陈志远
- 作品数：2 被引量：13H指数：2
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-130a靶向调节PTEN基因对人乳腺癌细胞多柔比星敏感性影响的观察被引量：10
- 2013年
- 目的:探讨miR-130a对PTEN基因表达的调控,及其与乳腺癌MCF-7细胞株多柔比星耐药的关系。方法:利用miRNA芯片结合RT-qPCR的方法筛选到miR-130a在亲代敏感MCF-7/S细胞与多柔比星耐药细胞(MCF-7/Adr)中表达差异;通过靶基因预测软件预测PTEN与miR-130a基因的关系;通过miR-130a模拟物和抑制物转染实验结合四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、RT-qPCR和蛋白质印迹法观察miR-130a的表达变化对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其与PTEN基因表达间的关系。结果:与MCF-7/S相比,miR-130a在MCF-7/Adr中的表达水平明显增高(116 834.70±4 728.32)倍,t=19.035,P=0.000;但在多西紫杉醇耐药株MCF-7/Doc中的表达差异无统计学意义,t=0.703,P=0.521。MCF-7/S细胞转染miR-130amimics后,与阴性对照组相比,其miR-130a表达水平明显增高(17.686±1.057)倍,t=8.360,P=0.001;MCF-7/S空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(0.240±0.099)、(0.181±0.060)和(0.606±0.164)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130amimics后细胞的IC50显著增高,t=5.200,P=0.007。同时PTEN mRNA和蛋白表达水平明显下调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(0.362±0.076)倍,t=2.927,P=0.043;蛋白表达水平是阴性对照组的(0.386±0.020)倍,t=20.713,P=0.000 3;而MCF-7/Adr转染miR-130ainhibi-tors后,其miR-130a表达水平是阴性对照组的(0.169±0.035)倍,t=12.036,P=0.000 2;MCF-7/Adr空白对照组、阴性对照组和实验组对Adr的IC50分别为(50.793±3.970)、(46.206±1.963)和(23.366±1.304)mg/L;与阴性对照相比,转染miR-130ainhibitors后细胞的IC50显著降低,t=16.784,P=0.000 7;同时PTEN mRNA和蛋白表达水平均明显上调,PTEN mRNA水平是阴性对照组的(3.564±0.336)倍,t=4.122,P=0.015;蛋白表达水平是阴性对照组的(2.019±0.268)倍,t=8.999,P=0.000 8。结论:miR130a可能通过靶定PTEN基因来增强乳腺癌细胞对多柔比星的耐药性。
- 陈志远钟山亮季明华许金金胡清陈伟贤徐涛赵建华唐金海
- 关键词：药物疗法耐药多柔比星药物疗法PTEN
- 乳腺癌耐药细胞来源的Exosomes的分离鉴定及其在耐药传递中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的探讨乳腺癌多西紫杉醇（DOC）耐药细胞（MCF-7／DOC）和阿霉素（ADM）耐药细胞（MCF-7／ADM）对Exosomes的分泌功能及其在耐药性传递中的作用。方法采用超速分级离心的方法，从乳腺癌耐药细胞培养液上清中提取Exosomes，透射电镜下观察其形态特征，Westernblot法检测乳腺癌耐药细胞和Exosomes中标志蛋白的表达情况。利用重组慢病毒载体构建稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的乳腺癌亲本敏感细胞系GFP-MCF-7／S，通过细胞间耐药实验和Exosomes传递耐药性实验观察耐药性传递现象。结果与MCF-7／S细胞相同，MCF-7／DOC和MCF-7／ADM细胞也分泌Exosomes，均为圆形或椭圆形的膜性囊泡，直径为30～100／lm。Exosomes仅表达Exosomes标志性蛋白Tsgl01，不表达内质网标志蛋白Calnexin。MCF-7／S、MCF-7／DOC或MCF-7／ADM细胞与GFP—MCF一7／S细胞共培养72h后，荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别。但在加人化疗药物DOC或ADM处理24h后，MCF-7／DOC＋GFP-MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为65．5％，明显高于MCF-7／S＋GFP-MCF-7／S组细胞（25．5％，P〈0．001）；MCF-7／ADM＋GFP-MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为53．6％，亦明显高于MCF-7／S＋GFP—MCF-7／S组细胞（25．4％，P〈0．001）。MCF-7／S、MCF-7／DOC或MCF-7／ADM细胞来源的Exosomes与GFP-MCF-7／S细胞共培养48h后，荧光显微镜下观察各组细胞的荧光表达情况无明显差别。但在加入化疗药物DOC或ADM处理24h后，MCF-7／DOC来源的Exosomes＋GFP—MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为59．9％，明显高于MCF-7／S来源的Exosomes＋GFP—MCF-7／S组细胞（32．4％，P〈0．001）；MCF-7／ADM来源的Exosomes＋GFP-MCF-7／S组细胞的荧光细胞平均存活率为58．3％，亦明显高于MCF-7／S来源的Exosomes＋GFP—MCF-7／S组细胞（27．2％，P〈0．001）。结论乳腺癌细胞间存在�
- 许金金李文静钟山亮李秀娟陈志远胡清唐金海赵建华
- 关键词：EXOSOMES多西紫杉醇阿霉素
