夏小静
- 作品数：8 被引量：20H指数：4
- 供职机构：山东省滨州畜牧兽医研究院更多>>
- 发文基金：山东省滨州畜牧兽医研究院自主创新基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
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- 猪链球菌GDH基因克隆表达及其PPA-ELISA抗体检测方法的建立与应用
- 猪链球菌(Streptocuccussuis，S.suis)是当前严重危害养猪业的一种重要病原菌。根据荚膜多糖(capsularpolysaccharide，CPS)抗原成分不同，将猪链球菌分为35个血清型(1～34型和...
- 夏小静
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶原核表达
- 文献传递
- 猪链球菌抗体GDH重组蛋白PPA-ELISA检测方法的建立被引量：6
- 2012年
- 以纯化的猪链球菌重组谷氨酸脱氢酶(GDH)蛋白作为包被抗原,酶标葡萄球菌A(PPA)蛋白为二抗,建立了检测猪链球菌抗体的间接PPA-ELISA诊断方法。经方阵滴定确定了抗原的最适包被浓度为12.5mg/L,血清样品的最佳稀释倍数为1∶80,PPA-ELISA阳性反应的临界值为D450nm≥0.378,交叉反应试验结果表明,该重组抗原与其他常见的6种猪病的阳性血清不发生交叉反应,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。经与武汉科前动物生物制品有限责任公司的商品化猪链球菌抗体检测试剂盒比较,二者的符合率为96.7%;对320份血清进行猪链球菌抗体检测,阳性检出率为73.1%。试验证明,所建立的PPA-ELISA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高,为大规模地进行猪链球菌病的流行病学调查和血清学诊断提供了有效的技术手段。
- 夏小静李书光王金良陈金龙谢金文姜世金沈志强
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶
- 猪圆环病毒2型DY株ORF2基因在Sf9昆虫细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 本试验采用PCR方法扩增出完整的PCV2 ORF2基因,并将其克隆到Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1TM中,获得重组转移载体pFast-ORF2,再将其转化DH10Bac感受态细胞,发生转座反应,通过抗性及蓝白斑筛选获得含有ORF2基因的重组杆粒,通过Cellfectin转染试剂介导将重组杆粒DNA转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。用该重组杆状病毒感染Sf9昆虫细胞,并通过间接免疫荧光法和Western blotting检测目的蛋白的表达。结果表明,ORF2基因在昆虫细胞中获得表达,表达的蛋白质可被PCV2阳性血清识别,这为进一步研究PCV2亚单位疫苗及诊断抗原奠定了基础。
- 王文秀沈志强王善辉张松林池贤凤夏小静
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因
- 猪链球菌谷氨酸脱氢酶的原核表达、纯化及其免疫保护性
- 目的：原核表达、纯化猪链球菌谷氨酸脱氢酶(GDH)，并检测其免疫原性和免疫保护性。方法：应用PCR方法扩增gdh的完整ORF，按正确的阅读框架将其克隆入原核表达载体pET-30a，构建pET-30a-gdh表达质粒，转化...
- 夏小静沈志强王金良李书光陈金龙白耀国姜世金
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶原核表达免疫保护动物实验
- 猪链球菌检测方法的研究进展被引量：5
- 2012年
- 猪链球菌是一种重要的人畜共患病病原,对猪链球菌进行快速而特异性地检测,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。文章分别对猪链球菌免疫学检测方法与分子生物学检测方法进行了阐述,并对未来的研究方向进行了展望。
- 夏小静沈志强姜世金李书光王金良
- 关键词：猪链球菌免疫学检测方法
- SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性
- 2013年
- 运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数,预测MRP的B细胞优势表位簇;PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1),构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1,IPTG诱导表达,以渗透性休克法纯化重组蛋白;使用重组蛋白免疫血清和灭活猪链球菌2型SS2免疫血清Western blotting检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性;纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠,SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力。Western blotting显示预测的950～1 210aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性;攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7%。研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础。
- 吴立志伍晓雄张松林刘磊肖跃强夏小静沈志强
- 关键词：猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白B细胞表位原核表达
- 猪链球菌2型枯草杆菌素样蛋白酶的截短表达及其免疫保护作用研究被引量：4
- 2013年
- 为研究猪链球菌2型(SS2)截短表达枯草杆菌素样蛋白酶(C5a-1)的免疫保护特性,本研究选择其B细胞线性表位优势区(aa 91～aa 323)进行PCR扩增,克隆至pET32a载体中进行原核表达,并接种小鼠鉴定其免疫保护性。W estern blot鉴定结果显示,截短表达的sspA重组蛋白分子量约45.6 ku,能够与SS2阳性血清反应,具有良好的反应原性。将纯化的重组蛋白经3次免疫CD-1小鼠,攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率仅为菌体免疫所提供保护率的15%。本研究为利用该蛋白作为动物免疫制剂提供了实验数据。
- 吴立志沈志强张松林肖跃强夏小静扈俊波李振伟伍晓雄
- 关键词：猪链球菌2型原核表达免疫保护
- 副产物乳酸对猪链球菌疫苗株ST171发酵的影响被引量：4
- 2012年
- 为提高猪链球菌(S.suis)疫苗的高密度发酵效果,本研究对S.suis疫苗株(ST171)的发酵过程进行检测,利用外源添加试验研究乳酸对ST171发酵的影响,并通过对发酵工艺的优化减少乳酸的生成。结果表明,ST171发酵液中积累有大量对其生长及活菌数量有不利影响的代谢副产物乳酸。经优化确定ST171发酵的最优工艺参数为:溶氧水平20%,初始葡萄糖浓度10 g/L,残糖浓度1 g/L,最大比生长速率小于0.7 h-1。在优化条件下,发酵过程中乳酸生成量与原工艺相比降低了41.41%,菌体生物量和活菌数量分别提高了70.58%、129.09%,取得了良好的发酵效果。
- 程立坤付强张莎莎苗立中夏小静沈志强
- 关键词：猪链球菌病疫苗乳酸发酵
