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白念珠菌CDR1和CDR2多克隆抗体制备及鉴定: 2013年; 目的:制备特异性白念珠菌外排泵(CaCDR1和CaCDR2)的多克隆抗体,为研究CaCDR1和CaCDR2在介导白念珠菌耐药中的作用奠定基础。方法:利用Pfam网络预测程序和Blastn、Blastx程序设计引物,采用PCR法获得白念珠菌SC5314基因组上486 bp长度的CDR1和CDR2目的基因,并将其克隆入pET-28a(+)质粒,构建重组表达质粒后,转化入大肠埃希菌BL21宿主菌内,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达6×His融合蛋白;经镍柱纯化蛋白后,免疫新西兰兔,制备兔抗多克隆抗体。用ELISA及蛋白印迹法检测该抗体的效价和特异性。结果:ELISA法检测所制备抗体的效价最终定为1∶12 800,工作浓度定为1∶800;蛋白印迹法检测结果显示,抗体能与CaCDR1及CaCDR2蛋白特异性结合。结论:成功获得具有较高效价和良好特异性的CaCDR1、CaCDR2多克隆抗体,可用于白念珠菌CaCDR1、CaCDR2蛋白水平的鉴定。; 刘锦燕魏冰史册阎亚昕项明洁; 关键词：多克隆抗体

2-咪唑基-戊-1,4-二烯-3-酮类衍生物的合成及其抗菌活性研究被引量：1: 2015年; 目的设计合成2-咪唑基-戊-1,4-二烯-3-酮类衍生物,并进行抗菌活性测试。方法以不同取代的苯甲醛为起始原料,经过Aldol缩合、溴代、亲核取代和Knoevenagel缩合四步反应合成目标化合物;采用微量稀释法测定化合物最低抑菌浓度(MIC)值。结果合成了30个未见文献报道的新化合物,其结构均经1H-NMR、MS谱测定。结论目标化合物均表现出一定的抗菌活性,可作为先导化合物做进一步改造和修饰。; 刘春丽史册刘锦燕魏冰毛斐项明洁李剑; 关键词：衍生物抗菌活性金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌

白念珠菌14-α脱甲基酶K143Q氨基酸置换与氟康唑耐药形成的相关性研究被引量：4: 2014年; 目的研究临床耐氟康唑白念珠菌14-α脱甲基酶的K143Q氨基酸置换与氟康唑耐药形成的关系。方法运用体外定点突变技术构建ERG11基因A427C突变型重组质粒,并利用酶切、连接构建YES2/CT酵母表达质粒。通过构建成的表达质粒在酿酒酵母中的异源性表达及体外药物敏感性表型的检测,分析其致K143Q氨基酸置换与白念珠菌对氟康唑产生耐药的关系。结果真菌体外药物敏感性表型检测显示,含氨基酸置换的表达质粒转染于酿酒酵母INVSc1后,氟康唑最低抑菌浓度(MIC)增加16倍。结论 K143Q可增强白念珠菌对氟康唑的耐药性。; 刘锦燕倪培华史册魏冰项明洁; 关键词：白念珠菌氟康唑 ERG11基因错义突变定点突变技术

耐氟康唑白假丝酵母靶酶和外排泵编码基因过表达检测被引量：3: 2013年; 目的研究临床氟康唑耐药白假丝酵母中耐药相关基因MDR1、CDR1、CDR2和ERG11的表达水平及其与耐药的关系。方法采用Real-Time PCR技术检测耐药相关基因MDR1、CDR1、CDR2和ERG11的表达水平,计算敏感组菌株基因△Ct的平均值(x珋)与标准差(s),低于x珋-3 s为过表达。罗丹明6G(Rhodamine6G)外排实验检测外排泵高表达的白假丝酵母菌株中的外排功能。结果在12株耐药株中,4个基因中以CDR1和CDR2表达上调最为显著,分别有8株和3株,而ERG11只有1株表达上调,未见MDR1表达上调。外排实验中外排泵表达升高的菌株外排能力强,加入葡萄糖之后有些菌株外排进一步增强,而敏感菌株加入葡萄糖之前几乎无外排,加入葡萄糖之后略有外排。结论本实验基因表达与外排泵功能检测结果均证实,白假丝酵母对氟康唑耐药与ABC转运蛋白超家族过表达有关。; 史册刘锦燕魏冰项明洁; 关键词：白假丝酵母氟康唑耐药机制外排泵过表达

重复序列PCR与多位点分型技术在白假丝酵母菌基因分型中的比较被引量：2: 2013年; 目的应用多位点序列分型技术(MLST)和重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)对临床分离出的白假丝酵母菌进行分型,并对两种方法作出应用评价。方法收集上海地区医院中真菌性阴道炎分离出的40株白假丝酵母菌,选择合适引物进行扩增,通过电泳比较分析获得REP-PCR分型。选择7对管家基因进行PCR反应并测序,将测序结果与标准序列进行比对,获得由7对管家基因组成的等位基因谱,最终得到相应的序列分型。结果 REP-PCR中Ca22-Ca22引物对得到电泳条带最优,40株白假丝酵母菌共分成7种REP-PCR型;MLST分型得出29种,且均为新型。结论 MLST分辨率较REP-PCR高,但由于REP-PCR分型方法更为快捷、经济,更适用于实验室大量菌株分型和临床分型。MLST则更客观,更适合用于进化学的研究及全球性流行病学的调查研究。; 魏冰刘锦燕史册项明洁; 关键词：白假丝酵母菌基因分型

白假丝酵母对氟康唑耐药机制的研究进展被引量：2: 2013年; 白假丝酵母通常不引起人体感染,但对于免疫低下或免疫缺陷者,其却可导致机会性感染,如咽喉部感染、阴道感染,甚至可发生危及生命的系统性真菌感染。临床治疗白假丝酵母感染的常用药物为氟康唑,且已取得了良好的治疗效果。; 史册刘锦燕魏冰项明洁; 关键词：白假丝酵母氟康唑耐药机制外排泵

抗真菌药物的联合应用被引量：7: 2013年; 目前真菌感染,特别是免疫缺陷患者中侵入性真菌感染的发病率和死亡率在不断增加,但现有抗真菌药物可选择范围小、毒副作用大而且耐药情况日渐严重。联合用药这一概念的提出,给耐药株及严重性真菌感染提供了新的治疗途径,并且已在临床中广泛运用。该文对不同种类抗真菌药物联用的研究成果及作用机制做一综述。; 魏冰刘锦燕项明洁; 关键词：抗真菌药物联合用药

白念珠菌对唑类药物耐药机制中生物膜作用的研究进展被引量：3: 2014年; 白念珠菌是人体最常见的机会性致病真菌。唑类药物广泛应用于临床以对抗白念珠菌感染,但白念珠菌对唑类药物的耐药现象越来越严重,作为其耐药机制的一个方面,生物膜的作用备受关注。我们主要介绍生物膜相关的研究进展。; 史册刘锦燕魏冰项明洁; 关键词：白念珠菌唑类药物耐药机制生物膜

白念珠菌对唑类药物耐药机制的研究进展被引量：5: 2014年; 白念珠菌是临床最常见的条件致病性真菌,由于抗真菌药物的长期滥用,其对唑类药物的耐药逐年增多,耐药现象已经成为药物治疗的难点。目前,白念珠菌对唑类药物耐药的主要机制包括:ERG11基因突变或过度表达导致的靶位酶的改变、多药转运蛋白过度表达、细胞应激反应和生物膜的形成等。现就白念珠菌对唑类药物的耐药机制作简单归纳。; 魏冰刘锦燕史册项明洁; 关键词：白念珠菌唑类药物耐药机制生物膜

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魏冰