刘建英
- 作品数：6 被引量：16H指数：2
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- TrkB—BDNF信号传导通路对神经母细胞瘤细胞耐药和转移的影响被引量：7
- 2013年
- 目的TrKPrBDNF信号传导通路与神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞的化疗耐药和转移密切相关。本研究探讨阻断TrkBBDNF信号传导通路的三条下游信号传导通路后，NB细胞SHSY5Y对化疗药物顺铂的敏感性及分泌基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinas-9，MMP-9）的影响。方法常规培养SH—SY5YNB细胞，用纳摩尔浓度全反式维甲酸（albtransRetinoicAcid，ATRA）诱导酪氨酸激酶受体B（tyrosinekinasereceptorB，TrkB）高表达，加入脑源性神经营养因子（brain-derivedneurotrophicfactor，BDNF），从而激活Trk昏BDNF信号传导通路。用磷脂酰肌醇一3激酶（P13K）抑制剂LY294002、磷脂酶C（PLC）抑制剂U73122、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）抑制剂U0126阻断该信号通路的相应下游信号传导通路后，加入化疗药顺铂（CDDP）。四甲基偶氮蓝比色（MTT）实验方法检测应用i种抑制剂前后细胞的存活率的变化；流式细胞仪（FCM）检测应用三种抑制剂前后细胞凋亡率的变化。酶联免疫吸附测定（ELISA）技术检测SH—SY5Y细胞培养上清中MMP-9含量。结果ATRA＋BDNF＋CDDP组NB细胞的存活率及凋亡率与对照组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。ATRA＋BDNF＋LY294002＋CDDP组细胞对顺铂的敏感性增加，细胞的存活率明显降低，凋亡率明显升高，与ATRA＋BDNF＋CDDP组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）；而ATRA＋BDNF＋U73122＋CDI）P组、ATRA＋BDNF＋U0126＋CDDP组细胞对顺铂的敏感性降低，细胞的存活率明显升高，凋亡率明显降低，与ATRA＋BDNF＋CDDP组相比，差异无统计学意义（P〉0．05）。ELISA结果显示，ATRA＋BDNF组MMP-9含量明显高于对照组及ATRA组（P〈0．05）；ATRA＋BDNF＋LY294002组MMP9含量明显低于ATRA＋BDNF组（P〈O．05），与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ATRA＋BDNF＋U73122组MMP-9含量明显高于对照组及ATRA组（P〈0．
- 刘建英李坤霞李爱敏高惠敏
- 关键词：神经母细胞瘤信号传导基质金属蛋白酶9
- 酪氨酸激酶受体B-脑源性神经营养因子信号传导通路对神经母细胞瘤细胞分泌血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶-9的影响被引量：3
- 2013年
- 目的探讨酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptorB，TrkB）-脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor，BDNF）信号传导通路对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞SH-SY5Y分泌血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9，MMP-9）的影响。方法用全反式维甲酸（all—trans retinoic acid，ATRA）诱导SH—SY5Y细胞表达TrkB，加入外源性BDNF，从而激活TrkB—BDNF信号传导通路及其3条下游信号通路。再用特异性酪氨酸激酶抑制剂K252a阻断TrkB—BDNF信号传导通路；用磷脂酰肌醇-3激酶（phos—phatidylinositol 3-hydroxy kinase，P13K）抑制剂LY294002、磷脂酶C抑制剂U73122、丝裂原活化蛋白激酶抑制剂U0126分别阻断TrkB-BDNF的3条相应下游信号传导通路。采用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中VEGF及MMP-9含量。结果ATRA＋BDNF组VEGF[（485．89±109．99）pg／ml]及MMP-9[（15．73±1．72）pg／ml]含量明显高于对照组及ATRA组（P〈0．05）；ATRA＋BDNF＋K252a组VEGF[（272．42±86．33）pg／ml]及MMP-9[（5．25±1．44）pg／ml]含量明显低于ATRA＋BDNF组（P〈0．05），与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ATRA＋BDNF＋LY294002组VEGF[（314．12±24．68）pg／ml]及MMP-9[（4．91±1．08）pg／ml]含量明显低于ATRA＋BDNF组（P〈0．05），与对照组及ATRA组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；ATRA＋BDNF＋U73122组VEGF[（444．08±64．49）pg／ml]及MMP-9[（13．28±3．38）pg／ml]含量与ATRA＋BDNF组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。ATRA＋BDNF＋U0126组VEGF[（429．97±19．95）pg／ml]及MMP-9{（13．96±4．45）pg／ml]含量与ATRA＋BDNF组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论激活TrkB-BDNF信号传导通路可促进NB细胞合成、分泌VEGF及MMP-9。TrkB—BDNF信号传导通路可能通过进一步激活其下游P13K／Akt�
- 刘建英高惠敏李爱敏蔡维艳初清
- 关键词：神经母细胞瘤K252ALY294002血管内皮生长因子金属蛋白酶-9
- 靶向沉默Notch活化复合酶NACK对神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞增殖、凋亡的影响
- 2022年
- 目的探讨靶向沉默Notch活化复合酶NACK对神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法通过脂质体介导siRNA转染SK-N-BE(2)细胞,qRT-PCR、Western blot方法检测转染后NACK基因的沉默效率;CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR、Western blot方法检测靶向抑制NACK表达后Notch1信号传导通路下游靶基因Hes1、c-Myc和n-Myc的表达情况。结果成功转染NACK siRNA的实验组细胞的NACK mRNA基因及其蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。CCK-8法检测到实验组细胞增殖率较阴性和空白对照组相比明显下降(P<0.01),流式细胞术检测到实验组细胞凋亡率较阴性和空白对照组明显增加(P<0.01)。Western blot、qRT-PCR方法检测到实验组Notch1信号通路下游相关靶基因Hes1、c-Myc和n-Myc的蛋白水平和mRNA表达水平较阴性对照组及空白对照组均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶向沉默NACK基因可以抑制神经母细胞瘤SK-N-BE(2)细胞增殖,促进凋亡,有望成为神经母细胞瘤基因治疗的潜在靶点。
- 刘建英于欣欣王建勇李爱敏李林林郝晓昱
- 关键词：神经母细胞瘤NOTCHNACK
- 他米巴罗汀对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖及酪氨酸激酶受体A、N-myc表达的影响被引量：2
- 2019年
- 目的研究他米巴罗汀(Tamibarotene,Am80)对神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖抑制能力及酪氨酸激酶受体A(TrkA)、N-myc (即MYCN) mRNA和蛋白表达的影响,为治疗神经母细胞瘤提供实验依据。方法采用不同浓度(0、10、20、40、80、160 μmol/L)Am80作用SH-SY5Y细胞48 h。采用细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测细胞增殖情况。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western-blot法检测48 h时SH-SY5Y细胞中TrkA、MYCN mRNA和蛋白的表达情况。结果当Am80浓度为10 μmol/L时,Am80对SH-SY5Y细胞无显著抑制作用[(3.51±1.68)%,抑制率<5%];当Am80浓度为20 μmol/L时,显示弱抑制作用[(9.60±1.97)%,抑制率<10%];Am80浓度为80 μmol/L时,对SH-SY5Y细胞增殖的抑制率显著增强[(57.43±4.95)%];TrkA随着Am80浓度增加,表达量增加;Am80能显著降低SH-SY5Y细胞MYCN的表达(10 μmol/L:0.65±0.05比20 μmol/L:0.36±0.06),差异有统计学意义(P<0.05)。结论Am80可抑制SH-SY5Y细胞的增殖,随着Am80浓度的增加,对细胞的抑制作用逐渐增强,Am80浓度越高对肿瘤细胞的抑制作用越显著。其机制可能与通过下调MYCN来提升TrkA的表达有关。
- 刘建英李爱敏王建勇王晓莉王莉司莹莹
- 关键词：他米巴罗汀增殖
- 经股动脉全脾栓塞术序贯腹腔镜脾切除术成功治疗儿童重症原发免疫性血小板减少症一例并文献复习被引量：2
- 2015年
- 原发免疫性血小板减少症（ITP）是免疫介导的获得性出血性疾病,是儿童时期常见的出血性疾病,年发病率为4/10万～5/10万1.近年来,随着微创技术的发展,脾栓塞术和腹腔镜脾切除术（LS）已成为儿童ITP的治疗选择之一[2-3].2014年我院以脾动脉栓塞序贯LS成功治疗1例重症ITP患儿,报告如下并复习相关文献资料.
- 王晓莉李爱敏蔡维艳郑延波孙世杰初清辛毅李坤霞王莉刘建英
- 关键词：免疫性血小板减少症腹腔镜脾切除术文献复习脾栓塞术序贯
- Am80对神经母细胞瘤细胞化疗敏感性的影响及机制研究被引量：2
- 2018年
- 目的探讨他米巴罗汀(Am80)对人神经母细胞瘤(NB) SH-SY5Y细胞化疗敏感性的影响,并进一步研究相关分子机制。方法 SH-SY5Y细胞随机分为实验组和空白对照组。浓度分别为0、10、20、40、80、160μmol/L的Am80作用于SH-SY5Y细胞48 h后,以CCK-8法检测细胞增殖的变化;浓度分别为0、0.1、0. 2、0.4、0. 8、1.6μmol/L的阿霉素单独及分别联合浓度为10、20μmol/L的Am80处理细胞48 h,应用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;浓度为0、10、20μmol/L的Am80处理细胞48 h后,均更换含浓度1μmol/L阿霉素的培养基继续培养1 h,流式细胞术检测细胞内阿霉素相关平均荧光强度(MFI);浓度为0、10、20μmol/L的Am80处理细胞48 h后,Western blot检测细胞MRP1及MYCN蛋白的表达。结果不同浓度Am80能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖,并呈剂量依赖性(P<0.05);Am80能降低阿霉素的IC_(50)值并提高阿霉素的细胞内蓄积量(P<0.05);Western blot结果显示,Am80以浓度依赖方式下调MRP1及MYCN蛋白的表达(P<0.05)。结论 Am80能有效抑制SHSY5Y细胞的增殖,并增加细胞化疗敏感性,其作用机制可能通过抑制MYCN蛋白表达,下调MRP1蛋白的表达,进而增强阿霉素胞内浓度,从而提高SH-SY5Y细胞对阿霉素的化疗敏感性。
- 司莹莹李爱敏王晓莉王建勇王莉刘建英
- 关键词：神经母细胞瘤细胞增殖化疗敏感性
