叶昱
- 作品数：29 被引量：94H指数：6
- 供职机构：江西农业大学动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省教育厅科技计划项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 利用SUMO系统高效表达可溶性猪圆环病毒2型Cap蛋白被引量：11
- 2012年
- 利用pCold-SUMO可溶性原核表达载体,构建表达猪圆环病毒2型缺失核定位信号肽的Cap基因的重组表达载体pCold-SUMO-dCap,并将其转入Arctic-Express表达菌株中15℃低温诱导表达.表达产物经SDS-PAGE分析,结果表明SUMO-dCap融合蛋白获得了高效表达,可溶性SUMO-dCap融合蛋白约占总融合蛋白的50%;用NI-NTA树脂纯化可溶性的融合蛋白,然后利用SUMO蛋白酶特异性去除SUMO标签,从而得到不含任何标签的dCap蛋白,进一步的Western-blot分析表明,表达的dCap蛋白具有良好的反应原性.
- 陈春丽郭宇飞陈筱薇叶昱王强廖明樊惠英
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白原核表达
- 猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：1
- 2016年
- 为了解中国猪群中猪诺如病毒感染情况,本研究根据猪诺如病毒保守的RNA依赖性RNA多聚酶(RNA Dependent RNA Polymerase,RDRP)基因序列设计了一套巢式RT-PCR引物,用该引物从猪粪便样品中扩增出与预期目的产物大小一致的条带,经克隆、测序后获得的序列与GenB ank数据库序列比对,证明所扩增的序列属于猪诺如病毒,表明本研究成功建立了猪诺如病毒巢式RT-PCR检测方法。该检测方法具有高特异性和敏感性,应用该方法检测某猪场健康育肥猪粪便样品,阳性率为54.5%。通过RDRP基因进行核苷酸同源比对发现本文获得的猪诺如病毒Wuning 1株属于GII群诺如病毒,与美国猪诺如病毒毒株OH-QW101/03/US、中国猪诺如病毒毒株Norovirus pig/GII/Ch6/China/2009核苷酸序列同源性最近。值得注意的是猪诺如病毒Wuning1毒株与武汉人诺如病毒毒株E2120/CHN/2010核苷酸同源性高达77.1%,说明猪诺如病毒Wuning 1毒株与武汉人诺如病毒基因组上亲缘性较近。本研究成功建立了一种检测猪诺如病毒的巢式RT-PCR方法,并应用于临床猪粪便样品的检测,为猪诺如病毒的诊断与监测提供了可供借鉴的方法、为猪诺如病毒的进化、分子病毒学及与人诺如病毒关系的深入研究提供依据。
- 陈燕君唐玉新周信荣宋德平黄瑫彭棋李安琪张帆帆张田生叶昱吴琼
- 关键词：巢式RT-PCR同源性分析
- 利用CRISPR/Cas9系统快速构建携带EGFP的PRV-ΔTK重组变异株
- 2024年
- 伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)能够引起猪只出现以呼吸困难、繁殖障碍和神经系统疾病等为特征的伪狂犬病,在世界范围内传播广泛。2011年以来,新现的PRV变异株导致传统疫苗株的免疫保护效果不佳,且原有的疫苗株制备方法耗时耗力,因此现阶段急需开发一种高效疫苗株筛选的方法。采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,设计2条靶向PRV毒力基因TK的单链引导RNA(single guide RNA,sgRNA),敲除PRV变异株CH/JX/2016编码的TK基因,再利用同源修复质粒在TK基因座位置插入增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP),经多轮蚀斑纯化获得rPRV-ΔTK/EGFP毒株。结果表明本研究构建的sgRNA切割效率高,只经过3轮纯化就可完成rPRV-ΔTK/EGFP毒株的制备,且EGFP基因正常表达。CRISPR/Cas9系统能够简便快速高效地编辑PRV基因,在疫苗候选株创制中潜力巨大,而且拯救的rPRV-ΔTK/EGFP毒株不仅可以作为研究PRV变异株感染进程的示踪毒株,还能用于后续抗病毒药物的筛选。
- 叶再娇曾川顾俊王培霞沈金燕宋德平黄冬艳黄冬艳何后军邬向东叶昱
- 关键词：伪狂犬病病毒
- 猪流行性腹泻病毒感染调控干扰素反应的研究进展被引量：3
- 2020年
- 猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)是一种烈性传染的肠道冠状病毒,主要导致仔猪腹泻、脱水、高发病率和高死亡率。全球范围暴发的高致病性PEDV变异毒株给养猪业带来巨大经济损失。PEDV调控宿主天然免疫,对其成功感染宿主和复制增殖具有重要影响。本文主要阐述PEDV感染时,干扰素(Interferon,IFN)在猪肠道细胞发挥的功能,并简单介绍PEDV病毒及其编码的蛋白调控IFN-α/β和IFN-λ的分子机制,从而阐明PEDV是如何逃逸宿主天然免疫反应。
- 丁珍吴琼丘建龙黄冬艳宋德平叶昱唐玉新
- 关键词：肠道天然免疫干扰素免疫逃逸
- 杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中的应用
- 本研究旨在应用杆状病毒表达系统为载体，构建了H9N2亚型禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：一方面可以在杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，另一方面杆状病毒基因组中所携带的HA基因也通过转导的作用，使其在动物细...
- 林文耀张杰程晓亮叶昱陈筱薇樊惠英廖明
- 关键词：禽流感疫苗研制杆状病毒HA蛋白
- 以原核表达的猪δ冠状病毒N蛋白为包被抗原的间接ELISA方法的建立被引量：13
- 2016年
- 为建立检测血清中猪δ冠状病毒(PDCoV)抗体的间接ELISA方法,本研究根据PDCoV的N基因序列设计特异性引物,扩增出N蛋白全基因序列,将其克隆至低温表达载体p Cold I中并转入BL21,诱导表达获得大小约为41 ku的可溶性目的蛋白;western blot试验表明所表达的蛋白具有反应活性。以纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了PDCoV间接ELISA抗体检测方法。结果表明,本研究建立的ELISA方法阴阳性临界值为0.316,与猪流行性腹泻病毒等6种猪常见病原阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,重复性和稳定性均较好。应用建立的间接ELISA方法,对收集自江西各地区282份猪血清进行检测,阳性率为12.8%(36/282),表明PDCoV在我省猪群中普遍存在。本实验建立的PDCoV抗体捕获间接ELISA为临床上猪群PDCoV感染监测和流行病学调查提供了实验依据。
- 张帆帆宋德平郭楠楠叶昱周信荣李安琪张敏彭棋陈燕君黄冬艳唐玉新
- 关键词：N蛋白原核表达间接ELISA
- 利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法
- 本发明公开了一种利用pCold-sumo表达载体高效表达PCV 2 Cap蛋白的方法，该方法包括以下步骤：抽提PCV 2病毒的DNA，扩增得到PCV 2去核定位信号肽的Cap蛋白的基因片段；将扩增片段连接到pCold-S...
- 樊惠英廖明陈春丽叶昱张杰
- 文献传递
- 三种猪的肠道腹泻冠状病毒三重RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：6
- 2020年
- 为了同时检测引起猪只腹泻的猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪丁型冠状病毒(Porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻冠状病毒(Swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV)这三种主要肠道冠状病毒,试验设计3对特异性引物,建立PEDV、PDCoV和SADS-CoV的三重RT-PCR方法,同时进行特异性、敏感性、重复性试验,并检测临床样品对方法进行验证。结果表明:采用建立的三重RT-PCR方法对PEDV、PDCoV和SADS-CoV进行扩增,分别扩增出大小约为486 bp、329 bp和628 bp的特异性片段;该方法对猪瘟病毒、猪传染性肠胃炎病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒不能扩增出任何片段,特异性好;对PDCoV、PEDV和SADS-CoV的最低检测量分别为1×10^6,1×10^3,1×10^4 copies/μL,具有较好的敏感性;在196份临床样品中,PEDV的阳性检出率为13.27%,PDCoV为12.24%,SADS-CoV为0,同时多重RT-PCR与单项RT-PCR检测方法的符合率均为100%。说明建立的三重RT-PCR方法能够同时特异敏感、高效廉价检测出猪群中PDCoV、PEDV及SADS-CoV这三种肠道冠状病毒,具有快速、便捷和经济的特性,可用于临床大规模流行病学调查和诊断。
- 曾秀秀宋德平张帆帆张帆帆叶昱李凯吴琼叶昱于振兴丁珍陈君吴琼曾秀何后军唐玉新
- 关键词：猪流行性腹泻病毒腹泻
- 一株鼠李糖乳杆菌的培养条件优化研究被引量：5
- 2018年
- 为了探索鼠李糖乳杆菌的生长特性和最适培养条件,研究采用单因素试验设计,分别考察了温度、培养基初始p H值、供氧水平和培养周期等参数对鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus GG,LGG)菌体生长的影响。结果表明鼠李糖乳杆菌的最适生长温度为39℃、最适p H为6.0,适宜在低溶氧量的环境中培养。研究证实鼠李糖乳杆菌适宜在偏酸性的厌氧环境中生长,在39℃下培养6 h活菌量可达108.5cfu/m L,上述结果对于鼠李糖乳杆菌的规模化生产具有一定的指导意义。
- 罗素贤叶昱周信荣周信荣宋德平陈燕君唐玉新
- 关键词：益生菌鼠李糖乳杆菌菌落计数
- 杆状病毒双表达载体流感疫苗诱导H9N2亚型禽流感病毒致死性攻击的BALB/c小鼠获得完全保护
- H9N2亚型禽流感病毒在禽类中广泛流行,虽然它的致病性比较温和,却能引起鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鹅、野鸡、鹧鸪和鸽等禽类发病,甚至传染给包括人在内的哺乳动物。因此,迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防H9N2亚型禽流感。以杆...
- 林文耀樊惠英程晓亮叶昱陈筱薇廖明
- 关键词：HA基因
