孟越
- 作品数：20 被引量：41H指数：4
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- 乳鼠成骨细胞酵母双杂交cDNA文库构建被引量：1
- 2013年
- 目的构建乳鼠成骨细胞的酵母双杂交cDNA文库。方法用TRIzol法提取乳鼠成骨细胞总RNA，按照SMART cDNA Library Construction Kit （CLONTECH）说明书反转录合成双链cDNA，Spin Column去除短片段，然后用同源重组的方法将双链cDNA和PGADT7-rec载体共转化到酵母细胞Y187中，建立文库并计算文库滴度。结果提取的总RNA的A260／A280为1．99，琼脂糖凝胶电泳示28SrRNA、18SrRNA2条带，且28S与18S带亮度比值约为2。酵母文库库容为1．68×10^7，重组率为100％。插入片段PCR检测提示大小分布为1．5-4．0kb，平均长度约为3．0kb。结论乳鼠成骨细胞酵母双杂交cDNA文库构建成功。
- 林振江建明袁亮冯瑞强付兆宗孟越杨德鸿
- 关键词：成骨细胞CDNA文库酵母双杂交
- 甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡被引量：2
- 2016年
- 目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路(PTH/non PLC/PKC)是否会对成骨细胞(MC3T3-E1)的凋亡以及细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状态,随机分为5组:按100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-28);100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-34);100 nmol/L[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+1μmol/L Go6983,1μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数试剂盒(CCK-8)和Caspase-Glo®3/7试剂盒(caspase-3)检测细胞的细胞数量与凋亡。结果 CCK-8检测结果显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异,48 h[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-28)组相比,可以明显提高细胞的数量(P<0.05)。进一步的研究发现在[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组添加抑制剂Go6983后,细胞数量增多的效应消失(P<0.05)。Caspase-3检测凋亡结果显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡(细胞凋亡受到抑制),但是差异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,[Gly1,Arg19]h PTH(1-34)组与[Gly1,Arg19]h PTH(1-28)组相比,前者可以明显抑制细胞凋亡(P<0.05),给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论 PTH的non PLC/PKC信号转导通路可能在长时间(48 h)作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。
- 胡少宇童国军孟越郝松李威许伏龙何友华陈建庭杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺激素凋亡信号转导通路
- 肺癌骨转移小鼠模型的建立被引量：7
- 2014年
- 目的通过短暂免疫抑制,在免疫功能正常小鼠复制肺癌骨转移模型。方法 6周龄雌性C57BL/6J小鼠40只,随机分为对照组(CON)、低剂量免疫抑制组(C100/D50)、中等剂量免疫抑制组(C150/D100)及高剂量免疫抑制组(C200/D150)。低剂量免疫抑制组、中等剂量免疫抑制组及高剂量免疫抑制组在实验的第1天分别腹腔注射环磷酰胺(CTX)100、150、200 mg/kg,在次日分别注射地塞米松钠(DXM)50、100、150 mg/kg,连续注射3 d。对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水。第5天,取对数生长期的人肺腺癌A549细胞,注射1.0×109个/L浓度的细胞悬液于小鼠右后肢胫骨平台下。造模后第28天进行影像学测定并取材,评估骨质缺损程度,HE染色及免疫组织化学法观察肿瘤形态,并通过检验学指标评估骨破坏程度。结果在肿瘤注射过程中除对照组外每组各有1只死亡。试验结束时对照组小鼠全部存活;C100/D50组小鼠9只存活,仅有1只成瘤;C150/D100组小鼠存活8只,7只成瘤;C200/D150组小鼠存活4只,全部成瘤。中、高剂量免疫抑制组的小鼠体重降低明显,与其他组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。X线及显微CT可见中、高剂量免疫抑制组小鼠胫骨平台下出现明显的骨缺损与骨破坏,其影像学表现符合肿瘤性骨破坏的改变。病理可见溶骨病变为主的混合性骨质破坏。中、高剂量免疫抑制组小鼠ALP活性明显高于其他两组,差异有显著性意义(P<0.05),但这两组间之间无明显差异。结论中、高剂量免疫抑制剂在制备小鼠肺癌骨转移模型中均具有较高的成瘤率,但中等剂量组小鼠存活率高,效果更理想。建立了比较成熟的人肺腺癌细胞移植瘤模型制备方法,为转移瘤的研究和治疗提供动物模型。
- 孟越李春雨郝松胡少宇林振袁亮李威闫文娟陈建庭杨德鸿
- 关键词：肺癌骨转移小鼠
- CITED1 63-84氨基酸片段是影响其细胞定位与成骨作用的关键区域被引量：1
- 2013年
- 目的生物信息学分析发现CITED1 63-84氨基酸片段为其重要的功能片段,进一步研究CITED1 63-84氨基酸片段突变(丝氨酸突变为丙氨酸)是否影响其进核及成骨分化,探讨其在成骨分化过程中的生物学调控功能。方法 CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒分别转染MC3T3-E1细胞,培养2 d,用100 nmol/L PTH(1-34)刺激细胞,行细胞免疫荧光实验,共聚焦镜下观察细胞内CITED1位置变化。将CITED1 63-84突变质粒(9S>A),CITED1质粒及空白质粒按相应体系转染MC3T3-E1细胞,分为两组,一组成骨诱导4周,另一组成骨诱导基础上进行10 nmol/L PTH(1-34)间歇刺激(每48 h刺激4 h)4周,测ALP酶活性及Ca离子浓度并进行ALP及茜素红染色。行RT-PCR实验分析成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC的表达量。结果 PTH(1-34)可促进CITED1进核,将CITED1氨基酸63-84片段突变后,可明显抑制该反应。4周成骨诱导后,CITED1过表达明显抑制成骨细胞分化,ALP及Ca离子浓度明显低于对照组,而CITED1突变质粒(9S>A)过表达ALP及Ca离子浓度明显高于CITED1组,与对照组基本相同。进一步研究表明,CITED1过表达抑制PTH(1-34)诱导的成骨细胞分化,而CITED1突变质粒(9S>A)可逆转该反应。ALP染色及茜素红染色也验证了以上结论。RT-PCR结果提示:CITED1突变质粒(9S>A)过表达成骨相关基因ALP2,RUNX2,OC明显高于CITED1质粒过表达。结论 CITED1 63-84片段丝氨酸为其重要的功能位点,可影响其细胞进核及成骨分化。
- 林振袁亮孟越冯瑞强付兆宗杨德鸿
- 关键词：PTH成骨分化基因突变
- 信号选择性甲状旁腺素模拟肽促进去势雄性小鼠的骨折愈合被引量：9
- 2013年
- 目的观察间断皮下注射信号选择性甲状旁腺素(PTH)模拟肽对去势雄性小鼠骨折愈合的影响。方法 36只7周龄C57/BL雄性小鼠去势,1周后制作股骨中段骨折模型,术后用人重组甲状旁腺素(hPTH(1-34)),信号选择性PTH模拟肽[Gly1,Arg19]hPTH(1-34)(G1,R19(1-28))和等量溶解剂注射,于术后14 d和28 d处死,双能X线骨密度仪测量骨痂区骨密度以及骨矿物含量;术侧骨折愈合情况通过X线、显微CT、生物力学和组织学显示。结果术后14 d,G1,R19(1-28)组骨密度显著高于对照组(P<0.05)。最大力和刚度G1,R19(1-28)低于hPTH(1-34)组。X线和显微CT显示,G1,R19(1-28)组骨痂的改建和重塑优于对照组,略差于hPTH(1-34)组。结论信号选择性甲状旁腺素模拟肽G1,R1(91-28)促进骨折的愈合,cAMP/PKA通路对促进骨折愈合具有重要作用。
- 袁亮林振付兆宗孟越黄志平吴秀华杨德鸿江建明
- 关键词：去势骨折愈合PKA
- 一种新的具有促骨合成作用的多肽设计和临床前研究
- 目的 合成具有非PLC/PKC单一信号激活作用的PTH模拟肽(MY-1肽),通过体外细胞培养和去势雌性小鼠体内研究,探讨该肽的促骨合成、促骨吸收功能以及抗骨质疏松作用。方法 检测MY-1肽的cAMP/PKA,PLC和PK...
- 杨德鸿童国军何友华孟越郝松胡少宇
- 关键词：骨质疏松临床前研究药物
- 甲状旁腺激素(1-34)对小鼠肺癌骨转移瘤生长的影响被引量：2
- 2014年
- 目的通过建立肺癌骨转移小鼠模型,探讨甲状旁腺激素（PTH）（1-34）对小鼠肺癌骨转移瘤生长的影响。方法将30只4~6周龄BALB/c雌性小鼠,用人肺癌A549细胞悬液骨内注射的方法制作胫骨近端肺癌骨转移模型,7 d后X线确定模型建立,随机分成3组,一组注射甲状旁腺素（PTH）（1-34）（40 mg/kg）作为观察组,一组注射等量溶解剂作为空白对照组,一组注射环磷酰胺作为阳性对照组,每2 d测体质量一次及观察右后肢瘤体生长情况,给药28 d后处死小鼠,所有小鼠行X线及显微CT检查观察肿瘤形态、大小,CT检测胫骨局部骨密度及肿瘤体积,HE染色及免疫组织化学法观察肿瘤形态及性质,检测血清碱性磷酸酶浓度了解成骨情况。所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析,体质量以均数±标准差表示,ALP、肿瘤体积及CT数据分析采用单因素方差分析做整体检验,两两比较采LSD-t检验,P〈0.05被认为差异有统计学意义。结果观察组小鼠体质量变化曲线与对照组组间差异无显著性（P〉0.05）,X线及显微CT可见观察组及对照组均出现明显的骨破坏缺损,环磷酰胺组骨皮质相对完整,轻度骨破坏,CT数据分析观察组及对照组肿瘤体积大小组间差异无显著性（P〉0.05）,环磷酰胺组肿瘤体积明显小于前两组,组间有显著性（P〈0.05）,而观察组骨量大于对照组,低于环磷酰胺组,3组组间差异有显著性（P〈0.05）,病理学显示溶骨性病变为主的混合性骨质破坏,观察组及对照组骨结构破坏严重,肿瘤细胞填充明显,免疫组化显示腺瘤,两组差异相似,观察组ALP浓度大于对照组及环磷酰胺组,观察组与对照组及环磷酰胺组相比,组间差异有显著性（P〈0.05）。结论间歇性小剂量注射甲状旁腺激PTH（1-34）不促进小鼠肺癌骨转移瘤的生长,但增加骨转移瘤灶周围的骨量。
- 李春雨杨德鸿孟越郝松
- 关键词：甲状旁腺激素肺癌骨转移小鼠
- 几种模拟肽在PTH信号转导途径中的作用探究
- ：甲状旁腺素(Parathyroid Hormone,PTH)调节骨形成和骨吸收的功能是通过激活PTH1型受体及其下游的多个信号途径实现的,其促进骨形成的机理有待进一步深入研究.具有一定通路选择性的PTH模拟肽具有较PT...
- 孟越郝松李俊青杨德鸿
- 关键词：甲状旁腺素骨形成信号转导途径模拟肽
- 去势延迟雄性小鼠骨折愈合
- 2013年
- 目的观察去势雄性小鼠骨折愈合的情况,探讨男性骨质疏松骨折愈合过程。方法 40只7周龄C57BL/6J雄性小鼠,其中8只作为基线组,32只随机分为对照组与去势组,小鼠去势后1周建立右股骨中段骨折模型。术后2周和4周,测量血清睾酮浓度,骨折端骨密度(BMD)。骨折愈合情况通过显微CT和组织学切片显示。结果去势后小鼠血清睾酮浓度明显下降;术后4周,与对照组相比,去势组BMD明显降低。三维重建图像显示去势组骨痂改建差于对照组。病理切片可见去势组初级骨小梁少于对照组,骨痂重建差于对照组。结论去势延迟的骨折的愈合,表现在骨折区骨量减少以及骨改建延迟,本研究为男性骨质疏松骨折的研究提供了动物模型。
- 袁亮黎新宪孟越林振江建明杨德鸿
- 关键词：去势雄性小鼠睾酮骨质疏松骨折愈合
- 环磷酰胺联合地塞米松建立小鼠肺癌骨转移的动物模型
- 目的：应用瘤细胞悬液移植法和胫骨内注射法将人肺腺癌A549细胞接种于具有正常免疫功能的小鼠体内,建立小鼠肺癌骨转移模型,观察成瘤时间、肿瘤进行性生长情况和其他实质性器官转移情况.为转移瘤的研究和治疗提供科学依据.
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- 孟越郝松胡少宇林振袁亮李威闫文娟陈建庭杨德鸿
- 关键词：肺癌环磷酰胺地塞米松
- 文献传递
