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张余琴: 作品数：16 被引量：57H指数：5; 供职机构：南方医科大学南方医院更多>>; 发文基金：广东省自然科学基金国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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MiR-20a通过激活PTEN/PI3K/AKT信号通路降低鼻咽癌细胞辐射敏感性: 目的鼻咽癌是我国南部及东南亚地区常见头颈部恶性肿瘤之一,由于其发病部位隐匿,周围结构复杂,给手术造成极大困难,目前放疗仍为其首选治疗手段,但放疗抵抗限制了其疗效.microRNA (miRNA)一类广泛存在于动植物体内...; 张余琴郑林丁轶陈龙华

Tiam1截短体融合蛋白的原核表达与纯化被引量：5: 2017年; 目的 Tiam1是一种鸟嘌呤核苷酸转换因子,与肿瘤的侵袭和转移密切相关。文中构建Tiam1基因的截短体原核表达重组质粒,在大肠埃希菌中诱导蛋白表达,并对GST融合蛋白进行纯化和鉴定。方法采用PCR方法扩增Tiam1的C685、C751、C1199基因片段,将目的基因片段插入p GEX-4T-1质粒载体后转化大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞,用IPTG诱导蛋白表达。利用谷胱甘肽琼脂糖珠进行分离纯化,再采用Western blot检测目的蛋白表达情况。结果构建了3个Tiam1基因的截短体重组质粒,IPTG诱导显示,GST-Tiam1 C685、GST-Tiam1 C751、GST-Tiam1 C1199主要以可溶性蛋白形式在细胞裂解液上清中表达,表达产物的相对分子量分别为100 000、108 000、157 000。结论成功构建可以表达生物活性蛋白的GST-Tiam1 C685、GST-Tiam1 C751、GST-Tiam1 C1199融合蛋白原核表达载体,为进一步研究Tiam1蛋白奠定了基础。; 黄静张余琴陈龙华丁轶; 关键词：TIAM1 原核表达融合蛋白

MiR-20a激活PTEN/PI3K/AKT通路诱导肝癌辐射抵抗: 背景及目的:　　原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC;简称肝癌）是全球发病率最高的几大恶性肿瘤之一，其死亡率位居全球恶性肿瘤死亡的第3位。我国为“乙肝大国”，是肝癌的高发地区，发病率和...; 张余琴; 关键词：肝癌 PTEN基因 AKT基因

红色荧光蛋白和荧光素酶双报告基因转基因小鼠的建立被引量：5: 2012年; 背景与目的:活体动物体内光学成像(optical in vivo imaging)主要采用生物发光与荧光两种技术。生物发光是用荧光素酶(luciferase,Luc)基因标记细胞或DNA,而荧光技术则采用荧光报告基团(GFP、RFP、Cyt及dyes等)进行标记,利用一套非常灵敏的光学检测仪器,能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为,生物发光成像具有高的灵敏度和特异性,同时生物发光信号可用于精确定量,而荧光成像具有方便、便宜、直观、标记靶点多样和易于被大多数研究人员接受的优点。本研究基于慢病毒介导的转基因方法制备红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)和Luc双报告基因转基因小鼠(即RL转基因小鼠),将这两种技术融为一体。方法:制备携带RFP和Luc基因(简写RL基因)的慢病毒,然后将携带RL基因的慢病毒注入小鼠单细胞受精卵卵周隙以感染受精卵,胚胎移植进假孕母鼠以获得仔鼠,应用小动物活体成像仪、体视荧光显微镜和PCR等在蛋白和DNA水平上筛选和鉴定,并获得RL转基因小鼠。结果:移植卵周隙注射有慢病毒的胚胎125枚给6只假孕母鼠,其中4只假孕母鼠怀孕,共生仔鼠20只;利用小动物活体成像仪检测RFP和Luc表达,在蛋白水平证实20只F0代中,3只高表达RFP和Luc;DNA水平检测证实,3只RFP和Luc阳性的小鼠基因组中确实整合有外源转基因RL,预示基因型鉴定结果很好验证了小动物活体成像仪筛选和鉴定结果。此外,RL转基因首建鼠基因组中整合的RL转基因可稳定遗传至下一代,并能正常表达。RL转基因小鼠主要脏器均可见红色荧光和Luc信号,但不同脏器间荧光和Luc强度有差异。结论:成功制备RL双报告基因转基因小鼠,为后续研究干细胞在肿瘤发生、发展和转移中的作用和造血重构等提供双报告基因标记的各种移植用供体细胞,并对此供体细胞及其在体内衍生的细胞进行灵敏的非损伤、实时可视�; 张余琴林晓琳贾俊双谢饶英樊全荣赵尊兰杨升高飞姚开泰肖东; 关键词：红色荧光蛋白荧光素酶肿瘤干细胞转基因小鼠

PET/CT图像分割技术在NSCLC患者放疗中的应用被引量：2: 2021年; 目的探讨PET/CT图像分割技术在非小细胞肺癌(NSCLC)患者放疗中的应用价值。方法将2016年6月至2020年2月我院的NSCLC患者118例随机分为研究组与对照组,各59例,对照组行常规CT检查,根据所得影像手动分割癌灶靶区,研究组行PET/CT检查,根据所得影像分别用手动和计算机自动化程序分割癌灶靶区,对照组以CT手动分割图像制定放疗计划,研究组以PET/CT自动分割图像制定放疗计划,比较三种分割图像所得的靶区体积与两组正常组织放疗剂量分布,记录比较两组放疗后2个月内并发症的发生情况。结果研究组手动、自动分割靶区体积均明显小于对照组(P<0.05);研究组中,PET/CT图像手动分割与自动分割的靶区体积无明显差异(P>0.05);研究组正常组织放射剂量明显低于对照组(P<0.05);放疗后2个月内研究组并发症发生率明显低于对照组(P<0.05)。结论 PET/CT图像分割技术能提高NSCLC患者癌灶靶区的定位精度,降低放疗中正常组织受累剂量,减少放疗后相关并发症。; 陈韦翔张余琴张煜; 关键词：非小细胞肺癌放疗

携带Fluc和ZsGreen双报告基因小鼠iPS细胞系的建立被引量：2: 2013年; 背景与目的:诱导性多潜能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS细胞)在修复受损组织器官和治疗人类疾病方面已展示了良好的应用前景,但iPS细胞具有形成畸胎瘤的作用,这是其安全应用于临床的巨大障碍之一。为此本研究拟利用慢病毒体外感染的方法,建立携带萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,ZsGreen)双报告基因的小鼠iPS细胞系,为活体动态监测畸胎瘤形成、定植和形成畸胎瘤所需最小细胞剂量等提供实验基础。方法:构建含Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。以pLH2BmRFP质粒为模板,PCR扩增获得Fluc基因片段,将其克隆至利用BamHⅠ酶切的pHAGE-fullEF1a-MCS-IZsGreen质粒中,挑选一个阳性克隆质粒进行测序,最终获得携带双报告基因的慢病毒载体pEF1a-Fluc-IRES-ZsGreen(pELZG)。采用脂质体介导的瞬时转染生产携带Fluc和ZsGreen基因的病毒,收集病毒上清,并感染iPS细胞,数天后荧光显微镜下观察是否有绿色荧光的iPS细胞克隆,不断挑取ZsGreen阳性的iPS细胞克隆以进一步纯化。将标记好的iPS细胞移植入裸鼠皮下,观察成瘤情况。结果:pELZG载体分别经XbaⅠ、PvuⅡ、SacⅠ单酶切,得到的片段大小分别为10.005、3.282和6.723 kb,2.441、3.401和6.604 kb,预示成功构建了Fluc和ZsGreen双报告基因的慢病毒载体。利用其生产的病毒上清成功感染iPS细胞,经过不断的纯化,最终获得含稳定表达Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系。将标记好的iPS细胞植入裸鼠皮下后,观察到畸胎瘤的形成。结论:成功建立了携带Fluc和ZsGreen双报告基因的小鼠iPS细胞系,为相关后续研究打下了良好的基础。标记后的iPS细胞对畸胎瘤的形成和发展具有很好的示踪作用。; 樊全荣史俊文贾俊双高飞张余琴赵尊兰姚开泰肖东; 关键词：萤火虫荧光素酶 293T细胞诱导性多潜能干细胞畸胎瘤

建立慢病毒介导的miR-145稳定过表达的鼻咽癌细胞株: 2012年; 目的构建过表达miR-145的慢病毒载体,建立稳定过表达miR-145的鼻咽癌细胞株。方法构建慢病毒表达质粒pLVTHM/miR-145;293FT细胞进行慢病毒包装,生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,经流式细胞仪筛选后,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株;最后应用荧光定量PCR检测病毒感染后鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2中miR-145的表达水平。结果荧光定量PCR结果和测序验证pLVTHM/miR-145重组质粒构建成功;包装生产的慢病毒感染鼻咽癌细胞CNE1和CNE2后,与阴性对照组比较,其表达水平分别升高4000倍和4500倍。结论成功构建了pLVTHM/miR-145慢病毒重组质粒,建立稳定表达miR-145的鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2,为研究miR-145在鼻咽癌发生发展过程中的基因调控和相应的作用机制提供了有用的细胞模型。; 苏艳王硕刘英文军张余琴陈佩娟; 关键词：慢病毒鼻咽癌细胞 MIR-145

同步推量调强放疗联合化疗治疗局部中晚期宫颈癌的疗效和安全性被引量：18: 2017年; 目的:回顾性分析同步推量调强放疗联合化疗治疗局部中晚期宫颈癌的临床疗效和安全性。方法 :研究对象为2012年1月—2014年1月在暨南大学附属第一医院接受治疗的局部中晚期宫颈癌患者92例,其中研究组68例接受同步推量调强放疗联合紫杉醇脂质体和洛铂同步放化疗,对照组24例接受三维适形放疗联合紫杉醇脂质体和洛铂同步放化疗。比较2组的临床疗效、生存情况和安全性。结果 :研究组临床总有效率为85.29%,显著优于对照组的58.33%(P=0.022)。研究组患者的中位生存期为31个月,明显优于对照组患者的25个月。研究组患者的骨髓抑制发生率低于对照组,差异有统计学意义(P=0.041)。研究组患者的胃肠反应发生率与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.704)。研究组患者的放射性直肠炎和膀胱炎发生率明显低于对照组,差异有统计学意义(P值分别为0.001和0.018)。结论 :同步推量调强放疗联合化疗治疗局部中晚期宫颈癌患者的疗效显著,患者耐受性较好,不良反应较轻,值得在临床上进行推广。; 刘瑛张余琴杨振华张荣王倩王奕鸣; 关键词：紫杉醇脂质体洛铂

miR-20a通过靶向抑制PTEN诱导肝癌细胞放射抵抗被引量：5: 2018年; 目的探讨miR-20a在肝癌放射敏感性中的作用及机制.方法荧光定量PCR检测肝癌细胞系和组织标本中miR-20a的表达;构建稳定过表达miR-20a肝癌细胞系,通过克隆实验探讨miR-20a对肝癌细胞放射敏感性影响;蛋白印记法检测Bcl-2、Caspase-3以及 γ-H2AX的表达;生物信息学预测miR-20a下游调控的靶基因,双荧光素酶报告系统、荧光定量PCR及蛋白印记法进一步验证;在稳定过表达miR-20a的肝癌细胞系中转染pCDNA3.0-PTEN探讨细胞放射敏感性的变化,明确PTEN是否为miR-20a诱导肝癌放射抵抗的一个功能性靶基因.结果 miR-20a在肝癌细胞系和组织标本中表达上调（P〈0.05）;经过同等条件的放射处理后,与空白及对照组（WT组、LV-con组）相比,过表达miR-20a组（LV-miR-20a组）细胞存活分数升高,放射抵抗增强（P〈0.05）,Bcl-2表达上调,Caspase-3及 γ-H2AX表达下调;过表达PTEN能够逆转miR-20a引起的放射抵抗.结论 miR-20a在肝癌细胞系及组织标本中表达上调;过表达miR-20a可以促进肝癌细胞放射抵抗,PTEN是miR-20a诱导肝癌放射抵抗的一个功能性靶基因,预示着miR-20a/PTEN位点可能是是肝癌临床放疗相关的有效分子靶点.; 张余琴陈龙华丁轶郑林; 关键词：PTEN基因肝癌细胞系

人参皂甙Rg1对Cdk5的调控在海马神经元放射性损伤防护中的意义被引量：1: 2014年; 目的探讨人参皂甙Rg1对Cdk5的调控在海马神经元放射性损伤防护中的意义.方法通过建立放射性脑损伤的体内模型,将40只实验大鼠按随机数字表法分为4组,每组10只,即：0Gy组（简称空白组）,单纯人参皂甙Rg1预处理组（简称对照组）,30Gy组（简称模型组）,30Gy＋人参皂甙Rg1预处理组（简称中药组）,分离、培养海马神经元,用4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染核方法检测各组海马神经元凋亡情况,采用Western blot检测p35、p25蛋白表达以及应用Cdk5抑制剂roscovitine抑制Cdk5,观察阻断Cdk5后X射线对各组海马神经元损伤的改变.结果与空白组比较,对照组的核固缩百分数、神经元存活数目、p35、p25蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组与中药组的核固缩百分数、p35、p25蛋白水平则明显升高,神经元存活数目明显降低,且差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,中药组的核固缩百分数、p35、p25蛋白水平明显降低,神经元存活数目则明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;单就各组＋二甲基亚砜（DMSO）而言,与空白组＋ DMSO比较,对照组＋DMSO的核固缩百分数差异无统计学意义（P＞0.05）,模型组＋DMSO与中药组＋DMSO则明显升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组＋ DMSO比较,中药组＋DMSO的核固缩百分数明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论人参皂甙Rg1可通过调控Cdk5,降低神经元凋亡,而在海马神经元放射性损伤中发挥防护作用.; 孙爱民李传刚林水苗张余琴夏琼; 关键词：人参皂甙细胞周期蛋白质依赖激酶类海马神经元中药疗法

张余琴

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