吴巨龙
- 作品数：27 被引量：97H指数：6
- 供职机构：山东省疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：山东省医药卫生科技发展计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶的生物信息学分析及其表达与活性检测被引量：4
- 2014年
- 目的利用生物信息学方法分析细粒棘球绦虫果糖二磷酸醛缩酶(EgFBPA)的结构和功能特征,并利用基因工程技术进行克隆、表达、纯化,获得活性蛋白。方法利用多种生物信息学软件分析EgFBPA的拓扑结构、生物学以及免疫功能特征;用限制性内切酶EcoRⅠ和HandⅢ对重组质粒FBPA/P-blue酶切FBPA目的基因片段,亚克隆入表达载体pET30a,筛选重组克隆并测序,将测序正确的重组质粒转化入BL21(DE3)感受态细菌,用异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白;用Ni-NTA柱纯化重组蛋白,并建立酶反应体系,通过NADH(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)的变化测定重组蛋白EgFBPA的酶催化活性。结果 EgFBPA基因全长1 092bp,编码363个氨基酸,软件分析其等电点(pI)为8.34,分子质量单位为39.8035ku。亚细胞定位分析该蛋白为无信号肽的细胞质蛋白,属于稳定蛋白;结构域和保守功能域的预测,FBPAI的激活位点为VYLEGTLLKPN(222aa-232aa),并含有TIMβ/α筒状结构(6aa-346aa),二级结构以α-螺旋和环状结构居多,无跨膜区,有10种类型的活性位点。经PCR、双酶切和测序证实pET30a(+)-EgFBPA构建成功。SDS-PAGE检测重组质粒表达产物分子质量与预期相符,且具有可溶性;Bradford法测定蛋白浓度为(0.50±0.02)mg/ml。酶活性检测Ni-NTA柱纯化后的FBPA具有良好的酶促活性,且存在量效关系。结论生物信息学预测EgFBPA可能是潜在的药物靶点。重组质粒Pet30a(+)-FBPA在大肠埃希菌BL21中成功表达,表达产物具有酶促活性,为进一步研究其生物学功能及药物靶点奠定了基础。
- 王绚吴巨龙吕刚苏娟辛奇鲁俊张思王猛孙萃平逯召莲何黎黎景涛
- 关键词：细粒棘球绦虫蛋白纯化分子克隆生物信息学
- 济南市社区居民急性上呼吸道感染与流感样病例发病及其疫苗接种情况被引量：8
- 2015年
- 目的分析2015年济南市社区居民急性上呼吸道感染病例和流感样病例发病、就诊以及2014年流感疫苗接种情况。方法于2015年2月8—11日，采用抽签法和方便抽样方法从济南市选取在济南市居住3个月以上的家庭，以家庭内所有成员作为调查对象，调查2015年1月8日至2月7日急性上呼吸道感染及流感样病例发病情况。本研究共调查410户1300名居民，回收有效问卷1241份，有效率95．5％。以2010年全国分年龄的城市人口学统计资料为基础，利用直接标准化法估计济南市社区居民急性上呼吸道感染、流感样病例罹患率和流感疫苗接种率。采用χ2检验比较不同特征调查对象的发病及疫苗接种情况。结果1241名调查对象中，急性上呼吸道感染罹患率为30．2％（375例），标化罹患率为29．1％；流感样病例的罹患率为6．1％（76例），标化罹患率为5．4％；53％（66例）接种过流感疫苗，标化接种率为3．8％。急性上呼吸道感染病例中，各年龄组罹患率差异具有统计学意义（χ2=17．121，P=0.002），0-4岁组较高，为45．4％（44例），15～24岁组较低，为26．5％（27例）；38．9％（146例）的病例选择去不同级别医院就诊，其中，37．7％（55例）的病例到县区级以上医院治疗，37．7％（55例）的病例选择社区医院，24．6％（36例）的病例选择个体诊所就诊。流感样病例中，各年龄组罹患率差异有统计学意义（χ2=76．79，P〈0.001），0。4岁组较高为22．7％（22例），25～59与960岁组较低，分别为3．1％（22例）和3．2％（6例）；81．6％（62例）的病例选择去医院就诊，其中53．2％（33例）的病例选择县区级以上医院，33．9％（21例）的病例选择社区医院，12．9％（8例）的病例选择个体诊所就诊。结论济南市社区居民急性上呼吸道感染罹患率较高，流感样病例罹患率较低，0～4岁是�
- 刘营宋绍霞王伟耿兴义刘稳韩德彪刘倜吴巨龙李忠王显军毕振强
- 关键词：呼吸道感染流感样病例罹患率流感疫苗
- 2019—2020流感监测年度山东省B-Victoria系流感病毒基因特征被引量：5
- 2022年
- 目的了解2019—2020流感监测年度山东省B-Victoria系流感病毒流行规律及基因特征,为B型流感疫苗的接种提供参考依据。方法对2019—2020流感监测年度监测数据进行分析,采用多阶段抽样方法随机抽取B-Victoria系流感病毒毒株进行基因序列的测定,采用Mega X软件的Muscle方法进行多序列比对,用Neighbor-Joining方法进行系统发育分析。结果2019—2020流感监测年度流感病毒以B-Victoria系和H3N2亚型为主;20株流感病毒毒株的基因进化分析表明其与同期疫苗株B/Colorado/06/2017亲缘关系较远却与下一年度疫苗株B/Washington/02/2019关系较近且共同聚集在Clade1A(Δ3)分支上,与同期疫苗株B/Colorado/06/2017相比有13处氨基酸位点改变,其中有5处位于抗原决定簇,其最大变异率为1.91%;糖基化分析显示20株流感病毒毒株全部发生209位糖基化位点增加;20株流感病毒毒株均未发现耐药位点突变。结论2019—2020流感监测年度推荐疫苗保护效果可能不理想,但山东省B-Victoria系流感病毒毒株对神经氨酸酶抑制剂依旧敏感。今后应继续密切关注B-Victoria系流感病毒的流行与基因变异情况,为B型流感病毒疫苗株的推荐及B型流感的防控提供依据。
- 吕健吴巨龙刘倜姚明晓李岩朱凯李栋纪龙寇增强
- 关键词：B型流感基因特征血凝素神经氨酸酶抗原性
- 2018—2019年济南市人鼻病毒和呼吸道合胞病毒及腺病毒感染分析被引量：1
- 2023年
- 目的研究2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染病例中人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的感染情况及流行病学特点, 并对分离出的人腺病毒做全基因组序列分析。方法采集2018年4月至2019年3月济南市第四人民医院、山东大学齐鲁儿童医院、章丘区人民医院的急性呼吸道感染住院病例患者的鼻/咽拭子样本共计1 969份, 采用实时荧光定量PCR的方法检测样本中呼吸道相关病原体, 包括人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒的阳性率, 并对分离出的7株腺病毒阳性标本进行测序, 以确定腺病毒型别, 并构建基因进化树进行分析。结果在收集的1 969份标本中, 3种呼吸道病毒阳性病例共计242例, 阳性检测率为12.30 %(242/1969), 鼻病毒阳性率为3.00%(59/1969)、呼吸道合胞病毒阳性率为6.30 %(124/1969)、腺病毒阳性率为3.86%(76/1969)。不同年龄段间鼻病毒检出率差异无统计学意义(Fisher精确检验值8.376, P=0.720), 不同年龄段间呼吸道合胞病毒、腺病毒检出率差异均有统计学意义(χ^(2)=19.28、12.16;P=0.001、0.016)。不同性别间腺病毒检出率差异具有统计学意义(χ^(2)=14.33, P<0.001), 不同性别间鼻病毒阳性率和呼吸道合胞病毒阳性率均无统计学意义(χ^(2)=0.30、2.90, P=0.862、0.089)。比较不同月份间三种病毒核酸阳性率, 发现鼻病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒的检出率分别在10月份、12月份、11月份达到最高(分别为8.61%、26.50%和8.84%)。对测序的7株腺病毒阳性标本构建基因进化树后发现其均为HAdV-2型。结论 2018年4月至2019年3月济南市急性呼吸道感染相关的人鼻病毒、呼吸道合胞病毒及人腺病毒在不同组别间有不同的流行病学特点, 为急性呼吸道感染的早期预防和临床治疗提供参考依据。
- 何玉洁张淑吕燕孙林吴巨龙宋绍霞孙文魁张曼李忠赵怀龙寇增强刘倜
- 关键词：全基因组基因分型
- 2022-2023年山东省A(H1N1)pdm09流感病毒HA、NA基因变异特征分析
- 2024年
- 目的 了解山东省2022-2023流感监测年度分离的A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因的变异特征,为流感的防控提供科学依据。方法 从流感监测网络实验室分离的流感毒株中按地市随机选取14株A(H1N1)pdm09亚型流感毒株,以WHO推荐的当季疫苗株为参考进行全基因组测序,并采用荧光法开展神经氨酸酶抑制(neuraminidase inhibition,NI)实验以评估药物敏感性。结果 山东省2022-2023年度分离的A(H1N1)pdm09流感病毒属于6B.1A分支中的5a.2a进化簇,核苷酸序列比对分析显示,HA和NA基因与2021-2023年度北半球疫苗株A/Victoria/2570/2019的亲缘关系较为接近,同源性分别为98.5%~98.7%和98.8%~99.1%。氨基酸序列分析显示,HA蛋白有20个位点发生了氨基酸序列变异,并发现1株病毒可能发生抗原漂移,有3株病毒发生了HA蛋白糖基化位点的缺失。NA酶相关重要位点未发生变异。NI实验显示,所测流感毒株均对抗流感病毒药物敏感。结论 所监测毒株与疫苗株整体同源性很高,但氨基酸存在一定程度变异,今后有必要持续开展流感病毒基因变异特征监测以了解流感流行的风险,以及评价基因变异对流感疫苗和治疗药物效果的影响。
- 吴巨龙张淑何玉洁孙林宋绍霞孙文魁刘倜
- 关键词：HA基因NA基因基因变异
- 2009年至2021年我国9省份发热呼吸道症候群病例中人偏肺病毒感染情况及流行特征分析被引量：6
- 2021年
- 目的阐明我国发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中人偏肺病毒(HMPV)感染情况及病毒流行特征,为我国HMPV引起呼吸道相关疾病的临床诊治和疾病防控提供重要基线数据。方法选取2009年1月至2021年6月在我国9省份(北京、河北、吉林、山东、陕西、新疆、安徽、广东、湖南)的FRS监测病例作为研究对象。收集病例临床、流行病学信息并采集呼吸道标本,应用实时荧光定量PCR对样本进行HMPV核酸检测。结果共11660例样本进行了HMPV检测,HMPV阳性病例数为296例,阳性检出率为2.54%。其中218例病例为单一HMPV感染,78例病例同时检出了含HMPV 2种或2种以上病毒,占HMPV阳性病例数的26.35%。<5岁儿童是HMPV主要发病人群,检出率为3.10%。在<5岁儿童中,含HMPV混合感染中肺炎病例的比例高于单一HMPV感染病例。HMPV全年均可检出,病毒流行主要以冬、春季为主,3月份是HMPV流行高峰。结论HMPV是引起儿童急性呼吸道感染的重要病原之一,病毒流行具有明显的季节性。HMPV可引起单独感染,也可与其他呼吸道病毒合并感染,合并HMPV感染可能增加儿童肺炎的风险。
- 崔爱利谢智博余鹏博朱汝南马英伟向星宇张丽萍朱云吴巨龙郜振国张荣波韩光跃许文波张燕
- 关键词：人偏肺病毒感染
- 中国首起由SARS-CoV-2 VOC/Gamma引起的本土聚集性疫情溯源调查分析
- 2022年
- 目的对山东省威海荣成市报告一起新型冠状病毒肺炎疫情进行溯源调查。方法对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测阳性者及其密切接触者进行调查,对9株病毒毒株进行全基因组测序及遗传进化分析;从国内外两个源头,人、物和环境三个方面开展溯源调查。结果本次疫情累计报告15例无症状感染者,包括某水产品加工公司车间13例,感染率为21.67%(13/60);感染者的同村邻居2例(夫妻关系)。初次检出的6例感染者为从事清除鱿鱼内脏首道工序工人,首次咽拭子核酸检测Ct值为15~29,病毒载量高,疑为同源一次性暴露所致。9株病毒毒株全基因组序列高度同源,属于VOC/Gamma(P.1.15进化分支),与我国既往本土和输入病例均不同源;与智利上传的2021年5月5—26日采样的6条病毒序列高度同源。溯源结果显示,该公司近14日内使用过2021年5—6月在智利、阿根廷附近海域捕获的鱿鱼原材料;库存原材料、产品及其外包装多处采样核酸检测呈阳性。结论本次疫情是我国首起由SARS-CoV-2 VOC/Gamma引起的本土聚集性疫情,可能为南美洲地区2021年5—6月期间流行的VOC/Gamma通过冷冻鱿鱼传入我国。
- 于洋张吉玉马海韩扬程立肖田雪莹吴巨龙李岩张玉薇陈德颖李继钊张金波陶泽新寇增强徐爱强
- 关键词：新型冠状病毒聚集性疫情
- 结直肠癌中NGAL和NGALR的表达及其临床意义被引量：12
- 2013年
- 目的探讨中性粒细胞相关载脂蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)及其膜受体(neutrophil gelatinase-associated lipocalin receptor,NGALR)在结直肠癌组织中的表达及与结直肠癌临床病理因素之间的关系。方法应用免疫组化SP法检测NGAL和NGALR在结直肠癌、结直肠腺瘤和癌旁正常组织中的表达,并用统计软件对数据进行分析。结果NGAL和NGALR在结直肠癌组织中的阳性率分别为49.0%、35.4%,明显高于结直肠腺瘤和正常黏膜组织。NGAL和NGALR的表达与肿瘤的浸润、远处转移和TNM分期均相关,差异均具有统计学意义(P<0.05),且NGAL/NGALR共同表达与结直肠癌的分化程度、浸润深度、远处转移和TNM分期相关(P<0.05)。结论 NGAL和NGALR的表达与结直肠癌的发生、浸润和转移相关,可辅助临床诊断,并有可能成为结直肠癌临床治疗的新靶点。
- 李亚玲门占康张煦李蓓蓓吴巨龙宋明芮
- 关键词：结直肠肿瘤NGAL免疫组织化学
- 鼻腔阻隔凝胶治疗病毒性感冒临床观察
- 2020年
- 目的探讨鼻腔阻隔凝胶治疗病毒性感冒的临床疗效。方法选取医院2011年2月至8月收治的病毒性感冒患者60例,按随机数字表法分为观察组(鼻腔阻隔凝胶治疗)和对照组(葡萄糖酸锌喷鼻剂治疗),各30例。结果观察组总有效率为93.33%,显著高于对照组的86.67%(P<0.05);观察组不良反应发生率显著低于对照组(P<0.05)。结论鼻腔阻隔凝胶治疗病毒性感冒效果较好。
- 王建醒王世江吴巨龙姚明晓张为胜马俊国
- 关键词：病毒性感冒疗效安全性
- 2009-2024年山东省甲型H1N1流感病毒血凝素基因进化分析
- 2024年
- 目的描述并分析山东省A(H1N1)pdm09亚型流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)基因的多样性,探讨其遗传变异规律,为流感监测、疫情防控和疫苗株匹配度提供科学参考。方法从GISAID流感数据平台下载2009—2024年流感疫苗推荐株和各分支代表株的HA基因序列,与山东省分离的298株甲型H1N1流感病毒株HA基因序列进行系统发育分析和氨基酸位点变异分析。利用IQ-TREE在线工具的最大似然法(maximum likelihood,ML)构建系统进化树,利用MegAlign软件查看氨基酸位点变异,同时采用NetNGlyc 1.0在线软件预测HA基因潜在的糖基化位点。结果298株山东省甲型H1N1流感病毒的HA基因同源性为91.2%~100.0%,序列进化分支随时间推移亲缘关系渐远,但进化方向与其他省份大致相同。HA基因氨基酸变异在各年度均有发生,抗原决定簇是其主要变异区域。结论山东省2009—2024年流感病毒分离株的HA基因仍处于不断进化过程,持续监测流感病毒流行趋势和进化方向对预警流感病毒大流行至关重要。
- 赵志红何玉洁吴巨龙宋绍霞孙林李忠王显军寇增强温红玲刘倜
- 关键词：血凝素基因遗传进化
