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人IL35-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO／DG44细胞中的稳定表达被引量：2: 2009年; 本研究利用基因重组技术构建人IL35-IgG4(Fc)融合基因真核表达载体,稳定转染CHO/DG44细胞并检测重组蛋白的表达。主要采用聚合酶链式反应(PCR)从脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导的人髓性白血病细胞株KG-IcDNA文库中克隆EBI3和IL-12p35cDNA,重叠PCR法连接2个片段,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVECTM-TOPO载体上,对新构建的IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO真核表达载体并进行酶切、测序、PCR鉴定;脂质体法转染CHO/DG44细胞;RT-PCR检测转染结果,采用a-MEM-培养基筛选实验组细胞,对筛选的阳性克隆细胞再进行氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)的加压筛选,ProteinG-Agarose纯化阳性克隆培养上清,免疫印迹检测目的蛋白表达。结果显示IL-35-IgG4(Fc)pOptiVECTM-TOPO表达载体稳定转染CHO/DG44细胞并获得阳性克隆;SDS-PAGE电泳得到一条与预期相对分子质量大小相符的蛋白条带;该蛋白能与羊抗人IgG4抗体特异结合。本实验获得了能够稳定表达具有稳定结构的IL35-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞株。; 唐静高闻达张青张大为陈洋何波刘全胜; 关键词：重叠PCR 稳定转染

人IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白在CHO/DG44细胞中的表达: 2009年; 【目的】构建人白细胞介素32(IL-32)和IgG4 Fc段的融合基因真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOp-tiVEC,建立稳定转染的中华仓鼠卵巢细胞(CHO/DG44)克隆,并检测其重组蛋白的表达。【方法】用PCR方法从脂多糖(LPS)激活的人CD4+T细胞cDNA中扩增出IL-32蛋白基因,并克隆到IgG4(Fc)-pOptiVEC载体上,构建重组质粒IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,并进行酶切和测序鉴定。采用脂质体法,将重组质粒线性化后转染CHO/DG44细胞,进行RT-PCR检测,筛选阳性克隆,并对筛选的阳性克隆进行氨甲喋呤(MTX)加压筛选。利用ProteinG-Agarose亲和层析纯化转染CHO/DG44细胞培养上清液中的融合蛋白IL-32-IgG4(Fc),通过SDS-PAGE、Western-blot对融合蛋白IL-32-IgG4(Fc)的表达和生物学活性进行检测。【结果】PCR扩增获得了长度为564 bp的人IL-32蛋白基因cDNA,经测序与GenBank报道的序列一致。真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,获得了IL-32蛋白基因片段,其长度为564 bp。筛选出了能稳定表达IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。亲和纯化后的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,其分子质量约为50.0 ku,与预期结果一致。MTX加压后,IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的表达量明显升高。【结论】成功构建了人IL-32蛋白融合基因的真核表达载体IL-32-IgG4(Fc)-pOptiVEC,获得了能够表达具有生物学活性的IL-32-IgG4(Fc)融合蛋白的CHO/DG44细胞克隆。; 张大为高闻达张青唐静陈洋刘全胜; 关键词：融合蛋白真核表达

IL-21/4-IgG4融合基因的真核表达: 2009年; 利用新型细胞因子 IL-21的变异体 IL-21/4与 IgG4构成融合基因IL一21/4一IgG4.将构建好的融合基因载体 poptivec-IL-21/4-IgG4转染到中华仓鼠卵巢细胞中,成功并稳定表达了 IL-21/4-IgG4融合蛋白.; 陈洋唐静张青张大为刘全胜; 关键词：CHO细胞真核表达转染 IL-21 融合基因

EGFP-IgG4融合基因真核表达载体的构建及其表达被引量：3: 2007年; 构建增强型绿色荧光蛋白(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP)和IgG4基因的融合蛋白真核表达载体pMM-EGFP-IgG4/WG,转染至中华仓鼠卵巢细胞(Chinese HamsterOvary,CHO)中成功表达,并发出绿色荧光,证明pMM-EGFP-IgG4/WG是一种良好的生产分泌型外源融合蛋白的阳性对照.; 郑立恒许松梅何波张青熊华辉刘全胜; 关键词：CHO细胞转染

IL-31及其受体研究进展: 2008年; IL-31是一种最近被发现的细胞因子,主要由活化的Th2细胞产生。其功能受体是由IL-31R和OSMR两个亚基组成的异源二聚体复合物。上皮细胞和角质化细胞能组成性地表达这两种受体亚基,而单核细胞只有在活化状态下才能表达。IL-31通过其受体可以激活JAK-STAT、MAPK和P13K/Akt三条信号通路,在皮炎等疾病中发挥作用,同时还具有调节抗原递呈、造血作用、细胞增殖及迁移,诱导趋化因子表达等生物学活性。; 张青熊华辉张大为唐静刘全胜

hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白在DG44细胞中的表达: 2009年; 目的以pOptivec为载体,以DG44细胞为宿主细胞在贴壁培养条件下表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白。方法将重组质粒hTNFR(p75)-IgG4-pOptivec线性化后转染DG44细胞,经筛选得到稳定表达hTNFR(p75)-IgG4融合蛋白的DG44细胞克隆。培养上清经ProteinG亲和层析柱纯化后,进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。然后对稳定表达目的蛋白的细胞株进行不同浓度的MTX加压以扩增目的基因,检测不同MTX加压条件下目的蛋白的表达量。结果重组质粒成功转染DG44细胞,经筛选后得到稳定表达目的蛋白的细胞株。经MTX加压后最高表达量达到15μg/mL培养基左右。结论hTNFR(p75)-IgG4融合基因片段在DG44细胞中成功表达,且其表达量能够满足实验研究的需要,为下一步实验打下了良好的基础。; 张青张大为唐静高闻达刘全胜; 关键词：TNFR 融合蛋白真核表达

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张青

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