马文静
- 作品数：13 被引量：14H指数：2
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 蛋白酶激活受体激活对A549细胞IL-28和IL-29 mRNA表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的用蛋白酶和蛋白酶激活受体激动肽(PAR-AP)刺激A549细胞后检测细胞中白细胞介素IL-28和IL-29 mRNA表达情况以分析蛋白酶激活受体激活对人肺上皮细胞IL-28和IL-29基因表达的影响。方法用最佳工作浓度的凝血酶、胰蛋白酶、类胰蛋白酶及蛋白酶激活受体-1,2,3,4的激动肽刺激A549细胞后,分别在第2、8、16h收集细胞,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)方法分析A549细胞内IL-28和IL-29 mRNA表达。结果凝血酶作用A549后,细胞内IL-29 mRNA表达增强,高达对照组9.6倍;而细胞内IL-28 mRNA表达无明显变化。胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强,分别为对照组6.1倍和4.4倍。类胰蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别高达对照组的3.1倍和2.1倍。弹性蛋白酶作用A549细胞后,细胞内IL-29 mRNA表达增强高达对照组5.1倍而IL-28 mR-NA无明显变化。PAR-1AP(SFLLR)作用后,A549细胞内IL-29 mRNA表达增强为对照组1.7倍而IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-2AP(SLIGKV及tc-LIGRLO)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强分别为对照组4.9倍和2.4倍。PAR-3AP(TFRGAP)作用后,A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达无明显变化。PAR-4AP(GYPGQV)作用后A549细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达增强高达对照组4.1倍和5.5倍。结论 A549细胞蛋白酶激活受体的激活可以上调细胞内IL-29和IL-28 mRNA表达。
- 张慧云王海燕马文静何韶衡
- 关键词：蛋白酶蛋白酶激活受体
- 蟑螂主要过敏原Bla g7单克隆抗体的制备与鉴定被引量：2
- 2011年
- 目的制备蟑螂主要过敏原Blag7的单克隆抗体(mAb)。方法用含编码Blag7基因的大肠杆菌菌株Origami/pGS21a,诱导表达并纯化出Bla g7蛋白,以该蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,运用杂交瘤技术制备抗Bla g7 mAb;通过ELISA、Western blot技术鉴定mAb的特异性。结果获得2株可稳定分泌抗Bla g7 mAb的杂交瘤细胞,分别命名为Bla g7-1和Bla g7-2;2株单克隆抗体的免疫球蛋白亚类均为IgG1;经间接ELISA法测定,杂交瘤细胞Bla g7培养上清中mAb的效价分别为1:16000和1:8000;Western blot结果表明Bla g7单抗对Bla g7蛋白具有高度特异性。结论成功地诱导表达Bla g7蛋白,并制备出抗Blag7 mAb,为进一步研究蟑螂过敏提供了有用的实验工具。
- 马文静张伟魏继福张浩刘成成何韶衡
- 关键词：单克隆抗体免疫印迹
- RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞蛋白酶激活受体-2表达和白细胞介素-4释放的影响被引量：3
- 2010年
- 目的检测RANTES对类胰蛋白酶引起的肥大细胞白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)分泌和蛋白酶激活受体(protease activated receptor,PAR)-2表达的影响。方法 P815肥大细胞培养后,用不同浓度的RANTES、类胰蛋白酶单独或联合激发肥大细胞,不同时间点收集激发细胞和上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-4水平,用流式细胞术检测P815肥大细胞表面PAR-2的表达。结果 RANTES单独作用对肥大细胞IL-4分泌无明显影响,而类胰蛋白酶单独作用则以浓度依赖方式促进肥大细胞IL-4释放(P<0.01);RANTES或类胰蛋白酶单独作用对肥大细胞PAR-2表达均无明显影响(P>0.25)。以RANTES预处理肥大细胞,则类胰蛋白酶促进肥大细胞IL-4释放的作用被显著抑制(P<0.01);而类胰蛋白调节的肥大细胞PAR-2表达显著增强(P<0.01)。结论 RANTES抑制类胰蛋白酶引起的肥大细胞IL-4分泌可能是通过RANTES增强类胰蛋白酶调节PAR-2表达而实现。
- 张慧云马文静何韶衡
- 关键词：肥大细胞RANTES白细胞介素-4蛋白酶激活受体-2
- 肿瘤坏死因子调节的肥大细胞蛋白酶激活受体表达分析
- 2011年
- 目的检测肿瘤坏死因子（TNF）引起的肥大细胞蛋白酶激活受体（PAR）．1，2，3，4表达。方法肥大细胞P815培养后以不同浓度的TNF激发肥大细胞，在不同时间点收集细胞，给予聚乙二醇辛基苯基醚（TritonX一100）非TritonX-100处理后用流式细胞术和激光共聚焦方法检测肥大细胞蛋白酶激活受体的表达。结果TNF激发肥大细胞2h、6h和16h后，TritonX．100与非TritonX．100处理后，肥大细胞PAR-1，3表达均无明显变化；但TNF以浓度依赖方式上调P515肥大细胞PAR．2，4表达（P〈0．05）；上述各时间点检测PAR-1，2，3表达情况，TritonX．100处理组与非TritonX．100处理组检测结果无明显差异，但PAR-4表达结果显示TritonX-100处理组表达强于非TritonX．100处理组。结论TNF可以上调P815肥大细胞PAR-2，4表达，但对PAR-1，3表达的调节作用不明显，TritonX-100处理和非TritonX-100处理不影响TNF调节的肥大细胞PARs表达的检测结果。
- 张慧云张淑芳杨海伟马文静王顺兰何韶衡
- 关键词：肥大细胞显微技术
- IL-29调节的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体表达分析
- 2011年
- 目的:检测白细胞介素(interleukin,IL)-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体(protease activated recep-tor,PAR)-1,2,3,4表达。方法:肥大细胞P815培养后以不同浓度的IL-29激发肥大细胞,在不同时间点收集细胞,给予透膜和非透膜处理后用流式细胞术检测肥大细胞膜表面和胞浆内蛋白酶激活受体的表达。结果:IL-29激发肥大细胞2、6和16 h后肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达与相应对照相比差异有统计学意义,而IL-29调节的膜表面PAR-1表达与胞浆内PAR-1表达相比,差异无统计学意义。IL-29引起的肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达与相应对照相比,差异无统计学意义;而IL-29激发2 h肥大细胞膜表面PAR-2表达与胞浆内PAR-2表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发6 h肥大细胞膜表面PAR-3表达与胞浆内PAR-3表达相比,差异有统计学意义;IL-29激发2、6和16h后肥大细胞膜表面PAR-4表达与胞浆内PAR-4表达相比,差异有统计学意义。结论:IL-29可以下调P815肥大细胞膜表面和胞浆内PAR-1表达,且IL-29引起的膜表面和胞浆内PAR-1表达无差异;尽管检测到PAR-2,3,4在膜表面和胞浆内的表达情况不同,但IL-29对膜表面和胞浆内PAR-2,3,4表达的调节作用不明显;流式细胞术检测的膜表面和胞浆内PARs表达结果均可反应IL-29调节的P815肥大细胞PARs表达情况。
- 张慧云杨海伟马文静高元慧冯晓鸽何韶衡
- 关键词：肥大细胞膜表面胞浆内
- 杆状病毒昆虫细胞表达系统生产德国小蠊BgGSTD1的研究
- 目的蟑螂已经成为仅次于尘螨的第二大过敏源。目前有多种蟑螂过敏原被鉴定出来。BgGSTD1是德国小蠊中主要过敏原。目前已经被克隆并在大肠杆菌中进行了表达。但是还没有在昆虫杆状病毒系统表达的报道。方法从德国小蠊组织中提取总R...
- 魏继福张伟赵凌刘成成马文静何韶衡
- 文献传递
- 杆状病毒昆虫表达系统中生产美洲大蠊Per a9的研究
- 目的蟑螂已经成为仅次于尘螨的第二大过敏源。目前有多种蟑螂过敏原被鉴定出来。Pera 9是美洲大蠊中主要过敏原。目前已经被克隆并在大肠杆菌中进行了表达。但是还没有在昆虫杆状病毒系统表达的报道。方法从美洲大蠊组织中提取总RN...
- 魏继福张伟赵凌刘成成马文静何韶衡
- 文献传递
- TNF-α对肥大细胞IL-10、IL-12分泌和组胺释放的影响被引量：5
- 2010年
- 目的:检测TNF-α对P815肥大细胞IL-10,IL-12分泌和组胺释放的影响。方法:P815肥大细胞培养后,用不同浓度的TNF-α单独或联合用TNF-α单克隆抗体激发肥大细胞,不同时间点收集上清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10,IL-12和组胺水平。结果:单独作用时,TNF-α促进P815肥大细胞IL-12分泌,而对IL-10分泌和组胺释放无明显影响,TNF-α单克隆抗体的应用可以阻断TNF-α引起的肥大细胞IL-12分泌。结论:TNF-α可以通过促进肥大细胞分泌IL-12参与肥大细胞相关的炎症过程。
- 张慧云马文静何韶衡
- 关键词：肥大细胞TNF-ΑIL-12组胺
- Bla g7单克隆抗体的制备与鉴定
- 目的制备蟑螂过敏原Bla g7的单克隆抗体(mAb)。方法以重组纯化的Bla g7蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞NS-1进行细胞融合,经间接ELISA筛选后通过有限稀释法进行...
- 马文静刘成成张浩
- 文献传递
- RANTES对肥大细胞系P815细胞分泌IL-10的诱导作用及其机制被引量：2
- 2011年
- 目的检测RANTES对肥大细胞IL-10和IL-12分泌的影响和可能的信号转导通路。方法 P815肥大细胞培养、激发后收集不同时间点的细胞和上清液,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测上清中IL-10和IL-12的水平,用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt),细胞外信号调节激酶(ERK),信号转导子和转录激活子(STAT)3和p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路蛋白磷酸化情况。结果 RANTES能够促进肥大细胞P815分泌IL-10而对IL-12的分泌无明显影响。LY294002能够阻断RANTES引起的肥大细胞IL-10分泌并抑制RANTES引起的Akt磷酸化。结论 RANTES刺激肥大细胞P815分泌IL-10可能是通过激活Akt信号转导通路实现的。
- 张慧云马文静何韶衡
- 关键词：肥大细胞RANTES白细胞介素-10白细胞介素-12
