肾小球系膜细胞中,细胞增殖受到抑制,iNOS基因的蛋白表达明显受到抑制,而iNOS基因的mRNA水平无明显变化。结论:miRNA-451在翻译水平抑制了iNOS基因的表达,并对小鼠肾小球系膜细胞生长具有显著的抑制作用。
- 李春蕾何晓燕彭琼乐张政武卫华彭惠民
- 关键词：INOS基因肾小球系膜细胞基因表达
- 人乳腺癌相关成纤维细胞对MDA-MB-231细胞的影响
- 2013年
- 目的探讨人乳腺癌相关成纤维(cancer associated fibroblasts,CAFs)细胞对MDA-MB-231细胞生长、增殖和侵袭的影响。方法实验分2组:MDA-MB-231细胞单独培养组(对照组)和MDA-MB-231与CAFs细胞共培养组(实验组)。以细胞计数法观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞生长的影响;运用流式细胞术检测人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞周期的影响;采用条件培养基,通过Transwell小室侵袭实验观察人乳腺癌CAFs细胞对MDA-MB-231细胞侵袭能力的影响。结果与对照组比较,实验组MDA-MB-231细胞的生长速度明显增强(P<0.05),细胞周期S期细胞百分比[(32.35±4.50)%]和细胞增殖指数PI[(42.91±2.44)%]明显增高(P<0.05);在CAFs细胞的条件培养基下,MDA-MB-231细胞的侵袭能力明显增强(P<0.01)。结论人乳腺癌CAFs细胞能够显著促进MDA-MB-231细胞的生长、增殖和侵袭。
- 彭琼乐杨得志赵浏阳王黎阳孙艳柳满然
- 关键词：MDA-MB-231细胞
- 外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞的乙醛脱氢酶1 mRNA及蛋白表达被引量：3
- 2011年
- 目的本研究旨在探讨外源性TGF-β1诱导人乳腺癌MCF-7细胞对乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase1,ALDH1)mRNA及蛋白表达的影响。方法用不同浓度(1、5ng/mL)的TGF-β1诱导体外培养的MCF-7细胞48h后,RT-PCR检测ALDH1mRNA的表达变化,Western blot检测ALDH1蛋白的表达变化。结果 TGF-β1(1、5ng/mL)诱导的MCF-7细胞的ALDH1mRNA及蛋白表达均高于未诱导的MCF-7亲本细胞,差异有统计学意义(P均<0.001);高浓度(5ng/mL)TGF-β1诱导的MCF-7细胞的ALDH1mRNA及蛋白表达均高于低浓度(1ng/mL)TGF-β1诱导的MCF-7细胞,差异有统计学意义(P均<0.001)。结论外源性TGF-β1可诱导人乳腺癌MCF-7细胞上调ALDH1mRNA及蛋白的表达,可能诱导ALDH1+乳腺癌肿瘤干细胞(cancer stemcell,CSC)的转化,并有一定的浓度依赖性。
- 韩明利吴诚义莫志强彭琼乐王艺梦屈洪波
- 关键词：TGF-Β1乳腺癌上皮-间质转化
- 人乳腺癌相关成纤维细胞的原代培养及其生物学特性被引量：9
- 2012年
- 目的原代培养人乳腺癌相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF),并检测其生物学特性。方法采用胶原酶消化培养法对26份乳腺癌患者标本进行原代细胞分离培养,倒置显微镜下观察人乳腺癌CAF的形态学特性,免疫荧光染色法鉴定所分离培养的人乳腺癌CAF纤维连结蛋白(Fibronectin,FN)和成纤维细胞活化蛋白(Fibroblast activated protein,FAP)的表达,并通过MTT法和细胞计数法绘制细胞生长曲线。结果胶原酶消化法的最适酶浓度为0.12%,最适消化时间为10 h。原代培养23份成功,3份失败。培养成功的细胞贴壁生长,形态完整,生长状态良好,背景清晰,有明显的对数生长期,并可传代培养。培养的细胞FN和FAP表达阳性,表明原代培养的CAF为乳腺癌CAF。结论胶原酶消化培养法适合人乳腺癌CAF的原代培养,通过该方法可建立理想的人乳腺癌CAF体外实验模型。
- 彭琼乐孙艳赵浏阳王黎阳柳满然彭惠民
- 关键词：乳腺癌肿瘤相关成纤维细胞原代培养
