陈耿
- 作品数：11 被引量：34H指数：4
- 供职机构：南京农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京农业大学SRT基金更多>>
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- 巨噬细胞介导PCV2诱导体外培养仔猪淋巴细胞凋亡的研究被引量：4
- 2010年
- 选用5头猪圆环病毒2型(PCV2)及猪呼吸和繁殖综合征病毒(PRRSV)抗体阴性普通断奶仔猪,无菌分离脾脏淋巴细胞和巨噬细胞(macrophage,M),分别以PCV2和PCV2+M与淋巴细胞相互作用,同时设M和淋巴细胞对照组。培养0、6、12、24 h后分别收取各组淋巴细胞,用流式细胞术对细胞凋亡率进行测定,半定量RT-PCR法测定淋巴细胞Fas和FasLmRNA的转录情况。结果显示:PCV2+M组的淋巴细胞凋亡率在24 h时显著高于其他3组(P<0.05)。PCV2+M组的淋巴细胞6 h时FasmRNA转录量显著高于空白对照组(P<0.05),24 h时显著高于其他3组(P<0.05)。FasLmRNA的转录变化与FasmRNA基本一致。相关性分析表明,淋巴细胞凋亡率和Fas(FasL)mRNA的转录呈极显著相关(Fas:P=0.000,r=0.606;FasL:P=0.000,r=0.579)。表明:巨噬细胞能介导PCV2诱导体外培养淋巴细胞的凋亡,这种细胞凋亡的发生与Fas/FasL系统紧密相关。
- 华利忠陈耿张书霞
- 关键词：PCV2淋巴细胞巨噬细胞FAS/FASL系统
- 猪圆环病毒2型感染对仔猪免疫功能的影响被引量：2
- 2010年
- 为研究猪圆环病毒2型(PCV2)对宿主免疫应答的动态影响,选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,随机分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分离攻毒后0、3、7、14、21、28和35 d仔猪外周血淋巴细胞和血清,用MTT法检测外周血淋巴细胞的转化率,并用ELISA法检测血清中白细胞介素(IL)-1β、IL-2、IL-6和IL-10的表达变化。结果显示,脂多糖(LPS)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后各时间点均极显著降低(P<0.01);植物血凝素(PHA)刺激下仔猪外周血淋巴细胞的转化率在攻毒后3、21和28 d极显著降低(P<0.01),在攻毒后14 d显著降低(P<0.05);与对照猪相比,攻毒猪血清中IL-6的含量在攻毒后各时间点均无显著变化(P>0.05);IL-1β的含量在攻毒后7 d显著升高(P<0.05),IL-10的含量在攻毒后35 d极显著升高(P<0.01);IL-2的含量在攻毒后7 d显著降低(P<0.05),在攻毒后21 d显著升高(P<0.05),在攻毒后28和35 d均极显著升高(P<0.01)。结果表明,PCV2能显著抑制仔猪外周血T、B淋巴细胞的转化能力,并能激活机体的固有免疫应答,但同时能导致适应性免疫应答的活化出现迟滞并在攻毒后期引起免疫调节紊乱。
- 陈耿华利忠张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型仔猪细胞因子淋巴细胞转化率
- 猪圆环病毒2型对体外培养仔猪淋巴细胞转化能力及其活性的影响被引量：5
- 2009年
- 采集5头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的断奶仔猪血液,分离外周血淋巴细胞,分对照组、PHA组、LPS组、PCV2组、PCV2+PHA组、PCV2+LPS组进行体外培养,用MTT法检测PCV2作用2 d后对仔猪外周血淋巴细胞转化能力的影响;无菌取脾制成单细胞悬液,分单独淋巴细胞(L)、淋巴细胞+PCV2(L+V)、淋巴细胞与巨噬细胞(L+M)和淋巴细胞与巨噬细胞+PCV2(L+M+V)4组进行体外培养。分别在培养后第0、6、12和24 h收获淋巴细胞,用RT-PCR法检测淋巴细胞IL-2R()αmRNA的表达。结果显示,与对照组、PHA组和LPS组相比,PCV2组、PCV2+PHA组和PCV2+LPS组淋巴细胞的转化能力均极显著降低(P<0.01);PCV2对单独培养的淋巴细胞IL-2R(α)表达的影响不显著(P>0.05),而巨噬细胞能协同PCV2促进淋巴细胞IL-2R(α)的表达,尤其在攻毒后第12和第24 h极显著增加(P<0.01)。证实PCV2在攻毒后第2 d能抑制体外培养T、B淋巴细胞的转化能力,且巨噬细胞能协同PCV2促进T淋巴细胞的活化。
- 陈耿华利忠张书霞
- 关键词：猪圆环病毒2型仔猪巨噬细胞淋巴细胞
- PCV2感染对仔猪免疫机能的影响及细胞因子的变化
- PCV2与宿主免疫应答之间的相互作用是导致PMWS发生的关键,PCV2主要侵害宿主的免疫系统,导致宿主出现获得性的免疫缺陷,而且宿主在PCV2感染的不同阶段表现出不同的应答反应。本试验分别从体外和体内两方面研究PCV2对...
- 陈耿
- 关键词：仔猪细胞因子一氧化氮一氧化氮合酶
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型对仔猪淋巴细胞内cAMP和cGMP的影响
- 2011年
- 为探讨猪圆环病毒2型(PCV2)作用下淋巴细胞的免疫活性,本研究通过体外培养仔猪脾脏淋巴细胞及巨噬细胞(Mφ),分别以PCV2和PCV2+Mφ与淋巴细胞相互作用,同时设Mφ和空白对照组。培养0h、6h、12h、24h后收取各组淋巴细胞,放射免疫法检测胞内cAMP和cGMP浓度。另外,选取15头PCV2阴性仔猪,每头滴鼻PCV2病毒悬液,分别于14d、21d、35d迫杀,每次5头,并设立阴性对照组4头。放射免疫法检测脾脏cAMP和cGMP浓度,并计算cAMP/cGMP比值。体外检测结果显示:PCV2对体外培养淋巴细胞内cAMP和cGMP浓度影响不大;而在Mφ存在时PCV2在6h时能显著降低cAMP和cGMP浓度和cAMP/cGMP比例(p<0.05);12h时cGMP浓度下降(p<0.05),cAMP和cGMP比例上升(p<0.05);24h时cGMP浓度上升(p<0.05),但cAMP/cGMP比例降低(p<0.05)。体内检测结果表明,PCV2能显著降低仔猪脾脏细胞内cAMP浓度(p<0.05)及cAMP/cGMP比值(p<0.05)。该研究结果表明,在巨噬细胞存在时PCV2能够降低淋巴细胞内cAMP/cGMP的比值,从而影响淋巴细胞的功能。
- 华利忠张书霞陈耿孙运代蕾吕春子
- 关键词：猪圆环病毒2型免疫抑制淋巴细胞CAMP/CGMP
- PCV2对仔猪胸腺IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA的影响及NO-NOS系统的调控被引量：7
- 2011年
- 为了解猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirus Ⅱ,PCV2)引起仔猪免疫抑制的机制,研究了胸腺中抗感染免疫相关基因的动态表达变化及其调控机制。选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分别在感染后0、14、21和35 d扑杀采集胸腺。用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,用比色法检测总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,用TQ-PCR方法检测胸腺中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA的表达变化。结果显示:感染猪胸腺中TNOS和iNOS的活性在试验期间均显著高于对照猪(P<0.05),NO含量在感染后14 d极显著升高(P<0.01),IL-2和IL-6 mRNA的表达在感染后各时间点均低于对照猪,尤其在感染后21 d均极显著降低(P<0.01);IL-10 mRNA的表达在感染后14 d极显著升高(P<0.01);IL-6和IL-10与各自受体mRNA的表达变化均呈显著负相关(P<0.05),NO与iNOS mRNA呈显著正相关(P<0.05)。研究表明:胸腺在感染早期表现出较强且适度的抗PCV2感染的免疫应答,感染中期呈现一定的免疫抑制,感染后期有所恢复;胸腺中细胞因子及其受体与NO-NOS系统的相互调节表现出复杂性与多层次性。
- 陈耿张书霞华利忠
- 关键词：仔猪
- PCV2感染对仔猪NO-NOS系统的动态影响
- 2011年
- 将19头PCV2和PRRSV血清抗体阴性的普通断奶仔猪分为对照组(4头)和攻毒组(15头),攻毒组每头仔猪滴鼻接种PCV2病毒悬液4mL(5×105 TCID50/mL)并用KLH刺激,分别在攻毒后14、21、35d各扑杀5头仔猪采集血清和脾脏、淋巴结、胸腺(对照组4头在攻毒当天扑杀)。检测各种组织中NO、TNOS和iNOS的含量。结果显示,攻毒猪各组织中NO含量均在攻毒后14d显著升高(P<0.05),然后缓慢下降;血清和3种免疫器官中NOS(包括TNOS和iNOS)活性的变化趋势比较一致,均表现出先升高然后再逐渐降低的特点。此外,iNOS活性变化与其相应的组织中NO含量呈显著正相关(P<0.01)。结果表明,PCV2在感染早期(1～14d)可激活仔猪多种组织中NO-NOS系统,中后期逐渐恢复,这种变化与PCV2所致的组织损伤密切相关,因此,NO-NOS系统可能是PCV2相关疾病发生发展的重要信号。
- 陈耿刘浩飞王兆飞张亚群陈鸿娟郭昊张书霞
- 关键词：仔猪一氧化氮一氧化氮合酶
- PCV2感染仔猪急性期蛋白的变化被引量：4
- 2010年
- 【目的】探讨实验性感染PCV2仔猪血清中急性期蛋白浓度和肝脏急性期蛋白表达的变化,为PCV2的致病机制和诊断提供有价值的资料。【方法】19头ELISA检测PCV2抗体阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分为对照组和攻毒组,在攻毒后不同时间采集血液和肝脏。用ELISA方法检测血清中APPs的动态变化,荧光定量RT-PCR测定肝脏中APPsmRNA表达,同时观察肝脏的组织病理学变化。【结果】仔猪接种PCV2后,肝脏出现实质细胞变性,结缔组织增生和嗜酸性粒细胞浸润为特征的病理学损伤;血清中,猪主要急性期蛋白(Pig-MAP)在攻毒后7d达到峰值,在7和10d显著高于对照组(P<0.05);血清淀粉样蛋白A(SAA)在攻毒后7d和21d显著高于对照组(P<0.05);血清载脂蛋白AⅠ(Apo-AⅠ)攻毒后21d显著高于对照组(P<0.05),其余时间差异均不显著;PCV2感染后21d仔猪肝脏中结合珠蛋白(HP)、C-反应蛋白(CRP)、α1-酸性糖蛋白(AGP)和SAAmRNA的表达呈现升高的趋势。【结论】PCV2感染可引起仔猪肝脏出现以实质细胞变性坏死和结缔组织增生为特征的病理学变化,血清APPs浓度和肝脏APPsmRNA表达呈现不同的变化,其中Pig-MAP可以作为病程发展的重要检测指标,对监测PCV2感染、疾病的预后起重要作用。
- 孙运华利忠陈耿张书霞
- 关键词：仔猪肝脏急性期蛋白
- PCV2感染通过胞内Ca^(2+)超载诱导仔猪腹股沟淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡被引量：3
- 2012年
- 为探讨猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)感染仔猪的淋巴结和脾脏淋巴细胞内钙信号变化在细胞凋亡中的作用,选取19头PCV2抗原和抗体均为阴性的5周龄健康断奶仔猪,随机分成对照组(4头)和试验组(15头),试验组仔猪通过滴鼻接种PCV2,并于接种后14、21和35 d分别扑杀5头,对照组仔猪滴鼻同量PBS后当天扑杀。所有仔猪扑杀时均取腹股沟淋巴结及脾脏,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光分光光度法检测细胞内Ca2+浓度,孔雀绿比色测定法检测Ca2+-ATP酶的活性,荧光定量RT-PCR检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)mRNA转录水平。结果表明:所有接种病毒仔猪腹股沟淋巴结及脾脏细胞凋亡率均极显著高于对照组(P<0.01),Ca2+浓度均极显著高于对照组(P<0.01);接种病毒仔猪腹股沟淋巴结Ca2+-ATP酶活性在21 d时显著下降(P<0.05),脾脏中Ca2+-ATP酶活性在21 d和35 d时显著下降(P<0.05);腹股沟淋巴结CaMKⅡmRNA转录在整个试验过程中无明显变化,但脾脏中CaMKⅡmRNA在PCV2接种后21 d和35 d比对照组显著上调(P<0.05)。结论:细胞内Ca2+超载是PCV2感染引起仔猪淋巴结及脾脏淋巴细胞凋亡的重要机制。
- 华利忠张书霞孙运代蕾陈耿吕春子
- 关键词：淋巴细胞胞内钙离子仔猪
- 猪圆环病毒Ⅱ型和巨噬细胞对体外培养仔猪淋巴细胞白介素-6和白介素-10及其受体表达的影响被引量：8
- 2010年
- 选取5头猪圆环病毒Ⅱ型(PCV2)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,无菌取其脾脏制成单细胞悬液后,分设淋巴细胞(L组)、淋巴细胞+PCV2(L+V组)、淋巴细胞+巨噬细胞(L+M组)和淋巴细胞+巨噬细胞+PCV2(L+M+V组)4组进行体外培养。分别在培养后0 h、6 h、12 h和24 h收获淋巴细胞及其上清液。用ELISA检测上清液中猪淋巴细胞白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的含量,用RT-PCR检测淋巴细胞中IL-6、IL-6R、IL-10和IL-10RmRNA的表达。结果显示:与L组相比,L+V组中IL-6的含量在攻毒后24 h显著升高(P<0.05);PCV2在攻毒后12 h对IL-6RmRNA的表达呈显著抑制(P<0.05);PCV2在攻毒后6 h显著促进IL-10的表达(P<0.05)。上述结果表明,PCV2能促进淋巴细胞中IL-6和IL-10的表达;而巨噬细胞能抑制PCV2对淋巴细胞中IL-6表达的上调作用,同时协同PCV2促进淋巴细胞中IL-10及其受体持续性高表达,导致持续的免疫抑制,在PCV2的致病过程中扮演重要角色。
- 陈耿华利忠张书霞
- 关键词：巨噬细胞淋巴细胞白介素-6白介素-10
