刘利新
- 作品数：8 被引量：10H指数：2
- 供职机构：中国科学院研究生院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项北京市教育委员会科技发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 通过对免疫共沉淀技术的优化验证蛋白质弱相互作用被引量：3
- 2013年
- 采用单因子法对影响免疫共沉淀结果的各因素进行优化.以hCLP46(humanCAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin为例,对相互作用开展研究.通过对细胞裂解液各组分浓度、抗体用量、hCLP46的蛋白量和交联剂DSP因素的优化,验证了hCLP46(human CAP10-like protein46)蛋白和内质网分子伴侣calnexin间的弱相互作用.研究结果为探讨蛋白质之间弱相互作用提供一定的参考价值.
- 冯晓琴徐峰王嵬刘利新
- 关键词：免疫共沉淀CALNEXIN影响因素蛋白质相互作用
- 串联亲和纯化技术筛选hCLP46的相互作用蛋白被引量：2
- 2011年
- hCLP46(human CAP10-like protein46)是从MDS-AML患者的CD34+干细胞cDNA文库中筛选出的基因.我们利用串联亲和纯化技术来筛选与hCLP46有相互作用的蛋白.通过体内交联-甘氨酸洗脱策略,检测到7条有差异的蛋白带,经液相色谱-质谱联用鉴定,得到了CNX和PDI等一系列内质网伴侣蛋白.所以hCLP46可能是一个糖蛋白,其成熟过程利用了BiP/Grp94和CNX/CRT 2套伴侣蛋白系统.
- 徐峰穆昕王嵬刘利新
- 关键词：交联剂骨髓增生异常综合症
- 人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用被引量：1
- 2007年
- mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少.到目前为止,尚没有该基因市售的抗体出现,阻碍了对该基因机理的研究.目的是利用PCR方法,从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因,制备其多克隆抗体血清.实验结果显示,通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体,用于Western Blotting试验,可以检测到该蛋白内源性的表达;用于激光共聚焦定位实验显示,该内源性蛋白定位在细胞核内;此抗体同时可用于免疫沉淀实验.因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得,为进一步研究该基因的功能创造了条件.
- 刘利新刘树峰常乃柏刘辉王嵬
- 关键词：蛋白印迹免疫沉淀
- 利用假病毒技术研究抗HIV-1药物的作用机制被引量：2
- 2011年
- 采用假病毒系统对5种具有抗HIV-1活性的天然化合物的作用机制进行研究,建立了一种可在普通实验室进行抗HIV-1作用机理研究的实验平台。通过构建假病毒系统,利用定量PCR实验分析感染细胞内病毒生命周期早期的特异性DNA产物,发现5种化合物可通过不同的作用机制在早期抑制HIV-1复制。部分化合物表现出新的作用机制,如LC-1、LC-2可抑制HIV-1的入核。通过分析药物对2种不同的逆转录病毒(HIV-1和MLV)的感染性,发现LC-1可特异地阻断HIV-1的复制,而对MLV无影响。同时为了检测药物是否也会在病毒的生命周期晚期有作用,利用直接转染前病毒质粒的方式进行了验证。利用以上方法,初步确定了这几种药物的作用靶点,构建了一个有效的抗HIV-1药物作用机理的研究平台。
- 李艳丽郑永唐肖伟烈孙汉董王嵬刘利新
- 关键词：HIV-1病毒特异性
- 中国北方汉族人群甘露糖结合凝集素与HIV易感性的研究
- 2008年
- 目的研究中国北方汉族人群甘露糖结合凝集素(MBL)启动子多态性及血浆MBL浓度对HIV易感性的影响。方法采用病例对照研究,病例组为115例北京佑安医院确诊为HIV感染的患者,对照组为115例非HIV感染的健康人,用焦磷酸测序法检测样本MBL基因启动子-550(H/L)和-221(Y/X)两个位点的单核苷酸多态性,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测样本血浆MBL浓度。结果基因型LY/LY、LY/LX、HY/LY、HY/HY和LX/LX在病例组中分别检测到66例(57.40%)、25例(21.70%)、17例(14.80%)、5例(4.30%)和2例(1.70%),在对照组中分别检测到77例(67.00%)、23例(20.00%)、12例(10.40%)、0例(0.00%)、和3例(2.60%);单倍型LY、HY、LX在HIV感染组中出现的频率分别为75.70%、11.70%和12.60%,在健康对照组中出现的频率分别为82.20%、5.20%和12.60%,病例组和对照组单倍型分布的差异有统计学意义(P=0.041)。病例组血浆MBL浓度平均值为(1775.14±786.31)μg/L,对照组血浆MBL浓度平均值为(3672.21±597.13)μg/L,两组血浆MBL浓度的差异有显著的统计学意义(P=0.001)。结论中国北方汉族人群MBL基因启动子的单倍型以LY和HY为主,基因型以LY/LY和LY/LX为主,病例组血浆MBL浓度平均值只有对照组血浆MBL浓度的50%。故我们推测中国北方汉族人群MBL基因启动子的多态性及血浆MBL浓度的高低可能与HIV的易感性相关,血浆MBL浓度低的个体易于感染HIV。
- 盛艾娟刘利新吴昊王友信彭晓霞王嵬
- 关键词：甘露糖结合凝集素单核苷酸多态性焦磷酸测序人类免疫缺陷病毒易感性
- 酵母双杂交技术筛选hCLP46的相互作用蛋白
- 2008年
- 目的:利用酵母双杂交技术,筛选人白细胞cDNA文库中能与人类CD34+干/祖细胞异常表达蛋白hCLP46(human CAP10-like protein46)相互作用的未知蛋白。通过对其相互作用蛋白的筛选和研究,研究hCLP46基因在骨髓增生异常综合症MDS-AML的作用机制,为MDS-AML的临床治疗和诊断提供理论基础。方法:以pGBKT7-hCLP46为诱饵质粒筛选人白细胞cDNA文库,得到阳性克隆,并对验证后的阳性克隆的外源性片段进行测序及同源性分析。结果:经过两次筛选、验证,从人白细胞cDNA文库中得到5个阳性克隆,对验证后的阳性克隆的外源片段进行测序及同源性分析,最终得到4个不同的候选基因序列。结论:应用酵母双杂交系统,共筛选得到4个不同的基因,其编码蛋白与hCLP46有相互作用,可能与MDS-AML发病机制相关。
- 张文娟杜杰常乃柏张恬王嵬刘利新
- 关键词：酵母双杂交
- 人CD_(34)^+干/祖细胞异常表达基因hCLP46功能初步探讨被引量：2
- 2007年
- hCLP46是从MDS-AML的CD3+4细胞cDNA文库中筛选出的一个新的基因,为了进一步对该基因进行功能、性质研究,利用RT-PCR技术证明该基因在人脑组织中有表达,而在人胚胎肝组织中无表达.将该基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,转染U937细胞,发现过量表达该基因的U937细胞能够抑制TGF-β对P15基因的上调.利用生物信息学手段对该基因进行序列分析,得到其启动子区存在一个典型的"CpGisland".提示该基因有可能参与甲基化调节途径,为进一步研究该基因的作用机制打下基础.
- 张恬常乃柏王友信刘辉杜杰宋曼殳卢小梅王嵬刘利新
- 关键词：CPGISLANDP15
- 甘露糖结合凝集素与人类免疫缺陷病毒感染的关联性研究(英文)
- 2011年
- 目的探讨甘露糖结合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)多态性与中国北方汉族人群HIV-1感染的关联。方法采用病例对照研究,以91例HIV感染者(北京佑安医院)和91例健康人(北京同仁医院)作为研究对象,用焦磷酸测序技术(pyrosequencing)检测病例组和对照组MBL ExonⅠ第52、54、57三个密码子的点突变和启动子+4、-221、-550三个位点的多态性,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血浆MBL总浓度及血浆中有活性的MBL浓度,用流式细胞术检测HIV感染者的CD4+T淋巴细胞计数,用bDNA法检测HIV感染者的病毒载量。结果等位基因B在HIV-1感染者中的分布频率显著高于健康对照组(0.18vs0.14)。HIV-1感染者的血浆MBL浓度(0.44)及血浆中活性MBL的浓度(0.61)比健康对照组的浓度要低。携带有A/B、A/C或者B/B基因型的HIV-1感染者与携带有A/A基因型的HIV-1感染者比较,血浆中MBL浓度、血浆中活性MBL浓度以及CD4+T细胞数量均偏低,但病毒载量偏高。结论 MBL与中国汉族人群的HIV-1感染具有关联作用。携带有B等位基因型、低MBL浓度以及低MBL活性浓度的个体,更容易受到HIV-1病毒的感染。
- 盛艾娟吴昊兰洁路甲鹏王友信宋曼殳武晶晶刘利新王嵬
- 关键词：甘露糖结合凝集素SNPS病毒载量
