龚一蕾
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
- 供职机构：北京大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HPV病毒E1蛋白多克隆抗体制备及在宫颈上皮病变检测的运用被引量：1
- 2006年
- 目的：研制人乳头瘤病毒(HPV)E1蛋白抗体,并运用于组织病理学免疫组织化学检测。方法：通过基因重组、原核表达并纯化阳HPV E1蛋白片段；经免疫兔制备多克隆抗体,并经免疫印迹及基因转染鉴定特异性；免疫组织化学法检测13例宫颈病变中E1蛋白,经原位杂交验证。结果：将PCR扩增的E1蛋白保守功能域(第362～456aa)基因片断重组于原核表达载体pEK- 318的6×His标签下游,经诱导表达和亲合层析,纯化出14kD His-E1蛋白。制备的多克隆血清经免疫印迹法检测显示不仅可与His—El蛋白结合,也与HeLa细胞内源性及基因转染表达的天然E1蛋白反应。运用免疫血清检测7例宫颈尖锐湿疣和6例宫颈上皮内瘤病(CIN)Ⅲ级病例显示：7例宫颈尖锐湿疣6例为阳性染色,阳性反应主要分布于病灶中挖空细胞的胞核。同时6例CINⅢ级病变全部阳性,着色主要为非典型增生鳞状上皮细胞核。为了确定上述病例中E1蛋白免疫组化检测的准确性,运用原位杂交法进行了验证。结果显示：7例宫颈尖锐湿疣均为HPV/11型杂交阳性,6例CINⅢ级病变全部为HPV16型杂交阳性,显色部位与免疫组化基本一致。结论：本研究结果显示研制的HPV E1蛋白抗体可以用于病理组织学HPV病毒检测。
- 张爱英沈棋龚一蕾侯琳张波
- 关键词：人乳头瘤病毒免疫组化
- TEIF蛋白在软组织肉瘤中的表达及意义被引量：1
- 2006年
- 目的观察TEIF蛋白在软组织肉瘤组织中的表达及与类型、分级的关系。方法通过原核表达TEIF蛋白免疫制备多克隆抗体,免疫印迹鉴定。以组织芯片-免疫组织化学(EnVision法)检测166例软组织肉瘤和28例良性肿瘤及瘤样病变标本TEIF蛋白表达。结果制备多克隆抗体经Western印迹鉴定与TEIF具有特异结合性。免疫组织化学显示166例软组织肉瘤中TEIF蛋白阳性97例,阳性率为58%(97/166),高于良性肿瘤及瘤样病变(11%,3/28)(P<0.05)。阳性主要分布为滑膜肉瘤94%(16/17)、原始神经外胚叶瘤(PNET)91%(21/23),两者高于隆突性皮肤纤维肉瘤43%(6/14)、黏液性纤维肉瘤38%(6/16)、恶性外周神经鞘膜瘤36%(8/22)、脂肪肉瘤32%(6/19)(P<0.05),而与恶性纤维组织细胞瘤75%(15/20)、横纹肌肉瘤(7/10)、平滑肌肉瘤64%(9/14)差异无统计学意义(P>0.05)。同时,TEIF蛋白的弥漫阳性表达(≥2+)多存在于PNET和滑膜肉瘤,分别为83%(19/23)和76%(13/17)。在法国癌症中心联盟(FNCLCC)分级中,19例Ⅰ级肉瘤中TEIF阳性表达为32%(6/19),44例Ⅱ级肉瘤阳性率为48%(21/44),两者中2+以上阳性分别为11%(2/19)、32%(14/44),而70例Ⅲ级肉瘤中TEIF阳性表达为84%(59/70)和2+以上阳性为70%(49/70)。Ⅲ级组的TEIF阳性率(及2+以上阳性率)显著高于Ⅱ级组和Ⅰ级组(均为P<0.05),而后两者间则差异无统计学意义(P>0.05)。结论TEIF蛋白表达存在于软组织肉瘤,尤其高表达于PNET、滑膜肉瘤,并与肉瘤的组织学分级有关。
- 龚一蕾李挺郭华孙颖迟英凯凌云沈琪刘海静侯琳张波
- 关键词：软组织肿瘤组织芯片
- 端粒酶调节相关TEIF基因表达沉默诱导癌细胞衰老
- 研究背景及目的 TEIF(telomerase transcriptional elements-interacting factot)基因为我们克隆的调节端粒酶 hTERT 基因表达的转录因子。多方面的研究表明 TEI...
- 龚一蕾张波侯琳孙颖沈棋迟应凯
- 文献传递
- 人乙酰转移酶样蛋白的核仁定位及在肿瘤中的表达被引量：2
- 2008年
- 目的:探讨端粒酶调节相关蛋白——人乙酰转移酶样蛋白(hALP)核仁定位的分子基础及相关功能。方法:利用免疫荧光及免疫电镜的方法检测hALP在HeLa及Saos2细胞中的分布情况,通过rDNA荧光原位杂交及免疫荧光观察hALP与rDNA定位关系,利用RNA干扰的方法进一步证明其核仁定位性,通过基因重组构建包含不同长度片段的hALP基因的真核表达质粒并转染细胞以探讨其核仁定位的分子基础,运用免疫组织化学的方法检测hALP在多种肿瘤组织中的表达情况。结果:hALP在HeLa及Saos2细胞分裂间期主要定位于核仁,并与rDNA有共定位。免疫电镜显示,hALP主要位于核仁的颗粒区;RNA干扰后hALP在核仁区的染色明显减弱;其核仁定位由hALP羧基端的功能域介导。hALP蛋白表达于多种人肿瘤细胞(如平滑肌肉瘤、原始神经外胚叶瘤、神经母细胞瘤、黑色素瘤、前列腺癌及肾透明细胞癌)的核仁。结论:hALP蛋白具有明显的核仁定位性,并由其特异性的功能域介导,hALP可表达于多种肿瘤细胞的核仁,其意义值得进一步探讨。
- 关立照沈棋孙颖王教辰龚一蕾侯琳张波
- 关键词：肿瘤
- N-乙酰转移酶NAT10在软组织肿瘤中的表达及意义被引量：2
- 2006年
- 目的:观察N-乙酰转移酶NAT10蛋白在软组织肉瘤中的表达及与类型、分级的关系。方法:通过原核表达NAT10蛋白免疫制备特异性多克隆抗体,并经免疫印迹鉴定;以组织芯片-免疫组化检测166例软组织肉瘤和28例良性肿瘤及瘤样病变中NAT10蛋白的表达。结果:制备多克隆抗体经Western印迹鉴定与NAT10具有特异结合性。免疫组化显示166例软组织肉瘤中NAT10蛋白阳性95例,阳性率为57%(95/166),28例良性肿瘤及瘤样病变中4例阳性14%(4/28),两者间有显著性差异(P<0.05)。NAT10表达的主要分布为:滑膜肉瘤76%(13/17)、恶性纤维组织细胞瘤75%(15/20)、原始神经外胚叶瘤(PNET)70%(16/23)、横纹肌肉瘤70%(7/10)、恶性外周神经鞘膜瘤50%(11/22)、隆突性皮肤纤维肉瘤50%(7/14)、平滑肌肉瘤43%(6/14)、脂肪肉瘤42%(8/19)、黏液性纤维肉瘤38%(6/16)。统计比较显示:滑膜肉瘤与黏液性纤维肉瘤和脂肪肉瘤,以及恶性纤维组织细胞瘤与黏液性纤维肉瘤之间NAT10表达具有显著性差异(P<0.05);而其它各组间无明显差异(P>0.05)。同时,NAT10蛋白强阳性表达(≥++)多存在于滑膜肉瘤(53%,9/17)、横纹肌肉瘤(40%,4/10)及恶性纤维组织细胞瘤(40%,8/20)。在FNCLCC分级中,19例I级肉瘤中NAT10阳性表达率为42%(8/19),44例II级肉瘤为43%(19/44),70例III级肉瘤为73%(51/70)。III级NAT10阳性率显著高于II级组和I级组(均为P<0.05)。结论:研究表明N-乙酰转移酶NAT10表达于多种人软组织肉瘤,尤其在高度恶性肉瘤,因此有可能为软组织肉瘤的分级及预后因子。
- 凌云龚一蕾李挺郭华孙颖迟英凯沈棋刘海静侯琳张波
- 关键词：组蛋白乙酰化酶软组织肉瘤组织芯片免疫组化
