屠发志
- 作品数：14 被引量：36H指数：3
- 供职机构：中国热带农业科学院热带生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 用pGAP启动子在P.pastoris中组成型表达cbhⅡ基因
- 2010年
- 用套叠PCR法扩增木霉的cbh Ⅱ基因,以EcoR I和Not I双酶切将其克隆进P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP-cbh Ⅱ。通过电转法将其cbhⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的克隆作为工程菌。用葡萄糖作为碳源摇瓶发酵3 d,分泌的重组蛋白CBHⅡ达到50 mg/L。用CMC酶活法测定发酵液中的CMC酶活力为2.05 U/mL。
- 易国辉屠发志张爱联张添元屈直罗进贤
- 关键词：毕赤酵母基因表达酶活力
- 植物表观遗传与DNA甲基化被引量：16
- 2007年
- 表观遗传在植物生长发育过程中起着极其重要的作用。甲基化是基因组DNA的一种主要表观遗传修饰形式,是调节基因功能的重要手段。介绍了植物体中胞嘧啶甲基化现象,RNA指导的DNA甲基化的信号分子、作用机制,以及与RNA介导的基因沉默机制之间的区别和RNA对转座子的表观控制。
- 屠发志彭世清
- 关键词：表观遗传DNA甲基化基因沉默
- 纤维素酶系酿酒酵母载体的构建以及Pichia pastoris工程菌表达纤维素酶
- 乙醇是当前正在大力推广应用的可再生能源之一。纤维素质物质是地球上最大量可再生的生物质资源。纤维素质物质中的纤维素在纤维素酶的作用分解成葡萄糖,而葡萄糖可以通过发酵酿造酒精。
纤维素酶是一类复合酶,含有三...
- 屠发志
- 关键词：纤维素酶组成型表达
- 文献传递
- 一种提高植物发酵沼气产量的方法
- 本发明公开了一种提高植物发酵沼气产量的方法。属生物技术领域。首先克隆白腐真菌的木质素过氧化物酶基因和猛过氧化物酶基因，枯草芽孢杆菌的漆酶基因和木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β葡萄糖苷酶基因；构建含以上六种基因...
- 张爱联屠发志易国辉符仙张泽华张添元尹慧祥罗进贤杨穗珊
- 文献传递
- 高密度发酵P.pastoris组成型表达纤维素二糖水解酶
- 2010年
- 用PCR法扩增里氏木霉cbhⅡ基因,并将其克隆到P.pastoris表达载体pGAP9K,获得重组表达质粒pGAP9K-cbhⅡ。通过电转法将cbhⅡ基因整合到P.pastoris的基因组中,然后筛选高G418抗性的克隆作为工程菌菌种。在生物反应器中生产CBHⅡ,将20L发酵液装入50L的发酵罐中,在发酵过程中连续64h补加甘油-PTM4,放罐时生物量为A600=170,CBHⅡ的表达量为75mg/L。其表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
- 崔艳艳易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联
- 关键词：毕赤酵母基因表达
- 应用毕赤酵母的pGAP调控表达β－葡萄糖苷酶的方法
- 本发明公开了一种应用毕赤酵母的pGAP调控表达β－葡萄糖苷酶的方法，属生物技术领域，首先从毕赤酵母中扩增pGAP启动子；构建由pGAP调控β－葡萄糖苷酶基因的毕赤酵母表达载体，并将这一载体转化毕赤酵母基因组；根据载体上所...
- 张爱联罗进贤张添元屠发志易国辉
- 文献传递
- 以甘油为碳源发酵Pichia pastoris组成型表达人血管生成抑制素被引量：8
- 2007年
- 在Pichia pastoris组成型表达外源蛋白中碳源起着重要的调控作用。分别以葡萄糖、甘油、甲醇和油酸为碳源研究它们对摇瓶发酵GS115(pGAP9K-AS)表达hAS的影响。结果如下:油酸(163mg/L),甘油(83mg/L),葡萄糖(76mg/L),甲醇(57mg/L)。根据以上结果,以甘油为碳源在30L生物反应器中进行GS115(pGAP9K-AS)工程菌的高密度发酵。48h后测得hAS的产量为169mg/L。产物hAS具有免疫活性并能抑制bFGF诱导的CAM血管生成和实验小鼠黑色素瘤的生长。治疗12d后,抑瘤率达到90%,统计学分析结果表明hAS治疗组和PBS治疗组小鼠的肿瘤体积呈现显著性差异(P<0.01)。
- 屠发志符策奕张添元罗进贤张爱联
- 关键词：血管生成抑制素组成型表达PICHIAPASTORIS甘油
- 巴西橡胶树环锌指蛋白基因克隆及其分子特性(英文)被引量：9
- 2006年
- 在先前的研究中通过抑制缩减杂交获得了一个在巴西橡胶树胶乳中特异表达的片段(HbSSH10),该片段含有“RINGfinger”或“C3HC4”保守序列。根据HbSSH10的序列信息设计引物并通过3'-RACE和5'-RACE的方法,获得了一个全长的cDNA(HbRZF)。该cDNA含有589个核苷酸,含有完整的阅读框架,编码156个氨基酸。从它推导出的氨基酸序列中含有“RINGfinger”或“C3HC4”保守区(氨基酸100￣144)。该氨基酸序列与Poncirustrifoliata、Arabidopsisthaliana和Thellungiellahalophila的环锌指蛋白的同源性分别为48%、52%和50%。Northern杂交分析表明HbRZF在胶乳中大量表达,在叶片中微量表达,而在根和花中几乎没有表达。茉莉酸处理可以诱导胶乳中HbRZF的表达,而乙烯对胶乳中HbRZF的表达基本上没有影响。
- 朱家红李辉亮屠发志田维敏彭世清
- 关键词：巴西橡胶树锌指蛋白克隆
- 一种利用植物纤维素和半纤维素生产乙醇的方法
- 本发明属于生物技术领域，具体是一种利用植物纤维素和半纤维素生产乙醇的方法，首先对系列酶基因进行扩增，分别构建由pGAP调控的酿酒酵母表达载体，并转化为酿酒酵母基因组；经验证、筛选后得到酿酒酵母工程菌；将植物或植物废弃物于...
- 张爱联屠发志易国辉屈直张添元罗进贤崔艳艳张泽华马德勇
- 文献传递
- 高密度发酵P.pastoris诱导表达egⅡ基因
- 2011年
- 用套叠PCR法扩增里氏木霉(Trichoderma reesei)的葡聚糖内切酶Ⅱ(egⅡ)基因。扩增基因经EcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后克隆进P.pastoris表达载体pPIC9k,获得重组表达质粒pPIC9K-egⅡ。通过电转法将egⅡ基因重组于P.pastoris基因组,筛选高G418抗性的转化子作为工程菌。工程菌的发酵在生物反应器中进行,在50 L的发酵罐中加入20 L发酵液。连续24 h补加甘油-PTM4增殖细胞,然后以甲醇为碳源诱导egⅡ基因表达48 h。放罐时生物量为A_(600)=203,重组EGⅡ产量为90 mg/L。表达产物具有酶解羧甲基纤维素的活性。
- 尹慧祥易国辉屠发志张添元罗进贤张爱联
- 关键词：里氏木霉葡聚糖内切酶基因表达P.PASTORIS高密度发酵
