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抗菌肽Cecropin D在毕赤酵母中的表达、纯化及活性鉴定被引量：18: 2008年; 目的在毕赤酵母GS115中表达抗菌肽Cecropin D,并检测其抗菌活性。方法根据毕赤酵母密码子的偏爱性,人工合成6条寡聚核苷酸片段,经磷酸化、退火、连接并克隆入酵母表达载体pPIC9K。重组表达质粒pPIC9K-D转化至毕赤酵母菌GS115,经G418筛选,阳性高拷贝克隆用0.5%的甲醇诱导表达,表达产物经CM-Sepharose层析柱纯化,Tricine-SDS-PAGE分析,琼脂糖扩散法和比浊法测定其抗菌活性。结果经Tricine-SDS-PAGE检测,在相对分子质量3900左右处可见目的蛋白表达条带,纯化后的目的蛋白纯度达90%以上,获得的抗菌肽Cecropin D对一些革兰阳性菌和革兰阴性菌均有抑菌活性。结论抗菌肽Cecropin D成功地在毕赤酵母中分泌表达,为以后深入研究抗菌肽奠定了基础。; 尹娜李鸿钧彭梅谢天宏张光明施锐孙茂盛; 关键词：抗菌肽 CECROPIN 毕赤酵母分泌表达

Ad-NTN-TH联合干细胞治疗帕金森氏病模型猴的研究: 李鸿钧周艳孙茂盛吴晋元和占龙尹娜鲁帅尧; 帕金森氏病（PD）是一种中老年常见的慢性神经系统退行性疾病。中国帕金森病患者总人数约在170万-200万之间。现在临床治疗方法在一定时间内可改善症状，但不能从根本上去除病因，也不能延缓疾病的进程。因此，寻找一种有效的治疗...; 关键词：; 关键词：帕金森氏病干细胞治疗细胞移植治疗神经系统退行性疾病

表达神经营养因子Neurturin的骨髓间充质干细胞的构建及体外活性检测被引量：1: 2012年; 研究神经营养因子Neurturin(NTN)在由于神经元损伤而造成的神经退行性疾病中对神经元的保护和修复作用。利用重组腺病毒载体将NTN基因转入恒河猴骨髓间充质干细胞(rMSC),通过RT-PCR、IF及Western blot方法检测NTN的转录和表达,并采用鸡胚背根神经节体外培养实验和胚胎大鼠中脑多巴胺能神经元存活实验对NTN进行体外活性检测。结果表明NTN在rMSC中稳定表达和分泌,并具有体外生物学活性,为由于神经元损伤造成的神经退行性疾病的干细胞移植治疗奠定了一定的基础。; 王晚璞孙茂盛李鸿钧谢天宏严敏周艳尹娜; 关键词：重组腺病毒神经营养因子 NEURTURIN 活性检测

神经营养因子Neurturin在Vero细胞中的表达及其生物学活性研究: 2009年; 目的探讨Neurturin(NTN)基因转染Vero细胞后的表达情况,为恒河猴帕金森病(PD)基因治疗打下基础。方法将表达载体pcDNA3-hNTN转染Vero细胞,挑选稳定表达克隆,用RT-PCR及免疫荧光分析鉴定,并对表达的人NTN蛋白进行了体外生物学活性测定。结果pcDNA3-hNTN质粒转染Vero细胞后获得了稳定表达克隆且有目的蛋白hNTN表达,表达的hNTN在体外能够促进培养的鸡胚背根神经节长出神经突起,并能促进体外培养的胚胎中脑多巴胺能神经元的存活。结论获得了能稳定表达NTN蛋白的Vero细胞株,其表达的hNTN对体外培养的中脑多巴胺能神经元具有保护作用,为移植并进行PD猴基因治疗动物实验打下了基础。; 谢天宏马开利尹娜施锐王晚璞王文举严敏孙茂盛李鸿钧; 关键词：NEURTURIN VERO细胞生物学活性帕金森氏病

肠道病毒71型类病毒颗粒在昆虫细胞Sf9中的表达被引量：1: 2011年; 目的构建含有肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)P1和3CD基因的嵌合型重组杆状病毒质粒,探讨3CD蛋白酶对P1蛋白的切割作用及形成类病毒颗粒(Virus-like particles,VLPs)的可能性。方法将EV71的P1和3CD基因克隆至同一pFastBac Dual质粒上,转化感受态大肠杆菌DH10,构建重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD,转染昆虫细胞Sf9,制备重组杆状病毒,经SDS-PAGE、Western blot及电镜对目的基因表达产物进行分析。结果重组杆状病毒质粒Bac-P1-3CD经PCR鉴定证明构建正确。重组杆状病毒感染的Sf9细胞经SDS-PAGE分析,可见相对分子质量约39 000、32 000和26 000的特异条带,大小与EV71的VP1、VP0、VP3蛋白相符;Western blot分析可见与EV71 VP1蛋白大小相近的特异条带;电镜观察可见EV71类病毒颗粒。结论 EV71的P1和3CD嵌合基因可以通过重组杆状病毒在昆虫细胞中表达,3CD蛋白酶可以切割P1蛋白得到VP1抗原,并能形成类病毒颗粒。; 徐婧雯李鸿钧谢天宏张光明尹娜孙茂盛; 关键词：P1基因类病毒病毒粒子

调控自身增殖的轮状病毒编码的小RNA分子: 本发明涉及生物医药领域，尤其是一种由病毒自身编码的小RNA分子。本发明公开了一种调控自身增殖的轮状病毒编码小RNA分子，命名为 RV‑vsRNA1755，其特征在于其核苷酸序列为：5‘ATTCAGGATCCTGGAATG...; 周艳耿盼盼李鸿钧吴晋元刘雅玲解裕萍尹娜易山孙茂盛; 文献传递

血管紧张素Ⅱ基因重组杆状病毒的构建: 2013年; 目的构建携带血管紧张素I(IAngiotensin Ⅱ,AngⅡ)基因的重组杆状病毒,并利用Bac-to-Bac重组杆状病毒表达系统进行表达。方法将重组杆粒bacmid-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rB/HAngⅡ)转染昆虫细胞sf9,包装出重组杆状病毒rBac-P1-2A-4AngⅡs-3ABC(rBAV),通过光学显微镜和透射电镜观察细胞病变(CPE)及病毒形态,采用蚀斑试验检测病毒滴度,PCR及间接免疫荧光技术验证该病毒及感染细胞中AngⅡ和HAV蛋白的表达。结果重组杆粒rB/HAngⅡ转染sf9细胞96 h后,出现典型的CPE;透射电镜下观察可见典型的杆状病毒颗粒;PCR可特异性的扩增出约3 000和1 000 bp的P1-2A-4AngⅡs和3ABC基因片段;P3代重组杆状病毒滴度约为4×108pfu/ml;感染后的sf9细胞中可见特异性的绿色荧光(AngⅡ蛋白)和红色荧光(HAV结构蛋白)。结论已成功构建了携带AngⅡ基因的重组杆状病毒,并在sf9细胞中获得表达,为研制抗高血压疫苗提供了新的思路。; 欧霞Yuri Kusov郭莉莉米锴吴晋元尹娜张光明李鸿钧孙茂盛; 关键词：杆状病毒表达系统

表达膜抗AchR抗体的杂交瘤细胞株的建立被引量：2: 2010年; 目的建立表达膜特异性自身抗体的细胞株。方法用DNA重组技术表达乙酰胆碱受体α亚基,并用其免疫小鼠。应用杂交瘤技术,建立小鼠脾细胞融合的杂交瘤细胞株。通过流式细胞术分析杂交瘤细胞膜抗体和膜免疫球蛋白的表达,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分析膜抗体和分泌型抗体分子质量的差别,用免疫沉淀和W estern b lot等方法鉴定膜蛋白和分泌蛋白。结果杂交瘤细胞既可以分泌抗体又可以表达膜抗体。结论表达膜抗AchR的杂交瘤细胞类似于重症肌无力中表达膜自身抗体的B细胞,可进一步作为靶细胞研究该疾病。; 赵青尹娜张伟; 关键词：杂交瘤细胞重症肌无力

分泌抗人乙酰胆碱受体抗体骨髓杂交瘤细胞的制备及鉴定: 2010年; 目的:从大鼠骨髓制备抗人乙酰胆碱受体(AchR)的单克隆抗体。方法:在E.coli中表达人AchRα1亚基,Ni-NTA层析纯化包涵体,并经透析复性。用所纯化的蛋白免疫Lewis大鼠诱导重症肌无力,免疫后大鼠的脾脏和骨髓分别与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体。结果:成功在E.coli中表达了人AchRα1亚基的膜外区,用复性蛋白免疫大鼠诱导出重症肌无力症状。用免疫大鼠的脾脏和骨髓分别制备了单克隆抗体。结论:可以用制备杂交瘤的方法将骨髓B细胞永生化,为进一步研究重症肌无力发病机理和检测奠定了基础。; 赵青尹娜张伟; 关键词：ACHR 骨髓杂交瘤重症肌无力

一株人源性轮状病毒的分离及适应性培养被引量：3: 2013年; 目的:研究轮状病毒野毒株的分离方法、组织培养适应条件及相应生物学性质。方法:对收集的样品采用胶体金、PCR、PAGE进行轮状病毒定性检测。阳性样品按常规方法处理并进行组织培养分离,对不同传代样品做基因组图谱、基因序列、病毒增殖动力学分析评价,采用轮状病毒P[8]G1型阳性血清进行病毒中和鉴别试验。结果:通过检测为A组轮状病毒,基因组为4∶2∶3∶2排列,基因分型G1P[8]型,在MA104细胞中传代后转至Vero细胞上适应培养可观察到CPE;电镜观察可见典型轮状病毒形态。毒株在Vero细胞上增殖到第10代,复制稳定,且感染性滴度达到7.25 log CCID50/ml,增殖高峰为96h。中和鉴别试验证实病毒培养液只包含轮状病毒,无其他病毒污染。结论:从腹泻样品中分离得到一株人源轮状病毒毒株,命名为ZTR-68株,该分离株具有良好的组织培养适应性,遗传稳定性,为进一步研究其生物学性质和疫苗制备提供了基础。; 李松张光明吴晋元尹娜易山米锴曹颖李杨孙茂盛李鸿钧; 关键词：轮状病毒 VERO细胞

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尹娜

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