陈海波
- 作品数：8 被引量：13H指数：2
- 供职机构：广西医科大学附属口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广西医科大学博士启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- VEGF-siRNA对人舌癌TCA8113细胞体内及体外生长影响的初步研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨针对血管内皮生长因子(VEGF)的小分子RNA干扰(siRNA)对舌癌TCA8113细胞体内和体外生长的影响。方法将两对特异性针对VEGF的siRNA真核表达载体,以空载体组做实验对照组,经脂质体转染人舌癌TCA8113细胞,经G418筛选后获得稳定表达,以未转染舌癌细胞作空白对照组,MTT检测转染后各组细胞增殖情况;将稳定转染的各组细胞接种裸鼠,接种后7 d开始,每4 d测量瘤体积,绘制肿瘤生长曲线,比较各时间段肿瘤生长,接种后47 d处死,比较瘤体积和瘤重。结果与实验对照组和空白对照组相比较,两个实验组细胞生长速度降低,细胞抑制率均显著增高,差异有统计学意义(P<0.05),裸鼠接种肿瘤生长缓慢,处死后测量到瘤体体积小、重量轻(P<0.05),而实验对照组和空白对照组细胞抑制率、瘤体体积、瘤重等差异无统计学意义(P>0.05)。结论VEGF-siRNA在体内和体外能有效的抑制人舌癌细胞的生长。
- 曹莹李敬于大海陈海波郝洁
- 关键词：舌癌RNA干扰血管内皮生长因子TCA8113
- 载体携带小干扰RNA抑制Tca8113细胞血管内皮生长因子的表达被引量：6
- 2008年
- 目的了解小干扰RNA(siRNA)对人舌癌细胞株Tca8113血管内皮生长因子(VEGF)表达的抑制作用。方法构建2对针对血管内皮生长因子的siRNA真核表达载体(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2),经脂质体Lipo-fectamine 2000转染Tca8113细胞,以空载体组作实验对照组,未转染组作空白对照组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化、酶联免疫吸附(ELISA)方法分别检测转染后的Tca8113细胞VEGF mRNA及蛋白表达。结果与实验对照组和空白对照相比较,转染Pu-VEGF-siRNA1和Pu-VEGF-siRNA2后Tca8113细胞的VEGF mRNA和蛋白表达明显下降。结论通过RNA干扰技术能有效抑制舌癌Tca8113细胞VEGF mRNA和蛋白的表达。
- 于大海曹莹姚志文李敬陈海波郝洁
- 关键词：舌癌血管内皮生长因子小干扰RNA
- VEGFsiRNA对人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成影响的研究被引量：2
- 2008年
- 目的:观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达对裸鼠皮下人舌癌Tca8113细胞移植瘤血管生成的影响。方法:构建人舌癌Tca8113细胞20只裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为4组。将两对针对VEGF的siRNA真核表达载体(Pu-VEGF-siRNA1,Pu-VEGF-siRNA2)脂质体法作瘤体内及瘤周注射;以注射空质粒组作实验对照组;未注射组作空白对照组。注射1次/3d×10次,末次注射3d后,剥离瘤体,RT-PCR检测瘤组织VEGF-mRNA表达,免疫印迹技术检测瘤组织VEGF蛋白表达。免疫组化染色法观察VEGF阳性染色及微血管参数。结果:Pu-VEGF-siRNA2组移植瘤VEGF-mRNA表达及VEGF蛋白表达、总体微血管密度、有腔微血管密度、有腔血管平均血管周长及管腔面积均较空质粒组及空白对照组低(p<0.05)。而Pu-VEGF-siRNA1组未观察到上述差别(p>0.05)。结论:siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达,有效减少肿瘤血管生成。不同的干扰片段体内作用效果存在差异。
- 李敬郝洁于大海陈海波曹
- 关键词：小干扰RNA舌癌微血管生成移植瘤
- 人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系的构建及多药耐药基因和蛋白的表达被引量：1
- 2007年
- 目的:建立人舌鳞状细胞癌耐放疗细胞系并检测多药耐药基因和蛋白的表达。方法:利用人舌鳞癌细胞株Tca8113,采用单次剂量1Gy,每周2次的60Co照射,诱导其耐放疗性,建立一株耐放疗的人舌鳞癌细胞系。并用免疫组化以及RT-PCR检测多药耐药基因的表达。结果:耐放疗的Tca8113细胞最大耐受剂量为20Gy,多药耐药基因和蛋白表达水平明显增高。结论:成功建立耐放疗细胞系,为口腔癌放疗耐药研究提供了细胞模型。
- 韦舜陈海波曹于大海
- 关键词：舌鳞癌细胞系
- siRNA抑制人舌癌细胞VEGF表达对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的利用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制人舌癌Tca8113细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达,观察其对培养细胞和移植瘤基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)-2、-9及基质金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitors of metalloproteinases,TIMPs)-1、-2蛋白表达的影响。方法以稳定转染携带VEGF-siRNA真核表达载体的Tca8113细胞(VEGF-siRNA1、VEGF-siRNA2)为实验组,以转染空载体的及未转染的Tca8113细胞为实验对照组和空白对照组。将细胞分别接种于裸鼠皮下,用免疫组化法分别测定各组培养细胞和移植瘤VEGF、MMP-2、-9及TIMP-1、-2的蛋白表达。结果各组培养细胞及移植瘤VEGF免疫组化染色:VEGF-siRNA1组、VEGF-siRNA2组与实验和空白对照组相比,平均阳性率降低,平均灰度值增高(P<0.05);各组培养细胞均未检测出MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的阳性表达。各组移植瘤MMP-9、TIMP-1、-2可见阳性表达,但各组染色平均阳性率及平均灰度值之间的差异无统计学意义(P>0.05),而MMP-2未见明显阳性表达。结论以siRNA干扰沉默人舌癌Tca8113细胞VEGF基因,可明显抑制细胞及移植瘤内VEGF蛋白表达,但是对MMP-2、-9及TIMP-1、-2蛋白的表达无明显影响。
- 于大海郝洁李敬曹莹陈海波
- 关键词：小干扰RNA舌癌基质金属蛋白酶基质金属蛋白酶抑制剂
- 硫代磷酸化反义寡核苷酸对耐放疗舌癌细胞MDR1基因和P-gp表达的抑制作用
- 2008年
- 目的:研究反义硫代磷酸化寡核苷酸(phosphorothioate antisense o1igonuc1eotide,PS-ASOs)抑制人舌癌细胞耐放疗株Tca8113多药耐药基因1(multidrug resistance gene1,MDR1)以及MDR1蛋白(P-gp)表达的作用。方法:人工合成互补于MDR1基因mRNA特定片断的硫代磷酸化正反义寡核苷酸;PS-ASOs浓度分别为0.1μmol/L,0.25μmol/L,0.5μmol/L,以正义寡核苷酸作为实验对照,未转染的耐放疗组为空白对照,以5μl/ml脂质体Lipofectamine为载体转染耐放疗的Tca8113细胞株;逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定转染后MDR1 mRNA表达,流式细胞技术(FCM)测定细胞膜P-gp表达。结果:与正义组和空白对照组相比,转染PS-ASOs后12h,MDR1 mRNA和P-gp表达降低,转染24h,各剂量组表达均降至最低,在转染48h后,基本恢复到转染前水平,而正义组和空白对照组在各时段及各剂量组均无统计学差异;双因素方差分析:PS-ASOs不同浓度(P=0.00)、不同作用时间(P=0.00)对下调MDR1 mRNA、P-gp表达差异显著,结论:PS-ASOs能降低MDR1基因以及蛋白的表达;PS-ASOs的作用具有浓度依赖性和时间依赖性。
- 于大海韦舜曹滢陈海波郝洁李敬
- 关键词：反义寡核苷酸多药耐药基因放疗舌癌
- RNA干扰沉默血管内皮生长因子抑制人舌癌细胞增殖的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的:通过转染能特异性沉默血管内皮生长因子(VEGF)表达的小干扰RNA(siRNA),观察能否抑制人舌癌Tca8113细胞株的增殖。方法:将自行构建的两对表达siRNA的重组质粒(PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2)转染到舌癌Tca8113细胞株中,以空载体组转染为实验对照组,以正常生长的舌癌细胞做空白对照组。实验组和实验对照组经G418筛选后,与空白对照组以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF mRNA的表达,流式细胞技术分析细胞凋亡,MTT比色法检测细胞的生长抑制率。结果:与实验对照组相比,PU-VEGF-siRNA1,PU-VEGF-siRNA2重组体显著降低舌癌细胞VEGF mRNA的表达(P<0.01),MTT的结果显示分别在24、48、72、96h对细胞增殖的抑制率增加(P<0.05),细胞凋亡率也明显增高(P<0.01);而空载体转染组与空白对照组相比,对Tca8113细胞株增殖无抑制作用,对细胞凋亡变化无明显影响(P>0.05)。结论:PU-VEGF-siRNA在细胞内表达的siRNA不仅能显著降低VEGF表达,而且能有效抑制人舌癌细胞的增殖。
- 于大海曹莹李敬陈海波郝洁
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子细胞增殖舌癌
- 血管内皮生长因子小干扰RNA抑制人舌鳞状细胞癌细胞移植瘤生长及血管生成的实验被引量：2
- 2008年
- 目的观察小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）抑制血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表达对人舌癌Tea8113细胞移植瘤的治疗作用。方法构建Tea8113细胞裸鼠皮下移植瘤模型，随机分成4组，A组、B组为实验组，C组：以空载体注射为治疗对照组，D组：未治疗为空白对照组，每组5只。脂质体法将两对VEGF siRNA真核表达载体（PU-VEGF-siRNA1、PU-VEGF-siRNA2）作瘤体内及瘤周注射，1次／3d，共10次后处死裸鼠；测量瘤体积及瘤重；反转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Western blotting和免疫组化法分别检测瘤组织VEGF—mRNA及VEGF蛋白表达，并检测瘤内微血管密度；流式细胞仪检测肿瘤细胞悬液的细胞周期比例，Tunel法检测组织细胞凋亡。结果B组瘤体积（0．402±0．158）cm^3、瘤重量（2．12±0．58）g，均低于C、D组，细胞G1期比例为（40．26±1．42）％，较C、D组增加，B组瘤组织VEGF mRNA（0．752±0．048）和蛋白表达（1．12±0．15），组织切片VEGF阳性细胞表达率（12．56±1．30）％、平均灰度值（164．2±15．42）及微血管密度（3．50±1．58）个，均低于C、D组（P〈0．05），凋亡细胞增加（P〈0．01）。结论siRNA能在体内抑制舌癌VEGF表达，减少肿瘤血管生成，延缓肿瘤生长。不同的干扰片段体内作用效果存在差异。
- 于大海李敬曹莹陈海波郝洁
- 关键词：鳞状细胞血管内皮生长因子小干扰RNA
