高磊
- 作品数：15 被引量：14H指数：2
- 供职机构：北京农学院动物科学技术学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市属高等学校人才强教计划资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 马兜铃酸Ⅰ诱导肾小管上皮细胞凋亡的检测被引量：5
- 2011年
- 本试验旨在培养小鼠肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs),探讨马兜铃酸Ⅰ(aristolochic acidⅠ,AAⅠ)诱导小鼠肾小管上皮细胞的凋亡情况。AAⅠ与RTECs反应后,从细胞形态学、DNA Ladder、流式细胞仪3个方面检测AAⅠ诱导RTECs的凋亡情况。AAⅠ作用后,随着浓度的增高,上皮细胞失去上皮细胞表型,在20～80μg/mL作用24h后,细胞都出现晚期凋亡的特征;在20μg/mL AAⅠ的作用下早期凋亡的比率随作用时间的延长而增高。AAⅠ可诱导小鼠原代RTECs产生凋亡,凋亡随着作用时间的延长和药物浓度的增大而加剧。
- 彭晓兰董晓凯廖芳芳高磊张中文吴国娟
- 关键词：肾小管上皮细胞细胞凋亡
- 马兜铃酸肾毒性研究进展2
- 高磊吴金栋赵海焦吴国娟
- 文献传递网络资源链接
- 连翘酯苷A诱生IFN-γ及抑制TGF-β1/Smads信号通路对肾小管间质纤维化的影响
- 本研究旨在探讨连翘酯苷A对AAI诱导的紧小管间质纤维化的影响和作用机制.建立肾小管间质纤维化模型,HE切片染色,电镜超微结构观察,并测定羟脯氨酸的含量;采用ELISA方法检测IFN-γIL-4和TGF-β1;免疫组化分析...
- 赵海焦高磊陆彦田娅慧贾志华吴国娟张中文
- 关键词：马兜铃酸肾病连翘酯苷A干扰素-Γ肾小管间质纤维化
- 文献传递
- 去乙酰化蛋白酶1在马兜铃酸肾纤维化模型中对TGF-β1/Smad7信号通路的作用被引量：2
- 2012年
- 检测马兜铃酸肾纤维化(AAN)模型肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad7、去乙酰化蛋白酶1(HDAC1)的mRNA和蛋白表达变化,探讨HADC1和Smad7的表达在AAN发展中的作用及两者间的联系。RT-PCR检测TGF-β1、Smad7和HDAC1的mRNA表达,ELASA检测TGF-β1的蛋白表达,免疫组化定位和检测HADC1和Smad7蛋白,HE染色观察肾病理学改变。结果显示:AAN模型肾组织中TGF-β1和HDAC1mRNA表达呈时间依赖性升高,TGF-β1mRNA表达较对照组有明显差异(P<0.05),28d开始AAN组中HDAC1mRNA增加,差异极显著(P<0.01);Smad7mRNA和蛋白表达均呈下降趋势,HDAC1蛋白免疫组化染色强度呈上调趋势,与对照组比较HDAC1阳性着色主要分布于上皮细胞和间质细胞的细胞核;肾脏病理表现为肾小管浊肿、变性和脱落等急性小管间质损伤,并随用药时间的延长呈进行性加重。本研究表明肾组织中Smad7弱表达可促进TGF-β1信号转导,HDACl mRNA和蛋白在肾组织中的高表达并参与TGF-β1/Smad7信号通路在肾纤维化发展中起重要作用,可能是潜在的新作用靶点。
- 杨洋张中文姚华高磊李培锋吴国娟
- 关键词：TGF-Β1SMAD7HDAC1
- 适配体传感器的研究进展被引量：4
- 2011年
- 适配体作为传统抗体的替代物,在药物残留检测、临床诊断、靶向治疗等许多领域有广范的应用。适配体与生物传感器检测技术相结合,可研制出一系列适配体传感器。介绍了适配体的概念和优点,适配体传感器的种类,如荧光传感器、电化学传感器、比色传感器、SERS(surface enhanced raman scattering)传感器和SPR(surface plasmon resonance)传感器,以及它们的原理、检测限和应用情况,展望适配体传感器在兽药残留检测和动物疾病诊断等方面的应用前景。
- 祝文琪高磊王晶王杏周旭平吴国娟
- 关键词：适配体传感器
- 磺胺母核人工半抗原的合成与鉴定
- 2013年
- 合成磺胺母核人工半抗原,并对其产物进行鉴定。采用4-氨基苯甲酸甲酯(PBPA)和对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)为原料,经过亲和取代,酯的水解反应合成磺胺药物共有的母核结构苯甲酸对氨基苯磺酰胺(SH),应用质谱法(ESI-MS)与核磁共振氢谱法(1 H-NMR)鉴定SH。质谱结果显示[M-]=291.037 66,与理论值[M]=292相符,表明SH合成成功;核磁共振氢谱(1 H-NMR)的数据与SH化合物的结构相符。磺胺母核人工半抗原合成成功,为研制磺胺药多残留检测试剂盒和胶体金免疫层析试纸条奠定基础。
- 杜玉玲陆彦祝文琪高磊岳城吴国娟
- 关键词：半抗原
- 马兜铃酸肾毒性研究进展
- 中草药是我国传统医学的重要组成部分，特别是一些难治性、顽固性疾病，中医中药都有其独特作用，弥补了现代医学的不足。如何防止其毒副作用是我们目前面临的重大课题。首先，由于人们对马兜铃酸肾毒性警惕性不足，普遍认为中药无毒副作用...
- 高磊吴金栋赵海焦吴国娟
- 关键词：中草药马兜铃酸毒理学发病机制马兜铃酸肾病
- Smad泛素化调节因子2siRNA的筛选及转染原代肾小管上皮细胞条件的优化被引量：1
- 2014年
- 试验旨在优化Smad泛素化调节因子2（Smurf2） siRNA最佳转染条件，筛选最佳siRNA干扰片段，进而实现对Smurf2基因的瞬时沉默，为研究Smurf2基因在马兜铃酸肾病（aristolochic acid nephrohathy，AAN）中的作用奠定基础。本研究通过培养小鼠原代肾小管上皮细胞（renal tubular epithelial cells，RTECs），并以脂质体LipofectamineTM 2000为转染介质，将Smurf2 siRNA转染入RTECs；通过观察绿色荧光的表达量及Real-time PCR反应优化转染条件，转染后Real-time PCR检测mRNA表达抑制率。CCK-8法检测Smurf2 siRNA复合物对RTECs活性的影响；同时，用Real-time PCR和Western blotting检测不同位点Smurf2 siRNA对Smurf2 表达的影响。结果显示,当Lipofectamine TM 2000与siRNA比例为1.5 μL∶30 pmol时，转染效率最高，为70%～80%；Smurf2-619 siRNA干扰效果最明显；与正常组相比，转染siRNA组的Smurf2蛋白表达水平显著下降（P〈0.05）。最终确定了Smurf2 siRNA最佳转染条件，其中Smurf2-619 siRNA对Smurf2 表达的抑制率最高。
- 赵海焦高磊陆彦田娅慧贾志华田海燕吴国娟张中文
- 关键词：转染SIRNA肾小管上皮细胞
- 泛素化调节因子2真核表达质粒的构建及其在原代肾小管上皮细胞的表达
- 2013年
- 本试验旨在构建带有增强型绿色荧光蛋白报告基因EGFP及目的基因泛素化调节因子2(Smurf2)的真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,并转染小鼠肾小管上皮细胞检测其表达情况。用RT-PCR法扩增小鼠肾小管上皮细胞Smurf2的CDS区,构建克隆载体pEASY-Zero-Smurf2和真核表达载体pEGFP-N3-Smurf2,酶切并测序鉴定。运用脂质体转染法将pEGFP-N3-Smurf2真核表达载体转染小鼠肾小管上皮细胞,实时荧光定量PCR、免疫印迹检测Smurf2的表达。PCR结果显示扩增出Smurf2基因片段大小约为2247bp;重组质粒pEGFP-N3-Smurf2的酶切鉴定及测序结果均表明Smurf2基因成功克隆到真核表达载体中;脂质体转染后检测结果显示,转染pEGFP-N3-Smurf2表达载体的肾小管上皮细胞中Smurf2基因mR-NA表达量升高且EGFP-Smurf2重组蛋白有表达。本试验成功构建了含有增强型绿色荧光蛋白标记的Smurf2真核表达质粒,转染后能明显提高细胞内Smurf2的表达,为研究Smurf2基因的功能奠定了基础。
- 高磊赵海焦吴金栋田娅慧张中文吴国娟
- 关键词：质粒
- 连翘酯苷诱生干扰素-γ对AAⅠ诱导的RTECs转分化的影响
- 2014年
- 体外培养小鼠RTECs,将其随机分为6组,CCK-8法测连翘脂苷对RTECs的增殖率及存活率的影响,ELISA检测转化生长因子β1(TGF-β1)和干扰素-γ的含量,RT-PCR和Western blot检测CK18和Smad7等相关因子的表达变化。结果显示连翘酯苷质量浓度为160mg/L以下对RTECs无毒性,且诱生干扰素2.392μg/L;用药E组与模型B组比较TGF-β1表达显著下降(P<0.01);用药组与模型组相比Smad7mRNA极显著高表达(P<0.01)、CK18mRNA显著高表达(P<0.05),而vimentin、α-SMA mRNA抑制表达(P<0.01);Western blot结果表明上调了Smad7的表达量。试验表明连翘脂苷可以提高Smad7的表达量,阻止Smad2/Smad3磷酸化,抑制TGF-β1/Smads信号通路,有效改善AAI诱导的肾小管上皮细胞转分化。
- 赵海焦田娅慧候晓林高磊吴国娟张中文
- 关键词：肾小管上皮细胞SMAD7
