吴燕
- 作品数：19 被引量：54H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家中医药管理局基金资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 酵母双杂交技术筛选并回转验证在胞内与PML-C结构域相互作用的蛋白被引量：8
- 2010年
- 目的 利用酵母双杂交技术在活细胞内筛选并回转验证与PML-C结构域相互作用的蛋白质.方法 通过诱饵质粒pGBKT7-PML-C,利用酵母双杂交系统从白血病细胞cDNA文库中筛选与PML-C结构域相互作用的蛋白质.结果 利用酵母双杂交技术筛选到43个能与PML-C结构域相互作用的克隆;经进一步的归类与酵母回转试验得到9个阳性克隆.结论 在细胞内PML-C结构域能与多种蛋白质有相互作用.中性粒细胞弹性蛋白酶（neutrophil elastase,NE）介导的急性早幼粒细胞白血病的发生可能与这些相互作用所致的生物学功能改变有关.
- 朱丹王翀刘北忠钟梁王春光吴燕
- 关键词：酵母双杂交技术蛋白质相互作用
- 抑制JTV1基因表达对大黄素引起的K562细胞凋亡的影响及其机制被引量：4
- 2011年
- 目的探讨抑制JTV1基因表达对大黄素引起的人白血病K562细胞系凋亡的影响及其机制。方法将pGene-Sil-1-JTV1-1.1 siRNA重组质粒、pGeneSil-1-N.1阴性对照质粒及pGeneSil-1空载体分别转染人K562细胞,通过集落形成试验检测细胞的增殖能力;各组转染K562细胞经80μmol/L大黄素处理后,流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率,RT-PCR法检测细胞中凋亡相关基因Bcl-2、Bax、C-myc转录水平的变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-myc翻译水平的变化。结果抑制JTV1基因的表达后,K562细胞的增殖能力明显提高;抑制JTV1基因表达可使经80μmol/L大黄素处理的K562细胞G1期细胞比例下降,并减轻大黄素引起的细胞凋亡,同时,细胞Bax基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平均明显下降,而Bcl-2基因和C-myc基因mRNA的转录水平和蛋白表达水平则明显上调。结论抑制JTV1基因表达可能通过上调Bcl-2和C-myc基因的表达,下调Bax基因的表达,促进K562细胞的增殖,并阻止细胞凋亡。
- 吴燕刘北忠王翀朱丹王春光金丹婷高艳军黎亮
- 关键词：K562细胞细胞凋亡BCL-2基因C-MYC基因BAX基因
- 大黄素对荷人K562细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用被引量：6
- 2010年
- 目的:观察大黄素对白血病K562细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的表达水平,探讨其作用机制。方法:建立裸鼠K562细胞皮下移植瘤模型,腹腔连续给药12d,处死裸鼠,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用HE染色光镜和透射电镜方法观察肿瘤细胞的凋亡情况,免疫组化方法观察肿瘤组织中Bax和Bcl-2蛋白表达情况,应用RT-PCR检测肿瘤组织中Bax和Bcl-2的mRNA水平。结果:各用药组抑瘤作用与阴性对照组相比差异均具有显著性(P<0.05),高浓度组与羟基脲组具有同等的抑瘤效应(P>0.05),光镜和电镜检测发现大黄素低、中、高浓度组均可见瘤细胞凋亡和坏死,其中以高浓度处理组最为显著,羟基脲处理组部分瘤细胞以坏死为主。免疫组化和RT-PCR结果表明大黄素处理后肿瘤组织中Bax蛋白和Bax mRNA表达上调,Bcl-2蛋白和Bcl-2mRNA表达下调。结论:大黄素可以明显抑制K562细胞在裸鼠体内的生长,其作用机制可能是通过调控肿瘤中Bax及Bcl-2的表达,从而促进细胞凋亡。
- 王春光刘北忠金丹婷王翀吴燕朱丹钟梁
- 关键词：大黄素移植瘤裸鼠模型BAX
- 早幼粒细胞白血病基因结构域诱饵载体的构建及鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的研究早幼粒细胞白血病基因（promyelocytic leukemia，PML）中含环指／B—BOX结构与含coiled—coil结构的两个结构域的功能，构建含其结构域序列的诱饵表达载体，为进一步应用酵母双杂交系统筛选与之相互作用的蛋白建立实验基础。方法PCR扩增PML的两个结构域序列，克隆人诱饵载体pG—BKT7中，经测序鉴定后，将诱饵载体转化到酵母细胞AH109中，检测诱饵蛋白有无毒性，渗漏和自激活作用，同时利用蛋白印迹法分析诱饵蛋白的表达。结果成功扩增了PML两个结构域的基因片段，并正确克隆入pGBKT7中。诱饵载体成功转化到酵母细胞AH109中，其中一个诱饵蛋白BD—PML—B无毒性，但具有渗漏和自激活作用，另一个诱饵蛋白BD—PML—C无毒性，渗漏和自激活作用，蛋白印迹法分析证实酵母细胞表达诱饵蛋白。结论含环指／B—BOX的结构域具有转录因子活性，全长PML的转录活性与之有关；成功构建了含coiled—coil结构的PML结合域的酵母诱饵表达载体，为运用酵母双杂交技术筛选与之作用的蛋白并探讨其功能奠定了基础。
- 王翀刘北忠金丹婷王春光吴燕朱丹钟梁
- 关键词：结构域
- 带核定位信号的维甲酸受体α与Ubiquilin 1蛋白相互作用的验证(英文)被引量：2
- 2010年
- 目的:验证带有核定位信号的维甲酸受体α(nuclear localization signal-retinoic acid receptorα,NLS-RARα)与Ubiquilin 1(UBQLN1)蛋白之间的相互作用。方法:将表达NLS-RARα诱饵蛋白和UBQLN1靶蛋白的两种重组表达质粒pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1共转化AH109酵母菌,通过酵母双杂交技术验证两者在活细胞内的相互作用;构建真核细胞表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1,经酶切鉴定后,共转染HEK293细胞,利用抗HA多克隆抗体沉淀,抗Myc单克隆抗体检测验证他们之间的相互作用。结果:pGBKT7-NLS-RARα及pACT2-UBQLN1质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;构建的重组表达载体pCMV-HA-NLS-RARα和pCMV-Myc-UBQLN1经酶切鉴定成功,转染HEK293细胞后,用免疫共沉淀技术检测到Myc-UBQLN1蛋白的表达。结论:酵母双杂交和免疫共沉淀技术可验证NLS-RARα与UBQLN1之间存在相互作用。
- 朱丹王翀刘北忠吴燕钟梁王春光
- 关键词：免疫共沉淀蛋白质相互作用
- 大黄素三甲氧基衍生物合成及体外抗肿瘤活性试验被引量：4
- 2010年
- 目的:以天然存在的大黄素为原料合成了甲基化衍生物三甲氧基大黄素,并进行体外抗肿瘤活性的研究。方法:利用硫酸二甲酯/丙酮甲基化组合合成目标化合物1,3,8-三甲氧基-6-甲基蒽醌;通过常规方法,对其理化性质进行鉴定。采用HPLC及ESI-MS对其结构进行表征;通过MTT比色法与流式细胞术检测其对K562细胞增殖及细胞周期分布的影响。结果:三甲氧基大黄素为淡黄色粉末,mp:226～227℃,溶于氯仿等有机溶剂。其结构经HPLC及ESI-MS检测得到确证;浓度依赖性地抑制K562细胞的增殖,并使G0/G1期的细胞比例增加。结论:以大黄素为原料,成功合成了其新的衍生物。三甲氧基大黄素具有抑制K562细胞增殖及阻滞细胞周期由G0/G1期向S期移行的抗肿瘤活性。
- 金丹婷钟梁刘北忠袁佩刘畅王翀王春光朱丹吴燕
- 关键词：大黄素抗肿瘤活性
- 带核定位信号的RARα与谷氨酸氨连接酶蛋白相互作用的胞内外验证被引量：4
- 2010年
- 目的通过胞内外实验验证谷氨酸氨连接酶(GLUL)与带有核定位信号的维甲酸受体α(NLS-RARα)之间的相互作用。方法将表达GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白的两种重组表达质粒共同转化入AH109酵母菌,采用一对一的酵母双杂交技术验证它们在活细胞内的相互作用;通过构建GLUL及NLS-RARα蛋白标签融合表达载体,共转染至人胚肾HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术在细胞外验证它们之间的相互作用。结果 GLUL靶蛋白和NLS-RARα诱饵蛋白质粒共转化AH109酵母菌后,可见蓝色的阳性克隆;GLUL蛋白及NLS-RARα标签融合表达载体构建成功,共同转染至HEK293细胞,采用抗HA多克隆抗体免疫沉淀HA-NLS-RARα相互作用蛋白复合物后,抗c-Myc单克隆抗体免疫印迹检测,检测到GLUL-cMyc蛋白。结论采用酵母双杂交和免疫共沉淀技术成功地在胞内外验证了GLUL与NLS-RARα之间存在特异性的相互作用。
- 吴燕刘北忠王翀钟梁朱丹王春光金丹婷
- 关键词：维甲酸受体Α核定位信号蛋白质相互作用双杂交系统技术免疫共沉淀
- HBX调控miR-152-wnt-1致肝癌增生的作用
- MicroRNAs(miRNAs)是一类大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA，能和靶基因mRNA的3’UTR结合，通过降解其mRNA或抑制其翻译而下调靶基因表达，参与调控细胞增殖、凋亡和免疫防御等生理过程，在肿...
- 吴燕
- 关键词：肝癌乙型肝炎病毒X蛋白小分子RNA细胞周期
- HBX调控miR-152-wnt-1致肝癌细胞增殖的作用
- MicroRNAs （miRNAs）是一类大小约21-23个碱基的非编码单链小分子RNA,（?）和靶基因mRNA的3’UTR结合,通过降解其（?）nRNA或抑制其翻译而下调靶基因表达,参与调控细胞增殖、凋亡和免疫防御等生...
- 吴燕
- 关键词：乙型肝炎病毒X蛋白WNT-1细胞周期
- 文献传递
- 含Coiled-coil结构的PML结构域与CNPY2蛋白相互作用的胞内外验证被引量：2
- 2012年
- 目的通过胞内外试验验证含Coiled-coil结构的PML结构域(PML-C)与CNPY2蛋白的相互作用。方法将质粒pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C共转化入酵母菌AH109,通过酵母双杂交技术检测CNPY2蛋白和PML-C在AH109细胞内的相互作用;构建重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2,共转染HEK293细胞,采用Western blot法检测细胞中CNPY2蛋白的表达;免疫共沉淀技术从胞外验证两种蛋白的相互作用。结果 pACT2-CNPY2和pGBKT7-PML-C质粒共转化入AH109酵母菌后,可见蓝色阳性克隆;重组质粒pCMV-HA-PML-C和pCMV-Myc-CNPY2共转染的HEK293细胞的全细胞裂解液可与鼠抗c-MYC单抗特异性结合;经免疫共沉淀可检测到与PML-C相互作用的蛋白复合体。结论通过酵母双杂交试验和免疫共沉淀技术证实,PML-C与CNPY2蛋白存在相互作用。
- 吴秀娟刘北忠鈡梁初晨朱丹吴燕
- 关键词：酵母双杂交系统免疫共沉淀
