何志强
- 作品数：14 被引量：136H指数：8
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项教育部跨世纪优秀人才培养计划福建省重大科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生经济管理更多>>
- 戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定被引量：22
- 2003年
- 阻断实验发现,用戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白重组抗原制备的8株抗HEV单克隆抗体(mAb),分别识别3个构象表位和2个线性表位。用抗体捕获反转录PCR方法证实,其中识别2个构象表位的3个mAb可以直接捕获HEV颗粒,表明这2个表位位于HEV颗粒的外表面。识别这两个表位的mAb8C11和8H3均可中和HEV对恒河猴的致病性和感染性。mAb8C11缩短排毒时间的效应较明显,而mAb8H3延迟机体抗HEV抗体阳转时间的效应较明显。二者的中和效应具有较明显的协同作用。中和单抗8C11、8H3对戊肝不同感染时期的血清均有显著阻断作用,Fab片段的阻断作用与完整抗体类似,表明这两个mAb对应的中和表位是HEV体液免疫应答的优势表位。
- 顾颖葛胜祥黄果勇李少伟朱子恒何志强陈毅歆王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体中和表位
- 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究被引量：47
- 2002年
- 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的a .a .394～a .a .6 0 4片段 ,得到的重组蛋白NE2在SDS PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在 ,二聚体对病人血清的反应性明显强于单体 ;质谱分析表明NE2可形成从二聚体到至少六聚体的多种聚体 ;动态光散射测定表明平均分子半径约 4nm ,相当于四聚体 ,但分散度较大 ,提示为多种大小不一的聚合体的混合物。这些证据表明NE2蛋白可形成以同源二聚体为基本单位的多种聚合体形式 ,其中以二聚体间的结合最为紧密 ,并且以二聚体为基础可进一步装配出多种更高级结构 ,从而具有作为HEV疫苗及诊断试剂抗原的良好前景。
- 李少伟张军何志强葛胜祥顾颖林鉴刘如石夏宁邵
- 关键词：大肠杆菌二聚体原核表达
- 颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性被引量：37
- 2004年
- 过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15～3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8～ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3
- 何志强张军李少伟林鉴刘如石陈毅歆王颖彬夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白原核表达抗原性免疫原性
- 茂名公司的经营环境分析和发展战略
- 茂名公司是由页岩油厂发展成为的以炼油为龙头、石油化工一体化的特大型石油化工企业。本文通过查阅大量的资料，广泛收集基础数据，应用管理学和经济学的基本原理和方法，对茂名公司的内、外部环境进行了广泛深入的分析，详细阐述了企业面...
- 何志强
- 关键词：经营环境战略管理区位优势
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒抗体双抗原夹心法ELISA的建立与初步应用被引量：10
- 2002年
- 目的 建立抗戊型肝炎病毒 (HEV)抗体检测的双抗原夹心ELISA(DS -ELISA) ,并应用于多种动物血清的检测。方法 将大肠杆菌表达的一段HEVORF2区重组抗原分别包被微孔板和进行辣根过氧化物酶 (HRP)标记 ,利用 5份阳性血清和 4 0份阴性血清建立双抗原夹心ELISA ;用 4 0 0份义务献血员血清比较双抗原夹心ELISA与间接法IgG抗体ELISA的符合情况 ;用 3只HEV感染猴系列血清比较双抗原夹心ELISA试剂和Genelabs公司HEVIgG试剂 ;用双抗原夹心ELISA试剂检测新疆地区的部分牛、绵羊、山羊、猪血清和上海地区的部分鸡血清中的HEV抗体。结果 建立了检测HEV抗体的双抗原夹心ELISA方法 ,对 4 0 0份义务献血员血清的检测表明其与间接法IgG抗体ELISA试剂的符合情况良好 ,并且有更高的s/co比值 ;与Genelabs公司HEVIgG试剂的比较表明双抗原夹心ELISA试剂的检出更早 ,尤其是持续时间及强度明显优于Genelabs试剂 ;在所检测的各种动物中均发现了HEV抗体 ,其中猪抗体的阳性率最高 ,表明双抗原夹心ELISA试剂可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。结论 利用大肠杆菌表达的HEV重组抗原建立了双抗原夹心法ELISA ,并可同时用于不同动物的抗HEV抗体检测。
- 何志强葛胜祥邱艳彭耿陈毅歆何水珍张军夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎抗体检测重组抗原HEV
- 戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体的相互作用结构域
- 戊型肝炎病毒(HEV)是一种无包膜、二十面体对称结构的RNA病毒,其基因组包含3个开放读码框架(ORF),其中ORF2编码660个氨基酸的结构蛋白(PORF2),组成病毒衣壳.本研究通过疏水性分析、肽段末端缺失、氨基酸定...
- 李少伟何志强王颖彬陈毅歆刘如石林鉴顾颖张军夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体生物信息学
- 文献传递
- 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒ORF2片段的聚合现象研究
- 在大肠杆菌中表达了戊型肝炎病毒(HEV)ORF2的aa394-aa604片段，得到的重组蛋白NE2在SDS-PAGE中主要以可被尿素解聚的二聚体形式存在，二聚体对病人血清的反应性明显强于单体;质谱分析表明NE2可形成从二...
- 李少伟张军何志强葛胜祥顾颖林鉴刘如石夏宁邵
- 关键词：大肠杆菌戊型肝炎病毒二聚体原核表达
- 文献传递
- 戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体的相互作用结构域被引量：12
- 2004年
- 为了探讨戊型肝炎病毒衣壳蛋白同源二聚体形成的关键区域和相互作用结构域 ,以及二聚体形成与主要天然中和表位的形成之间的关系 ,通过末端缺失、定点突变技术研究戊型肝炎病毒 (HEV)ORF2的aa394_aa6 0 6片段NE2的聚合现象 ,发现其C端的aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区是该片段同源聚合的核心区域 ,提高该区域氨基酸的亲水性将妨碍聚合现象的发生 ;半胱氨酸化学交联实验表明NE2形成同源二聚体时 ,aa5 97在空间位置上相接近 ,处于可生成化学键的距离 ,提示所处区域为疏水聚合的作用结构域 ;通过Blast程序估算核心区域的天然突变率 ,发现其疏水性高度保守 ;N端缺失实验表明 ,至少 6 5个氨基酸既不影响同源聚合也不直接参与主要的天然中和表位的形成 ,但可协助中和表位构象的形成 ,而这种协助作用可被ORF2的末端肽段所代替。aa5 97_aa6 0 2 (AVAVLA)疏水区为戊肝病毒衣壳组装的第一步骤的核心区域 ,并与重要的天然中和表位的形成直接相关 ,从而为戊肝病毒疫苗的研究提供更详细的信息。
- 李少伟何志强王颖彬陈毅歆刘如石林鉴顾颖张军夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎病毒基因突变
- 基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估被引量：38
- 2003年
- 建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性 ,并与商品化试剂 (Genelabs公司抗 -HEVIgG和IgM试剂 ,GL -IgG/GL -IgM )进行比较。 2 9只恒河猴E2 -IgM和E2-IgG的阳转率均为 10 0 % ,其中 75 %在感染后 4周内阳转 ,均早于ALT异常时间。E2 -IgM持续 2～ 14周 ,平均6周 ;E2 -IgG在 70周时仍无一阴转。GL -IgG阳转率为 79 3% ( 2 3/ 2 9) ,多数晚于ALT异常时间 ,平均持续约18周 ,但最长为 1只在感染后 70周时仍为阳性。用E2 -IgM试剂盒检测 92 8份正常人血清 ,仅 2份OD值略高于0 2。检测 5 10份临床急性肝炎血清 ,可明显将其区分为 2个部分 ,一个部分OD值小于 0 2 ,其OD值分布与正常人相似 ;另一个部分OD值大于 0 4,共 131份 ,其中 10 9份大于 1 0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。 119份非甲～丙急性肝炎中 ,E2 -IgM阳性 5 7份 ,GL -IgM阳性 2 9份 (E2 -IgM均阳性 )。 5 0 6 0份普通人群血清的E2 -IgGOD值在 0 2以下 。
- 葛胜祥张军彭耿黄果勇何志强顾颖朱子恒吴文翰夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎IGMIGG
- 大肠杆菌重组颗粒性戊型肝炎疫苗对恒河猴的免疫保护被引量：13
- 2004年
- 大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2片段HEV 2 39重组蛋白颗粒 ,经铝佐剂吸附后 ,分别以5 μg、1 0 μg和 2 0 μg剂量免疫恒河猴 ,2 8天时以相同剂量加强免疫 1次 ,3周后分别以不同病毒滴度的基因Ⅰ型或基因Ⅳ型HEV静脉攻击。结果 ,加强后 3周 ,3个免疫剂量组猴的抗体几何平均滴度分别为 1∶2 71 75、1∶344 0 9、1∶4 16 0 7,以世界卫生组织参比血清定量 ,则分别为 1 0 98IU/ml,1 35 7IU/ml、1 72 4IU/ml。每个剂量免疫组及对照组各有 3只猴接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被成功感染 ,2只出现肝炎 ;2 0 μg免疫组 3只猴均未被感染 ;1 0 μg和 5 μg免疫组各有 2只猴未被感染 ,另 1只猴出现短暂感染 ,免疫猴均未出现肝炎。 3个剂量免疫组及对照组另外 3只猴 ,接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅰ型HEV感染 ,对照组 3只猴均被感染 ,1只出现肝炎 ;而免疫猴均未被感染 ,也未出现肝炎。 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 7病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染并出现肝炎 ,而免疫组均未出现肝炎 ,有 2只未被感染 ,另 1只被短暂感染。另有 3只 1 0 μg免疫猴和 3只对照猴分别接受 1 0 4病毒滴度基因Ⅳ型HEV感染 ,对照组均被感染 ,而免疫组均未被感染。这些结果表明
- 张军李益民李少伟欧山海黄果勇何志强葛胜祥鲜阳凌逄淑强夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎疫苗原核表达恒河猴保护率
