- p38 MAPK在嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放MCP-1中的作用被引量：5
- 2006年
- 目的:探讨支气管上皮细胞与嗜酸性粒细胞联合培养过程中炎性介质的释放及其机制.方法:应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量比较嗜酸性粒细胞、支气管上皮细胞及其联合培养上清液中单核细胞趋化蛋白(MCP)-1的释放以及p38MAPK抑制剂SB203580干预的影响;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析联合培养过程中嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞MCP-1基因表达的活化及SB203580对MCP-1表达的抑制作用.结果:经嗜酸性粒细胞活化后,支气管上皮细胞中MCP-1基因表达明显上调;嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞联合培养上清液中MCP-1蛋白质释放显著增加[(1266±127)ng/Lvs(134±25)ng/L,P<0.001];多聚甲醛固定后的嗜酸性粒细胞不能释放MCP-1,但其在与支气管上皮细胞联合培养过程中仍可增加支气管上皮细胞释放MCP-1[(773±48)ng/Lvs(107±15)ng/L,P<0.001];p38MAPK抑制剂SB203580可有效抑制嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞表达MCP-1基因,显著降低正常嗜酸性粒细胞和多聚甲醛固定嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞联合培养过程中MCP-1的释放[(1335±115)ng/Lvs(481±42)ng/L和(868±89)ng/Lvs(239±26)ng/L,P<0.001].结论:嗜酸性粒细胞可通过p38MAPK信号传导通路活化支气管上皮细胞表达MCP-1,调控过敏性气道炎症反应.
- 王成彬童红莉田亚平汪德清黄振国叶伟基李洛谊林伟基
- 关键词：支气管嗜酸细胞单核细胞化学吸引蛋白质1P38
- 屋尘螨1类变应原促进外周血嗜酸性粒细胞释放细胞因子的探讨被引量：1
- 2007年
- 目的探讨屋尘螨1类变应原(DerP1)对嗜酸性粒细胞(E)释放炎性细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α的影响。方法用CD16抗体磁珠法从新鲜人外周血分离E;5×105/mlE与5μg/mlDerP1共培养12h;用流式细胞小球微阵列(cytometricbeadarray,CBA)法定量细胞培养上清液中细胞因子。结果外周血E单独培养过程中仅有极少量IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α释放,但与5μg/mlDerP1共育时,培养上清液中上述5种细胞因子浓度显著增加(P均<0.001),IL-10增加约5倍,其他4种细胞因子均增加约100倍。结论DerP1对E释放炎性细胞因子具有很强的促进作用。
- 王成彬黄振国李洛谊叶伟基林伟基丛玉隆
- 关键词：屋尘螨嗜酸性粒细胞细胞因子
- 嗜酸性粒细胞对支气管上皮细胞中p38 MAPK信号转导通路的活化作用观察
- 2008年
- 目的探讨嗜酸性粒细胞在与支气管上皮细胞接触共培养过程中对后者炎性介质释放的影响。方法用CD16抗体磁珠法分离嗜酸性粒细胞,免疫印迹(Western blotting)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管上皮细胞中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、激活转录因子(ATF)-2蛋白含量,微珠免疫沉淀结合免疫印迹法检测p38MAPK活性。结果经与嗜酸性粒细胞共同培养活化后,支气管上皮细胞中磷酸化p38MAPK蛋白含量及其活性均显著上升,p38MAPK信号转导通路链中下级底物蛋白质ATF-2(细胞内调控某些基因表达的转录因子)量也显著上升;多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞同样可以活化支气管上皮细胞,增加其细胞内p38MAPK蛋白质磷酸化。p38MAPK酶选择性抑制剂SB203580可有效抑制p38MAPK诱导其底物ATF-2磷酸化。结论嗜酸性粒细胞与支气管上皮细胞接触共培养过程中对炎性介质表达和释放的调控作用可能是通过活化支气管上皮细胞内p38MAPK信号传导通路未实现的。
- 王成彬黄振国叶伟基林伟基丛玉隆
- 关键词：P38丝裂原活化蛋白激酶嗜酸细胞
- 嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放IL-6被引量：1
- 2005年
- 目的:探讨嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞后对其细胞因子白细胞介素(IL)-6分泌的影响。方法:正常和1%多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞分别与支气管上皮细胞(BEAS-2B)细胞联合培养,应用流式细胞微珠实验(CBA)方法定量细胞培养上清液中细胞因子的浓度,用RT-PCR方法分析经嗜酸性粒细胞活化后支气管上皮细胞中IL-6的基因表达。结果:经嗜酸性粒细胞活化后,支气管上皮细皮中IL-6基因表达显著上调,细胞培养上清液中IL-6蛋白质浓度升高,多聚甲醛固定后的嗜酸性粒细胞能够刺激支气管上皮细胞中IL-6基因表达和蛋白质释放。结论:嗜酸性粒细胞可活化支气管上皮细胞中IL-6基因表达和促进其蛋白质分泌。
- 王成彬黄振国叶伟基鲍依希田亚平林伟基
- 关键词：支气管上皮细胞嗜酸性粒细胞增多白细胞介素6
- 支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对IL-8释放的影响
- 目的探讨支气管上皮细胞和嗜酸性粒细胞联合培养对细胞趋化因子白细胞介素（IL）-8分泌的影响。方法人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与人外周血嗜酸性粒细胞联合培养;应用流式细胞微珠实验（CBA）方法定量细胞培养上清液中细...
- 王成彬黄振国叶伟基鲍依希田亚平林伟基
- 文献传递
- MG-132活化人支气管上皮细胞表达IL-6
- 2006年
- 目的探讨核因子(NF-κB)抑制剂MG-132对支气管上皮细胞释放细胞因子白细胞介素(IL)-6的影响。方法人支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞与MG-132(10μmol·L-1)共同培养12h,细胞核中NF-κB活性和细胞培养上清液中IL-6浓度用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法定量,BEAS-2B细胞总IL-6mRNA表达,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析。结果BEAS-2B细胞与MG-132共同培养过程中,BEAS-2B细胞IL-6mRNA上调,细胞培养上清液中IL-6释放量显著增加,而且IL-6增加量与细胞培养液中MG-132浓度呈正相关,但与NF-κB活性无关。结论MG-132可诱导BEAS-2B细胞释放IL-6,但不是通过NF-κB活化途径。
- 王成彬谷锋田亚平黄振国叶伟基李洛谊林伟基鲍依稀
- 关键词：支气管上皮细胞NF-ΚBMG-132IL-6
- 细胞固定技术在两种细胞共同培养研究中的应用被引量：3
- 2006年
- 目的探讨细胞固定对鉴别支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞两种细胞共同培养过程中细胞代谢产物来源的作用及其机制。方法用1%多聚甲醛固定嗜酸粒细胞和支气管上皮细胞系BEAS-2B细胞;通过锥虫蓝、伊红细胞染色,观察多聚甲醛固定对细胞形态、结构、活力和与正常细胞接触培养过程中与正常细胞黏附能力的影响;用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法定量分析固定细胞与正常细胞共同培养过程中对白细胞介素(IL)-6释放的影响。结果多聚甲醛固定后支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞均变为死亡细胞,但其形态、结构及嗜酸粒细胞中颗粒着色无明显变化;多聚甲醛固定的BEAS-2B细胞与正常及固定的嗜酸粒细胞接触培养仅有极少量细胞发生黏附,而多聚甲醛固定的嗜酸粒细胞与正常BEAS-2B细胞接触培养则有较大数量的细胞发生黏附,但黏附细胞数量少于两种正常细胞的共同培养;固定后的嗜酸粒细胞与正常BEAS-2B细胞共同培养过程中可诱导BEAS-2B细胞释放IL-6。但与嗜酸粒细胞单独培养比较,固定后BEAS-2B细胞与正常嗜酸粒细胞共同培养对细胞培养上清液中IL-6浓度无明显影响。结论经多聚甲醛固定后,细胞死亡并丧失其代谢功能,但其表面仍保留可诱导其他细胞活化的结构成分,此技术可用于两种或多种细胞共同培养过程中代谢产物来源的鉴别。
- 王成彬黄振国叶伟基李洛谊鲍依稀田亚平林伟基
- 关键词：上皮细胞嗜酸细胞白细胞介素6酶联免疫吸附测定
- 嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞释放IL-6
- 目的探讨嗜酸性粒细胞活化支气管上皮细胞后对其细胞因子白细胞介素（IL）-6分泌的影响。方法正常和1%多聚甲醛固定的嗜酸性粒细胞分别与支气管上皮细胞（BEAS-2B）细胞联合培养,应用流式细胞微珠实验（CBA）方法定量细胞...
- 王成彬黄振国叶伟基鲍依希田亚平林伟基
- 文献传递
- p38 MAPK对嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞共培养时细胞因子释放的调控作用被引量：1
- 2007年
- 目的了解嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞相互作用诱导细胞因子释放的p38MAPK信号转导通路。方法用CD16磁珠抗体分离外周血中嗜酸性粒细胞,以嗜酸性粒细胞和支气管上皮细胞(BEAS-2B)接触共培养为实验模型,观察SB203580对细胞培养上清液中细胞因子浓度的影响。细胞因子浓度采用ELISA和流式细胞微珠方法测定。结果SB203580能够有效抑制BEAS-2B细胞释放IL-6、IL-8(P<0.05)和嗜酸性粒细胞释放IL-8(P<0.01)。SB203580对嗜酸性粒细胞与BEAS-2B细胞接触共培养诱导的IL-6、IL-8和IP-10释放具有显著抑制作用(P<0.001)。结论嗜酸性粒细胞、BEAS-2B细胞单独或相互作用时均通过p38MAPK信号转导通路释放细胞因子。
- 王成彬黄振国叶伟基林伟基鲍依希田亚平
- 关键词：嗜酸细胞支气管上皮细胞
- 支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞的不同培养方式对IL-6释放的影响
- 2006年
- 目的:以支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞共培养为实验模型,探讨不同培养方式对IL-6释放的影响.方法:将支气管上皮细胞和嗜酸粒细胞分别单独培养、接触共同培养、分隔共同培养(用分隔膜将两种细胞分隔在上、下两个池中不接触培养,两池中的培养液可以自由通过分隔膜孔)和在Ma-trigel中共同培养.两种细胞在不同培养条件下释放的IL-6应用酶联免疫吸附试验方法定量.结果:支气管上皮细皮与嗜酸粒细胞在同一培养孔中分隔共同培养时其IL-6释放量远高于两种细胞分别在两个培养孔中独自培养后上清液中IL-6之和[(388±40)ng/Lvs(107±10)ng/L,P<0.001].而两种细胞在同一培养孔中(没有隔膜分隔)接触共同培养,其IL-6释放量又远高于其分隔培养[(1270±131)ng/Lvs(388±40)ng/L,P<0.001];将上述两种细胞在Matrigel中共培养,其IL-6释放又显著高于其在非Matrigel中的培养[(2076±165)ng/Lvs(1270±131)ng/L,P<0.01].结论:支气管上皮细胞与嗜酸粒细胞共同培养过程中可受到相互接触和其在培养过程中所释放的某些物质的活化,从而增加多功能细胞因子IL-6的释放.
- 王成彬黄振国叶伟基李洛谊鲍依稀童红莉田亚平林伟基
- 关键词：支气管上皮细胞嗜酸细胞白细胞介素-6
