张泽华
- 作品数：5 被引量：3H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 中国汉坦病毒H8205株G1、G2-人源IL-2融合基因免疫效果的实验研究被引量：2
- 2007年
- 汉坦病毒属于布尼亚病毒科，可致人类肾综合征出血热和汉坦病毒肺综合征。我国是世界上受其危害最为严重的国家，寻找安全有效的疫苗是控制该病流行和发生的关键，很多学者对此已有所研究。因病毒存在较广泛的变异，故有着良好社会效益的汉坦病毒疫苗应是多价的，因为多价疫苗才能提供最大程度的交叉保护性。
- 熊颖张泽华贾珉黄汉菊
- 关键词：汉坦病毒属免疫效果融合基因汉坦病毒肺综合征
- 汉坦病毒H8205株IL-2/G1融合基因在Vero细胞中的稳定表达
- 2005年
- 目的探讨外源性IL-2/G1融合基因在非洲绿猴肾细胞(Vero)获得稳定表达的可行性,为汉坦病毒基因工程疫苗的研制提供一定的实验基础。方法将汉坦病毒H8205株G1的cDNA重组人源IL-2基因后克隆到真核表达载体pcDNA3.1/His,形成重组真核表达质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1,在脂质体介导下,将其导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,并继续培养6周,然后通过间接免疫荧光、ELSIA、SDS-PAGE电泳等方法检测IL-2-G1基因在Vero细胞中的稳定表达情况。结果成功构建重组质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1,其片段插入方向正确。经间接免疫荧光和SDS-PAGE电泳证实,转染了真核表达质粒pcDNA3.1/His-IL-2-G1后在Vero细胞培养上清和胞浆中有融合蛋白的表达,其相对分子量为78000u,与预期的相符合。经人IL-2ELISA检测试剂盒检测证实在培养上清和细胞裂解物所表达的融合蛋白有IL-2特性。结论在脂质体介导下,外源性IL-2/G1融合基因能够成功导入Vero细胞并获得稳定表达。
- 胡洪波张泽华黄汉菊贾珉刘广
- 关键词：汉坦病毒VERO细胞
- 中国汉坦病毒H8205株G1-G2-人源ⅠL-2融合基因DNA免疫的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的评价融合基因pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2的DNA免疫效果。方法肌注免疫小鼠,分次采血,用酶联免疫法(ELISA)直接免疫酶斑减少中和试验检测小鼠体液免疫;淋巴细胞增殖试验(MTT法)检测其细胞免疫应答。免疫后第六周感染病毒。间接免疫荧光试验(IFIA)观察免疫小鼠抗病毒感染能力。结果pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2可诱导小鼠产生特异性抗汉坦病毒抗体和中和抗体,其效价均高于其他对照组,差异显著(P<0.05)。MTT实验表明,pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2诱导小鼠脾细胞对病毒抗原的增殖指数明显高于其他对照组。IFIA结果显示免疫小鼠对病毒攻击有保护性。结论pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答,为新一代汉坦病毒(HTV)DNA疫苗开发提供了实验依据。
- 张泽华贾珉黄汉菊胡洪波
- 关键词：汉坦病毒融合基因DNA免疫
- 汉坦病毒H8205株G1-G2/人源白细胞介素2融合基因的稳定表达和免疫效果
- 2007年
- 目的:探讨汉坦病毒H8205株G1-G2/人源性白细胞介素2(IL-2)融合基因在非洲绿猴肾(Vero)细胞获得稳定表达的可能性,评价融合基因pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2的DNA免疫效果。方法:在脂质体介导下,将pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用间接免疫荧光(IFAT)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)等方法检测其在Vero细胞中稳定表达的情况。采用肌肉注射质粒的方法来免疫Balb/c小鼠,免疫3次,加强2次,间隔2周,然后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清特异性抗体,用空斑减少中和试验检测中和抗体。结果:转染了pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2后在Vero细胞培养上清和胞质中有融合蛋白的表达,其相对分子量为110 ku。pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2可诱导小鼠产生特异性抗汉坦病毒抗体和中和抗体,其效价均高于其他对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:融合基因在脂质体介导下能导入Vero细胞并获得稳定表达。融合基因真核载体疫苗免疫Balb/c小鼠可诱导特异性体液免疫应答,为进一步将其用于我国汉坦病毒疫苗研制提供了依据。
- 熊颖张泽华黄汉菊
- 关键词：汉坦病毒融合基因
- 汉坦病毒H8205株G1-人源IL-2融合基因疫苗的免疫效应被引量：3
- 2005年
- 目的探讨汉坦病毒H8205株G1人源IL2融合基因疫苗(pcDNA3.1/HisB IL2G1)的免疫效应。方法将pcDNA3.1/HisB IL2G1融合基因疫苗通过肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次;酶联免疫法(ELISA)检测抗汉坦病毒(HTNV)抗体;空斑减少中和试验检测免疫血清中和抗体效价;淋巴细胞增殖试验(MTT法)检测免疫小鼠的细胞免疫反应;动物保护试验以BALB/c小鼠为感染动物模型,在第3次免疫后2周,腹腔内注射100TCID50(半数感染量)HTNV,然后以免疫荧光法观察鼠肾切片,评价其保护力。结果pcDNA3.1/HisB IL2G1融合基因疫苗免疫后可刺激机体产生特异性抗体和中和抗体,中和效价为1∶20～1∶80。MTT法结果表明,免疫小鼠的脾淋巴细胞有特异性增殖反应。动物试验表明pcDNA3.1/HisB IL2G1融合基因疫苗能保护小鼠免受HTNV感染。结论pcDNA3.1/HisB IL2G1融合基因疫苗可诱导特异性体液免疫应答和较强的细胞免疫应答。
- 贾珉张泽华胡洪波黄汉菊任刚
- 关键词：汉坦病毒基因疫苗
