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周复春: 作品数：24 被引量：259H指数：11; 供职机构：华中农业大学更多>>; 发文基金：湖北省自然科学基金“九五”国家科技攻关计划国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

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猪细小病毒VP_2基因的克隆、测序与原核表达被引量：20: 2003年; 利用PCR技术从猪细小病毒的RFDNA模板中扩增了含有VP2 全基因的 2 0kb的基因片段 ,将PCR产物克隆至 pMD18 T载体 ,利用双脱氧末端终止法测定了VP2 全基因的核苷酸序列。将所得的核苷酸序列和推导的氨基酸序列分别与GenBank中的相应序列进行同源性比较 ,同源性均在 99%以上 ,从而说明该蛋白的碱基序列和氨基酸序列均具有高度的保守性。将VP2 全基因分别克隆入原核表达载体pET15 (b)、pET17(b)和 pET2 8(b)构建成表达质粒 pET15bVP2 、pET17bVP2 和 pET2 8bVP2 ;将含有VP2 基因起始位点至EcoRⅠ切点间的 0 8kb片段克隆入 pET17(b)中构建成表达质粒 pET17bVP2 f。利用上述四种质粒转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导后SDS PAGE检测表达情况 ,结果发现 pET17bVP2 f质粒在 45kD处有一特异性表达带 ,而其它几种质粒均未看到特异性表达带 ,推测VP2 基因 3′端的某些结构可能对VP2 全基因的表达有一定影响。这一结果对研究VP2 基因的结构与功能具有重要意义。; 赵俊龙陈焕春吕建强肖少波周复春; 关键词：猪细小病毒 VP2基因基因克隆原核表达

伪狂犬病病毒Bartha株TK^-/LacZ^+突变株的构建及其生物学特性研究被引量：2: 2002年; 本研究将伪狂犬病病毒Bartha株基因组与含有LacZ标志基因的TK基因转移质粒 pUEKPZ共转染猪肾传代细胞PK 15 ,细胞出现病变后 ,反复冻融 3次收毒 ,按 1∶5稀释接种于IBRS 2细胞。在X gal存在下挑取蓝斑 ,蓝斑筛选 3次 ,再进行空斑试验 ,同时用PCR扩增LacZ基因 ,经 3次空斑纯化 ,随机挑取的空斑均能扩增出LacZ基因 ,证实所获得的重组病毒为伪狂犬病病毒Bartha株TK-/LacZ+ 突变株。TCID50 试验表明 ,TK失活对Bartha株在细胞上增殖无影响 ;Balb/C小鼠试验表明。; 刘正飞陈焕春周复春方六荣何启盖; 关键词：伪狂犬病病毒生物学特性

伪狂犬病病毒鄂A株基因缺失突变株的构建: 该文以分离鉴定的猪伪狂犬病病毒鄂A株为实验材料,首先建立了PRV鄂A株的基因组DNA文库,分离、克隆和鉴定了TK、PK和gG基因.在此基础上构建了TK<'-->、TK<'->/LacZ<'+>、gG<'->/LacZ<'...; 周复春; 关键词：伪狂犬病病毒 TK GG

伪狂犬病病毒鄂A株TK基因的克隆及其鉴定被引量：12: 1999年; 合成了１对能对伪狂犬病病毒（Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓｖｉｒｕｓ，ＰＲＶ）ＴＫ（ｔｈｙｍｉｄｉｎｅｋｉｎａｓｅ）基因＋１１９～＋１０７１区进行特异扩增的引物，用猪ＰＲＶ鄂Ａ株细胞培养物提取的基因组作模板，扩增出９５３ｂｐ长的片段，用地高辛标记该片段作探针，通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，从克隆有ＰＲＶ鄂Ａ株的ＢａｍＨＩ片段的重组质粒中钓出含ＴＫ基因的重组质粒ｐＳＴＫ。对ｐＳＴＫ进行酶切分析，绘制了含ＴＫ基因的ＢａｍＨＩ片段的图谱，通过测序得出了ＴＫ基因的全序列。将该序列与ＰＲＶＮＩＡ３株ＴＫ基因进行比较，发现鄂Ａ株的ＴＫ基因存在变异。; 周复春陈焕春方六荣吴斌; 关键词：伪狂犬病病毒鄂A株 TK基因克隆; 全文增补中

一种伪狂犬病TK－/gE－/gI－基因缺失标志活疫苗及制备方法: 本发明公开了一种三基因缺失的重组伪狂犬病毒(Pseudorabies virus，PrV)毒株的构建、用该毒株制备的疫苗、构建该毒株的方法以及制备该疫苗方法，所说的重组伪狂犬病毒株缺失了TK、gE、gI基因，且不含外源基...; 陈焕春刘正飞吴斌金梅林方六荣何启盖周复春; 文献传递

鸡痘病毒282E_4株基因组BamHⅠ片段的克隆及酶切图谱分析被引量：5: 1995年; 本研究用ｐＵＣ１８质粒作载体，采用鸟枪法克隆ＦＰＶ基因组ＢａｍＨⅠ部分片段，用ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＦＰＶ２８２Ｅ４ＢａｍＨⅠ片段探针打点杂交，证实２２个克隆插入了ＦＰＶ２８２Ｅ４ＤＮＡ的ＢａｍＨⅠ片段，２２个阳性克隆提取的质粒经琼脂糖凝胶电泳，选取具有代表性的大小不同的６个质粒ｐＵＡ、ｐＵＢ、ｐＵＣ、ｐＵＤ、ｐＵＥ、ｐＵＦ。６个质粒插入的片段Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ分别为７．３ｋｂ、４．９ｋｂ、４．２ｋｂ、３．６ｋｂ、３．２ｋｂ、３．０ｋｂ。分别以ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲⅠ、ＥｏｃＲⅤ、ＨｉｎｄⅢ、ＰｓｔⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ进行单酶切，又经适当组合的双酶切。实验结果表明．在各片段存在的单酶切位点为Ａ：ＥＣＯＲⅠ、ＳａｃⅠ、ＸｈｏⅠ位点；Ｂ：ＥｃｏＲⅠ、ＸｈｏⅠ、ＨｉｎｄⅢ位点；Ｃ：ＣｌａⅠ、ＳａｃⅠ、ＳａｌⅠ位点；Ｄ：ＳａｌⅠ、ＰｓｔⅠ位点；Ｅ：ＥｃｏＲＶ位点；Ｆ：ＥｃｏＲⅤ位点。以上结果为随机筛选ＦＰＶ基因组非必需区奠定了基础。; 顾万钧王淑敏金宁一周复春殷震; 关键词：克隆酶切图谱鸡病鸡痘病毒基因组

伪狂犬病病毒鄂A株gG^-/LacZ^+突变株的构建被引量：11: 2001年; 以从湖北某猪场分离鉴定的鄂A株为亲本 ,提取其基因组DNA ,克隆含 gG基因的SphⅠ /KpnⅠ片段 ,然后将LacZ基因融合到 gG启动子下游 ,得到重组质粒 pUSKZ ,将重组质粒与鄂A株基因组共转染PK 15细胞 ,待细胞完全病变后 ,在X gal存在下 ,作蓝斑筛选纯化。经斑点杂交和PCR扩增证实得到的是基因型为 gG- /LacZ+ 的重组伪狂犬病病毒。; 周复春陈焕春方六荣周锐吴斌何启盖; 关键词：伪狂犬病病毒鄂A株突变株

伪狂犬病鄂A株分离鉴定及分子生物学与综合防治研究: 陈焕春金梅林周复春何启盖方六荣吴斌吴美洲韩琦杨宏姬雅周; 分离鉴定了猪伪狂犬病毒鄂A毒株，建立了各种诊断方法与试剂盒。其中伪狂犬病乳胶凝集抗体检测试剂盒获国家新兽药证书，制定了伪狂犬病检疫规程国家标水。研制的伪狂犬病油乳剂灭活疫苗获国家新兽药证书。建立了病毒基因组DNA文库，克...; 关键词：; 关键词：伪狂犬病毒分子生物学灭活疫苗诊断试剂盒

地高辛标记DNA探针检测伪狂犬病的研究被引量：7: 1997年; 利用伪狂犬病病毒特异性扩增产物制成地高辛标记的探针，对闽Ａ株，鄂Ａ株，Ｂａｒｔｎａ株，英国株及临床病料进行检测，其结果与ＰＣＲ检测结果相符，准确率为１００％，灵敏度达到２ｐｇＤＮＡ，试验认为该探针具有灵敏、特异。; 李学伍陈焕春周复春周复春吴斌; 关键词：地高辛 DNA 伪狂犬病

伪狂犬病病毒Ea株糖蛋白gD基因的表达及基因免疫被引量：5: 2001年; 构建了 2个利用人类巨细胞病毒 ( HCMV)的启动子启动表达伪狂犬病病毒 Ea株糖蛋白 g D基因的真核表达质粒 p CIDI和 pc DDI,体外转染 BHK-2 1细胞 ,用间接免疫荧光法检测 ,证实糖蛋白 g D在细胞中得到表达。用表达质粒 p CIDI和 pc DDI作为核酸疫苗免疫 BALB/c小鼠 ,ELISA检测小鼠血清中抗伪狂犬病病毒的抗体 ,结果其滴度为 1∶ 1 2 8～ 1∶ 51 2。初步证实 ,用 g D基因作为核酸疫苗免疫动物。; 洪文洲陈焕春方六荣周复春何启盖吴斌; 关键词：伪狂犬病病毒基因免疫基因表达

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