夏照和
- 作品数：9 被引量：52H指数：5
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪瘟病毒中和抗体竞争抑制ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2008年
- 利用杆状病毒表达的猪瘟病毒(CSFV)重组E2蛋白作为包被抗原,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白中和性单克隆抗体作为竞争抗体,建立了一种用于检测CSFV中和抗体的重组E2蛋白竞争抑制ELISA(CI-ELISA)方法。经筛选确定,CI-ELISA的抗原最佳包被浓度为3μg/mL,酶标竞争抗体的最佳稀释度为1∶4 000,阴性血清临界值为33%,阳性血清临界值为40%。CI-ELISA的检出下限为1∶44(中和抗体效价),与进口阻断ELISA试剂盒的符合率为85.00%,高于间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒的符合率(81.25%),CI-ELISA与其他主要病毒的阳性血清均无交叉反应。对采自我国4个省份的290份现地血清进行CI-ELISA检测,结果273份(94.1%)为CSFV抗体阳性。
- 梁冰冰孙元彭伍平夏照和仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒中和抗体
- 猪瘟病毒野毒株E2蛋白特异性单抗免疫抑制制备法的建立被引量：8
- 2008年
- 采用环磷酰胺免疫抑制法制备特异性识别猪瘟病毒(CSFV)野毒株的单克隆抗体,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株能稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,结果显示,该单克隆抗体能够与CSFV石门株发生反应,同时能与1.1、2.1、2.2和2.3基因亚群CSFV野毒发生特异性反应,并具有中和活性,而与CSFV兔化弱毒疫苗株不发生反应。表明,该单克隆抗体可以用于鉴别CSFV野毒株和兔化弱毒疫苗株。
- 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒免疫抑制
- 基于重组E2蛋白的猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立被引量：11
- 2008年
- 根据昆虫细胞密码子偏嗜性,对猪瘟病毒E2基因进行密码子优化,并利用昆虫杆状病毒表达系统进行了表达,表达水平约为野生型E2基因的3倍。将表达的重组E2蛋白纯化后作为ELISA包被抗原,建立了一种基于重组E2蛋白的间接ELISA方法,并对此方法的反应条件进行了优化。确定的ELISA最佳条件为:抗原包被浓度为2μg/mL,封闭液为10 g/L聚乙烯醇PBS溶液,被检血清1∶160稀释,辣根过氧化物酶标记的兔抗猪IgG(二抗)1∶5 000稀释。确定的阴性血清临界D450 nm值为0.30,阳性血清临界D450 nm值为0.35。将该ELISA方法与IDEXX公司生产的猪瘟病毒抗体检测试剂盒做相关比较,结果符合率为82.3%。表明,该方法可以用于猪瘟病毒抗体的检测。
- 孙元夏照和梁冰冰彭伍平仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白密码子优化杆状病毒表达系统间接ELISA
- 特异性识别猪瘟病毒野毒株的单克隆抗体的制备
- 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性传染病，该病被世界动物卫生组织(OIE)列入OIE疫病名录(OIE-listeddiseases)，为须申报的(notifiable)动物传染病。近年来，我国猪瘟的流行和发病特点发生了...
- 夏照和
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白免疫抑制单克隆抗体
- 文献传递
- 用免疫抑制法制备猪瘟病毒野毒株E2蛋白的特异性单克隆抗体
- 采用环磷酰胺免疫抑制法,用纯化的杆状病毒表达的重组HCLV-E2蛋白作为耐受原,Shimen-E2蛋白作为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经筛选获得一株稳定分泌抗E2蛋白单克隆抗体...
- 夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒E2蛋白重组杆状病毒单克隆抗体
- 文献传递
- 抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用环磷酰胺免疫抑制法，用杆状病毒表达的猪瘟兔化弱毒疫苗株E2蛋白作为耐受原，以石门株E2蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合...
- 仇华吉夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元涂长春
- 文献传递
- 共表达PRRSVGP5蛋白和CSFV E2蛋白的“自杀性”DNA疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答被引量：6
- 2008年
- 为了获得新型双价"自杀性"DNA疫苗,将猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5基因克隆于此前构建的表达猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)E2基因的甲病毒复制子载体疫苗pSFV1CS-E2中。为了增强免疫效果,在密码子优化的GP5基因中插入了泛DR表位(PADRE),在CSFV E2基因后融合伪狂犬病病毒(PrV)UL49基因,获得了6种重组质粒。间接免疫荧光试验显示,PRRSV GP5和CSFV E2基因在瞬时转染的293T细胞中得到同时表达。将6种重组质粒和空载体pSFV1CS分别免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA方法检测血清抗体水平,通过基于CSFE/WST-8的淋巴细胞增殖试验和细胞因子ELISA评价疫苗诱导的细胞免疫。结果显示,除pSFV1CS组外,从各疫苗组小鼠血清中均可检测到低水平的针对GP5和E2蛋白的抗体;各疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后均能诱导特异性的淋巴细胞增殖;部分疫苗组小鼠脾细胞经CSFV和PRRSV刺激后可分泌较高水平的IFN-γ和IL-4;引入UL49的疫苗组细胞免疫应答显著高于其它疫苗组。结果表明,这些共表达GP5和E2蛋白的自杀性DNA疫苗可以诱导体液免疫和细胞免疫,PrV UL49可以增强其细胞免疫应答。
- 孙建富赵和平李娜孙元夏照和周艳君王煜祁巧芬鲁承仇华吉
- 关键词：共表达
- 猪瘟病毒石门强毒株和兔化弱毒疫苗株E2蛋白糖基化位点差异分析被引量：21
- 2007年
- 猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株E2糖蛋白分别含有5个和6个潜在的糖基化位点,其中986N是兔化弱毒疫苗株所特有的。为了分析二者糖基化位点差异及其影响,将去掉信号肽和跨膜区的猪瘟病毒石门强毒株(Shi-men)和兔化弱毒疫苗株(HCLV)E2基因置于蜂素信号肽序列下游,使其在Sf9细胞内表达重组Shimen-E2和HCLV-E2蛋白。结果显示,重组E2蛋白以二聚体的形式分泌表达于细胞培养液中,但二者分子量存在差异。用endo H和PNGase F对纯化后的重组E2蛋白进行去糖基化处理后,二者分子量大小变成一致,证实石门强毒株和兔化弱毒株E2蛋白分子量大小的差异可能是由于糖基化程度的差异所致。对986N糖基化位点进行定点突变后发现,突变后的Shimen-E2与野生型HCLV-E2分子量大小一致,而突变后的HCLV-E2与野生型Shimen-E2分子量大小一致,表明Shimen-E2和HCLV-E2分子量大小的差异的确是由于986N糖基化位点的差异引起的。
- 彭伍平夏照和侯强李娜孙元童光志仇华吉
- 关键词：猪瘟病毒杆状病毒表达系统
- 抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗猪瘟病毒野毒株E2蛋白的单克隆抗体以及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株。本发明采用环磷酰胺免疫抑制法，用杆状病毒表达的猪瘟兔化弱毒疫苗株E2蛋白作为耐受原，以石门株E2蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合...
- 仇华吉夏照和彭伍平成丹侯强王万利孙元涂长春
- 文献传递
