周剑
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 供职机构：中南大学湘雅二医院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 弓形虫ROP31基因克隆及生物信息学分析被引量：6
- 2018年
- 目的构建弓形虫ROP31基因重组真核表达载体,对其编码的蛋白进行生物信息学分析。方法提取弓形虫RH株速殖子总RNA,采用PCR扩增ROP31基因,构建其真核表达载体pET30a-ROP31。通过生物信息学软件结合在线程序分析ROP31基因编码蛋白的理化性质、抗原表位、空间结构等。结果 ROP31基因PCR扩增产物大小约1500bp,与预期一致,构建的重组质粒经双酶切鉴定表明目的基因插入正确。生物信息学分析ROP31基因编码蛋白有多个磷酸化修饰位点,具备多个跨膜区域;二级结构和空间结构分析ROP31蛋白与ROP家族优秀DNA疫苗ROP5、ROP17、ROP18在结构上相似;IEDB在线程序及DNA MAN软件分析ROP31蛋白具备比SAG1更为优秀的线性T、B细胞表位。结论成功构建重组真核表达载体pROP31,生物信息学分析其编码的ROP31蛋白具备优秀的细胞表位,这将为弓形虫ROP31DNA疫苗的研究提供理论依据。
- 周剑何深一刘晓雨王琳吕刚宋鹏霞韩雅丽郝珍郭晶晶朱曦杜辖东周琼彭倩
- 关键词：刚地弓形虫真核表达载体生物信息学
- TgMAPK1核酸疫苗对小鼠的免疫保护性研究
- 2018年
- 目的构建重组质粒pEGFP-MAPK1,制备弓形虫MAPK1核酸疫苗(DNA疫苗),评价该疫苗在小鼠体内引起的免疫效应以及在抗弓形虫感染过程中的保护作用。方法以弓形虫RH株cDNA作为PCR的模板扩增目的基因TgMAPK1,与真核表达载体pEGFP-C1连接,构建重组质粒pEGFP-MAPK1。pEGFP-MAPK1转染HEK293T细胞,通过荧光显微镜观察及Western blot检测其在真核细胞内的表达情况。将BALB/c雌性小鼠随机分成3组(PBS对照组、pEGFP-C1对照组和pEGFP-MAPK1实验组),大提质粒并免疫接种每组小鼠,ELISA检测每组小鼠在免疫接种前后血清抗体和脾细胞培养上清中细胞因子的变化。将弓形虫速殖子经腹腔注射入小鼠体内并每天记录小鼠的存活时间,评价该疫苗诱导产生的免疫保护效果。结果 PCR扩增出约1 599bp的目的基因片段,重组真核质粒pEGFPMAPK1构建成功。重组质粒和空质粒转染的细胞在荧光显微镜下均可观察到绿色荧光,提取的细胞总蛋白经Western blot检出能与相应抗体反应的分子质量单位约为58×103的目的蛋白。pEGFP-MAPK1免疫组小鼠较对照组能诱导产生更高水平的IgG(A值0.75~0.79)、IgG2a(A值0.65~0.71)和IFN-γ(725.67±23.25)pg/ml,差异有统计学意义(P<0.05),而IgG1、IL-4和IL-10各组间差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组(6d)相比,pEGFP-MAPK1组小鼠(18d)感染弓形虫后的存活时间显著延长(P<0.05)。结论 TgMAPK1核酸疫苗能诱导小鼠产生较强的体液免疫反应和Th1型细胞免疫反应,表明该疫苗具有一定的抗弓形虫感染免疫保护作用,TgMAPK1蛋白可作为弓形虫疫苗候选抗原。
- 郝珍沙文超宋鹏霞郭晶晶周怀瑜周剑丛华李瑞芳何深一
- 关键词：刚地弓形虫DNA疫苗BALB/C小鼠免疫保护
- 公交系统恐怖袭击应激障碍流行病学调查被引量：2
- 2007年
- 目的 探索公交系统遭受恐怖袭击对受害者、家属心理状态的影响。方法 在公交车爆炸事件后第20天和第44天对72人（其中受害者27人,家属26人,市民19人）进行了灾害自评量表（SRQ-20）、创伤后应激障碍（PTSD）测评量表（PCL-17）、焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）、应付方式量表（CSS）等调查。结果 受害者与家属的ASD（急性应激障碍）发生率分别为50%、12.5%;PTSD的发生率分别为33.33%、25%;女性PTSD的发生率（46%）与SAS、SDS的评分显著高于男性（16.7%）;而市民中无一人符合DSM-IV的ASD或PTSD诊断标准;女性的PTSD总分及SAS、SDS的评分显著高于男性（P〈0.05,P〈0.05,P〈0.01）;烧伤的面积和深度与PTSD过度唤起评分正相关（r=0.589,P=0.016）;受害者的应付方式与PTSD总分负相关（r=-0.523,P〈0.05）;受害者的SAS、SDS、SRQ评分与PTSD总分显著相关（r=0.853,0.787,0.745,P〈0.01）;年龄、受教育程度与PTSD总分无显著相关。结论在公交系统受恐怖袭击的爆炸事件对受害者及其家属的心理状态造成显著的影响,女性受影响的比率、程度比男性更为显著;与PTSD高相关的因素为预防和减轻PTSD提示了可能的途径。
- 隋双戈李凌江陈树林侯彩兰张燕张锦黎李晏张静周建松周剑倪斌张卓李卫晖马宁石长杰李功迎谌红献
- 关键词：创伤后应激障碍恐怖袭击急性应激障碍
