凌明圣
- 作品数：13 被引量：83H指数：5
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- 重组人巨噬细胞集落刺激因子的结构与功能被引量：9
- 1994年
- 重组人粒细胞──巨噬细胞集落刺激因子（ｒｈＧＭ－ＣＳＦ）已经在原核、真核细胞表达并得到纯品，为它的结构与功能研究提供了有利条件．目前国内外对于ｒｈＧＭ－ＣＳＦ的结构与功能研究主要集中在晶体结构、化学修饰、溶液中构象和稳定性以及突变和分子设计方面．分子结构与功能的关系以及与ＧＭ－ＣＳＦ受体作用机理研究也取得了突破性进展．
- 凌明圣徐明波马贤凯
- 关键词：巨噬细胞集落刺激因子
- 聚乙二醇增加重组人粒-单系集落刺激因子复性效率的研究被引量：10
- 1997年
- 重组人粒 -单系集落刺激因子 (rh GM- CSF)在大肠杆菌表达后积累在细胞中形成包涵体 ,在变性的包涵体的抽提液复性过程中 ,目的产物可能聚积而使活性蛋白的得率降低。本研究对聚乙二醇 (PEG)增加复性的能力进行试验。将 rh GM- CSF在 6 mol/L尿素中变性 ,迅速稀释到不同浓度尿素和 PEG的溶液中并保持蛋白浓度为 0 .2 mg/ml,在尿素浓度为 2 .0 mol/L,PEG4 0 0 0对rh GM- CSF的摩尔比为 2 0∶ 1时活性蛋白从 4 0 %增加到 55% ,rh GM- CSF的比活从 5.1× 10 6u/mg增加到 1.0× 10 7u/mg,总蛋白得率从 50 %增加到 10 0 %。表明 PEG能增加变性蛋白的复性效率。
- 凌明圣许祥裕施凤霞丁树标张永恒
- 关键词：集落刺激因子聚乙二醇复性
- Alport综合征及其分子生物学研究被引量：1
- 1994年
- Ａｌｐｏｒｔ综合征（遗传性肾炎）是一种Ｘ染色体连锁的遗传疾病［１，２］。利用限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）技术，缺陷性基因定位在Ｘｑ２２－２６区域［３，４，５］。这种疾病具有进行性血尿症状并最终导致终末期肾疾病，同时还可能伴有一些非肾病症状，诸如听力丧失、圆锥形晶状体、视网膜异常、血小板减少症等。主要的病理学发现是肾小球基底膜（ＧＢＭ）超微结构的变化，包括区域性变薄，增厚和致密层分离，这表明缺陷在于ＧＢＭ结构框架，它是由ＧＢＭ特有的胶原Ⅳ型（ＣＯＬ４）分子形成的复杂网状物。近年来，许多学者致力于Ａｌｐｏｒｔ综合征的分子生物学研究，尤其是胶原Ⅳ型α５亚基（ＣＯＬ４Ａ５）基因，已对其进行了ｃＤＮＡ克隆和基因结构及序列分析［６］，发现了５种大片段缺失和７种点突变。
- 凌明圣
- 关键词：肾炎遗传性分子生物学
- 反相高压液相色谱折叠重组人白细胞介素-2被引量：1
- 1997年
- 重组人白细胞介素２（ｒｈＩＬ２）基因表达产物在大肠杆菌中以不溶性包涵体形式存在，经过菌体发酵和收集、超声破菌、包涵体抽提、稀释透析初步复性、反相高压液相色谱纯化，终产物纯度大于９９％。反相高压液相色谱不仅可以纯化ｒｈＩＬ２，且使产物的总活性提高７９～９倍，比活性提高１４～１８倍，达到１５×１０７ｕ／ｍｇ蛋白质，蛋白得率为５０％～５６％。结果表明，反相高压液相色谱具有纯化和显著提高ｒｈＩＬ２折叠效率的双重功效。
- 凌明圣许祥裕施凤霞朱有华龙娜
- 关键词：人白细胞介素-2折叠高压液相色谱
- 分子伴侣HSP70研究进展被引量：23
- 1993年
- 分子伴侣HSP70在原核、真核细胞均已发现,它们具有共同的生化特征,在细胞内各自分布在特定的区域。其主要生物学功能是促进新生多肽链的正确折叠,对于分子重排、解离聚集蛋白和新生多肽的膜运输也具有重要的辅助作用。
- 凌明圣徐明波姚志建
- 关键词：热休克蛋白
- 大肠杆菌表达的重组人GM-CSF的纯化被引量：1
- 1994年
- 本文对重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)高效表达克隆pZW.GM的表达产物进行纯化,并对纯化的人GM-CSF进行了N端氨基酸序列分析。人GM-CSF基因表达产物在大肠肝菌中以不溶性包涵体形式存在,经超声破菌、包涵体抽提、凝胶过滤层析、复性、离子交换一系列纯化步骤,终产物纯度达99％,按蛋白总量计算回收率达10％,比活性达1×10~7u/mg蛋白质。通过测定纯化人GM-CSF的N端16个氨基酸序列,与由其DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。
- 凌明圣邹民吉徐明波王嘉玺马贤凯
- 关键词：重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子复性纯化氨基酸序列分析
- 重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子溶液中的稳定性初探
- 1995年
- 在大肠杆菌表达的重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF）纯化的基础上,我们研究了其在溶液中的稳定性,发现它在pH6.8的PBS缓冲液中稳定性很好,但在pH8.3的Tris·HCl冲浪中时隔2 wk以上即发生降解,SDS-BAGE分析,相应位置变成两条带,将SDS-PAGE胶电转移至PVDF膜,将膜上出现的两条蛋白染色带剪下,进行N端氨基酸序列分伍,两蛋白均有固定的降解位点.降解的蛋白与未降解的相比,生物活性仅有较激下降。
- 凌明圣孟文华邹民吉徐明波王嘉玺马贤凯
- 关键词：重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子稳定性
- 以包涵体形式存在的重组蛋白的纯化和体外折叠被引量：31
- 1995年
- 基因工程技术已使许多有重要意义的生物活性蛋白质的基因在原核生物中得到表达,为人们欲获得具有潜在临床和工业应用价值的大量蛋白质提供了丰富的来源.但是许多重组蛋白质是以包涵体形式在大肠杆菌中产生,它们的理化性质与天然蛋白质有许多不同之处,故从包涵体中获得高纯的重组蛋白质,进而对变性的重组蛋白质进行构象重折叠,即复性得到具有生物活性的蛋白质,是得到遗传工程产品的重要途径.
- 凌明圣许祥裕丁树标
- 关键词：包涵体折叠重组蛋白提纯
- 人胰岛素样生长因子I基因的半合成及其克隆表达被引量：1
- 1999年
- 将人胰岛素样生长因子 Ⅰ（ＩＧＦ－ Ｉ）基因克隆到 ｐＥＴ１１Ｃ中，构建成 ｐＥＴＩＧＦ－ Ｉ表达载体，完成人ＩＧＦ－Ｉ基因在大肠杆菌中的高表达。方法：利用固相亚磷酸三酯法化学合成人ＩＧＦ－Ｉ基因的２条寡核苷酸片段，通过互补配对和Ｋｌｅｎｏｗ酶促补平成完整的ＩＧＦ－Ｉ双链ＤＮＡ片段，然后经酶切克隆于ｐＴＶ１１８Ｎ载体中，构建ｐＴＶＩＧＦ－Ｉ克隆载体并测定ＤＮＡ序列后，构建ＰＥＴＩＧＦ－Ｉ表达载体。结果：合成的人ＩＧＦ－Ｉ基因经测序证明与设计的一致，人 ＩＧＦ－ Ｉ基因在大肠杆菌中表达量高于 １０％。结论：选用大肠杆菌偏性密码子，小分子的人 ＩＧＦ－
- 凌明圣许祥裕施凤霞丁树标张林元
- 关键词：大肠杆菌克隆
- 牛肝二硫键异构酶的纯化及其对重组人粒/单系集落刺激因子体外折叠作用的研究
- 1997年
- 自牛肝中纯化二硫键异构酶（PDI）。经匀浆、热沉淀、硫酸铵分级分离、阳离子和阴离子交换层析等步骤，得到了比活950U／g电泳纯的PDI。在此基础上研究了PDI对重组人粒／单系集落刺激因子（rhGM－CSF）体外复性作用。结果表明，在PDI与rhGM－CSF摩尔比为2：1时，可使0．5mg／ml的rhGM－CSF正确折叠率提高到60％，比活性由5．0×106U／mg提高到1．0×107U／mg。
- 凌明圣许祥裕施凤霞张永恒丁树标
- 关键词：二硫键异构酶RHGM-CSF纯化
