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表没食子儿茶素没食子酸诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录被引量：4: 2008年; 本研究旨在探讨表没食子儿茶素没食子酯酸(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)诱导人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因去甲基化及转录激活的可能机制。以生长曲线、MTT法检测EGCG对CA46细胞生长和增殖的抑制作用;利用流式细胞仪DNA含量分析法探讨EGCG对CA46细胞周期的影响;采用巢式甲基特异性PCR法(nested-methylation specific PCR,n-MSP)及DNA克隆测序分析法检测EGCG作用前后CA46细胞p16基因甲基化状态;应用RT-PCR检测p16、DNA甲基转移酶(DNMT3A、DNMT3B)基因mRNA的表达。结果表明:与对照组相比,3组不同浓度EGCG均能明显抑制CA46细胞生长,G0/G1期细胞增加;不同浓度EGCG作用48小时后p16基因甲基化程度减弱;未处理组细胞p16基因呈微弱表达,未用药组、不同浓度EGCG(6、12、24)μg/ml处理组条带灰度值与β-actin1比值分别为(0.05±0.01)、(0.19±0.03)、(0.39±0.10)、(0.85±0.09),各处理组p16基因mRNA表达明显高于未用药组,其差异有显著意义(p<0.05);与对照组相比,EGCG作用48小时后CA46细胞甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达均下降。结论:EGCG可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B和(或)直接对p16基因去甲基化,使p16基因mRNA表达上调,恢复其活性,从而实现其对细胞周期的调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制CA46细胞的增殖。; 喻爱芳沈建箴陈志哲范丽萍林福安; 关键词：表没食子儿茶素淋巴瘤 CA46细胞

EGCG单药及联合TSA逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及转录激活的实验研究: 目的应用巢式甲基特异性PCR法/(nested methylation specific PCR,nMSP/)和DNA克隆测序检测人恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因的甲基化状态;探讨EGCG单药及EGCG联合TSA逆转...; 喻爱芳; 关键词：甲基化 TSA 恶性淋巴瘤 CA46; 文献传递

半巢式MSP在急性白血病患者p15基因甲基化检测中的应用: 2007年; 传统的观点认为，基因的缺失和突变是基因失活的主要方式，最近研究显示，基因异常甲基化所导致的基因沉默亦是基因失活的方式之一。在多种恶性血液病中，p15基因发生异常的主要途径是基因异常甲基化和缺失。目前国内文献上p15基因甲基化的检测方法主要集中在甲基化敏感限制性酶切和Herman等总结的甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法。我们通过优化MSP方法，设计了p15基因的半巢式-MSP（Hn-MSP）引物对85例急性白血病（AL）患者进行了p15甲基化状态的检测。; 林福安叶宝国沈建箴范丽萍周华蓉傅海英林聪猛喻爱芳; 关键词：P15基因甲基化急性白血病患者甲基化检测半巢式甲基化特异性聚合酶链反应

表没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究被引量：5: 2010年; 本研究探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用。采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测EGCG对U937细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测EGCG对U937细胞周期的影响;采用RT-PCR、Westren blot法分别检测p16mRNA、蛋白的表达;采用nMSP法检测U937细胞p16甲基化状态变化;采用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达。结果表明:EGCG可以剂量依赖性和时间依赖性地抑制U937细胞增殖(r=0.71),且呈剂量依赖性诱导G0/G1期细胞阻滞;EGCG可以呈剂量依赖性上调U937细胞p16mRNA、蛋白的表达;EGCG可以呈剂量依赖性减弱U937细胞p16甲基化程度;EGCG可以剂量依赖性地下调U937细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA表达,而对DNMT1mRNA的表达无影响。结论:EGCG在体外通过抑制DNMT3A、DNMT3B和(或)直接使异常高甲基化的p16启动子CpG岛DNA去甲基化,恢复p16mRNA水平和蛋白水平的表达,调控U937细胞阻滞于G0/G1期,抑制U937细胞的增长。; 范丽萍沈建箴傅海英周华蓉沈松菲喻爱芳; 关键词：表没食子儿茶素没食子酸酯急性单核细胞白血病 U937细胞

巢式MS-PCR法检测恶性血液病细胞株APC基因启动子甲基化状态: 2009年; 本研究旨在应用巢式甲基化特异性PCR(nMS-PCR)法检测10种恶性血液系统肿瘤细胞株APC基因启动子的甲基化状态,并探究其在肿瘤发生发展中的作用,同时筛选出APC基因启动子高甲基化的肿瘤细胞株,将其作为研究基因甲基化与表达关系的细胞模型。采用nMS-PCR扩增亚硫酸盐修饰后的10种肿瘤细胞株基因组DNA,检测其APC基因启动子区CpG岛的甲基化状态。结果表明,CA46、U266、Molt4、K562、HL-60、CEM、AKR、U937、Raji细胞的APC基因启动子区均未甲基化,而Jurkat细胞的APC基因启动子区出现甲基化。结论:用nMS-PCR可以准确地检测出恶性血液病细胞株APC基因的甲基化状态,该方法操作简便,可用于检测各种肿瘤细胞基因的甲基化状态。; 吴雪梅沈建箴喻爱芳范丽萍周华蓉付海英沈松菲吴淡森; 关键词：APC基因基因甲基化

雷公藤内酯醇逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化的实验研究被引量：8: 2008年; 目的:以p16基因存在异常甲基化的恶性淋巴瘤细胞CA46为研究对象,探究雷公藤内酯醇(triptolide,TPL)对P16这一细胞周期调控中的重要基因的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:①运用四甲基偶氮唑盐(MTT)法等检测triptolide对CA46细胞株增殖的影响。②巢式甲基特异性PCR检测triptolide对CA46细胞p16基因甲基化模式的影响。③半定量RT-PCR检测经triptolide作用后CA46细胞p16基因mRNA的表达。结果:Triptolide对CA46细胞生长有明显的抑制作用,并有时间及剂量依赖性,48小时IC50为28.8ng/ml;triptolide可逆转P16基因的高甲基化;triptolide能够诱导CA46细胞p16基因mRNA的表达,具剂量依赖性。结论:小剂量triptolide可明显抑制CA46细胞的增殖,其可能机制为通过诱导CA46细胞中异常甲基化的p16基因去甲基化,使p16基因恢复表达,从而对细胞周期起负调控作用。; 吴雪梅沈建箴喻爱芳范丽萍付海英沈松菲吴淡森; 关键词：甲基化 P16 雷公藤内酯醇恶性淋巴瘤 CA46

巢式MSP法检测急性白血病患者p16基因甲基化状态被引量：14: 2007年; 为了研究p16基因甲基化和缺失与急性白血病发病的关系,探讨其在成人急性白血病发生发展中的生物学意义,应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nested methylation specific polymerase chain reaction,n-MSP)分析了82例各种亚型的急性白血病患者在初诊或复发不同阶段p16基因的甲基化和缺失状态,并且在基因组硫化修饰PCR后克隆测序验证结果的准确性。结果表明:82例急性白血病(AL)患者p16基因甲基化的出现率为39.0%,其中急性髓系白血病(AML)患者为41.4%,24例急性淋巴细胞白血病(ALL)患者为33.3%;初治AL患者为36.6%,而复发患者则为54.5%。82例AL患者中有6例p16基因缺失,缺失率为7.3%,在AML、ALL患者中分别为1.7%和20.8%。16例健康自愿者或非恶性血液病患者p16基因则未发生甲基化或缺失。结论:在成人急性白血病的发生发展中,p16基因甲基化比p16基因纯合缺失更具有意义;p16基因表达异常与成人急性白血病的发生发展密切相关。; 范丽萍沈建箴叶宝国林福安傅海英周华蓉沈松菲喻爱芳; 关键词：P16基因基因甲基化急性白血病

砷剂诱导人视网膜母细胞瘤Y79细胞系P16基因去甲基化及转录: 2009年; 目的探讨三氧化二砷（As2O3）诱导人视网膜母细胞瘤（RB）Y79细胞系P16基因去甲基化及转录激活的可能机制。方法四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT）法检测As2O3对Y79细胞生长和增生的抑制作用；流式细胞仪DNA含量分析法探讨As2O3对Y79细胞周期的影响；巢式甲基特异性聚合酶链反应法（n-MSP）及DNA克隆测序分析法检测As2O3作用前后Y79细胞P16基因甲基化状态；逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测P16基因、DNA甲基转移酶（DNMT3A、DNMT3B）基因mRNA的表达。结果As2O3能明显抑制Y79细胞生长，使细胞阻滞于G0～G1期；未处理组细胞P16基因不表达，As2O3作用48h后P16基因表达增强，甲基化程度减弱，甲基转移酶DNMT3A、DNMT3BmRNA表达下降。结论RBY79细胞系存在P16基因高甲基化，As2O3通过抑制DNA甲基转移酶mRNA表达诱导P16基因去甲基化，显著上调P16基因mRNA表达，将细胞阻滞于G0～G1期，抑制Y79细胞增生。; 林雯喻爱芳徐国兴王婷婷沈松菲付海英谢茂松沈建箴; 关键词：去甲基化

砒霜提取物三氧化二砷对血液肿瘤表观遗传学治疗及机制的系列研究: 付海英沈建箴吴淡森周华蓉张媛媛徐成波沈松菲范丽萍喻爱芳; 研究表明，血液肿瘤的发生与表观遗传学异常密切相关。表观遗传学治疗靶点可能成为肿瘤精准治疗和分层治疗的新的标志物和目标。但表观遗传学研究还处于起步阶段，可用于血液肿瘤的表观遗传学药物极为有限。中国有着丰富的传统中药资源，一...; 关键词：; 关键词：血液肿瘤三氧化二砷抗肿瘤机制

雷公藤内酯醇对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞系APC基因去甲基化诱导表达机制的研究: 2009年; 目的以抑癌基因即腺瘤性结肠息肉病相关基因（APC）存在异常甲基化的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞为研究对象，探究雷公藤内酯醇（TPL）对APC基因的影响，并对其机制进行初步探讨。方法运用四甲基偶氮唑盐（MTF）法等检测TPL对Jurkat细胞株增生的影响。巢式甲基特异性PCR（n—MSP）检测TPL对Jurkat细胞APC基因甲基化模式的影响。半定量RT—PCR检测经TPL作用后Jurkat细胞APC基因、甲基转移酶DNMT3A、DNMT3BmRNA的表达。Western blotting检测TPL作用后APC蛋白的表达。结果TPL对Jurkat细胞生长有明显的抑制作用，并有时间及剂量依赖性，48h IC50韧为19．7ng／ml；TPL可逆转APC基因的高甲基化；TPL能够诱导Jurkat细胞APC基因mRNA的表达，具剂量依赖性；TPL能够诱导Jurkat细胞APC蛋白重新表达，亦有剂量依赖性。结论小剂量TPL可明显抑制Jurkat细胞的增生，其可能机制为通过诱导Jurkat细胞中异常甲基化的APC基因去甲基化，使APC基因恢复表达。; 吴雪梅沈建箴喻爱芳范丽萍付海英沈松菲吴淡森; 关键词：甲基化基因 APC 雷公藤内酯醇白血病急性 JURKAT细胞

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喻爱芳

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