陈婷飞
- 作品数：7 被引量：53H指数：5
- 供职机构：浙江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 猪圆环病毒2型ORF3、ORF4蛋白的检测和功能研究
- 猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type2，PCV2)属于圆环病毒科。主要编码ORF1和ORF2两大阅读框。ORF1编码与病毒复制相关的Rep蛋白，ORF2构成PCV2免疫相关的结构蛋白Cap。其中...
- 陈婷飞
- 关键词：猪圆环病毒2型蛋白功能核苷酸序列测定
- 文献传递
- 猪圆环病毒2型HZ0201株分子克隆的感染性分析被引量：5
- 2007年
- 通过PCR扩增猪圆环病毒2型HZ0201株的全长基因组,克隆到pBluescript SK+载体SacⅡ位点;同时以SacⅡ切出PCV2全长DNA,并进行自身环化,分别构建PCV2全长基因组重组质粒和首尾相接的环化DNA。利用脂质体分别将PCV2重组质粒和环化DNA转染PK-15和Vero细胞,免疫组织化学试验(IHC)结果显示二者均检出PCV2阳性抗原。其中PCV2环化DNA转染细胞的阳性率显著高于PCV2重组质粒。将转染细胞进行连续8次传代,以IHC对每代病毒检测表明,PCV2分子克隆在PK-15细胞中形成的病毒能稳定感染,并且滴度逐步增加;而在Vero细胞上复制能力不强,传到第四代即不能检出病毒。
- 陈婷飞周继勇陈庆新商绍彬
- 关键词：猪圆环病毒2型分子克隆
- 猪圆环病毒2型ORF4基因编码蛋白的体外表达被引量：14
- 2008年
- 为了探讨猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF4基因结构及其所编码蛋白在PK15细胞中的表达特性,以PCV-2杭州株病毒DNA为模板进行PCR,结果扩增出了ORF4基因,并分别构建了pGEX-4T-1-ORF4原核表达载体和pEGFP-C2-ORF4真核表达载体。序列分析、SDS-PAGE分析和Western-blot检测表明,PCV-2 ORF4基因长180 bp,共编码60个氨基酸;其编码蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式存在,分子质量大小约为6.685 ku。真核PK15细胞的转染试验显示,ORF4重组蛋白在PK15细胞的细胞核和细胞浆中均有表达,但对其有一定的毒性。
- 李增魁陈婷飞李益飞周继勇
- 关键词：猪圆环病毒2型原核表达真核表达纯化
- 绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用被引量：7
- 2008年
- 许多海洋无脊椎动物体内都含有绿色荧光蛋白,这种蛋白质结构很特殊,在受到蓝光或紫外线刺激时可以发射绿色荧光,并不需要任何协同因子、底物,适合用作普遍的报告标记,尤其适合于活体细胞或组织。而且它发出的荧光稳定,检测简单,结果真实可靠。并且GFP对光漂白、氧化剂、还原剂以及其他许多化学试剂具有极强的稳定性,易于构建载体。它独特的性质引起了生物学界的广泛关注。本文简要地概述了绿色荧光蛋白及其在分子生物学上的应用,包括蛋白融合,细胞筛选,定位标记,基因表达调控,计算细胞生长速度等。
- 何海健陈婷飞
- 关键词：FLUORESCENT分子生物学
- 猪圆环病毒Ⅱ型Rep基因在PK15细胞中的表达及特性被引量：8
- 2005年
- 为研究猪圆环病毒型(PCV2)Rep基因在PK15细胞中的表达特性,通过PCR方法克隆了PCV2杭州株(HZ0201)Rep基因全长945bp片段,与真核表达载体pCI-neo构建为重组质粒pCI-PCV2-Rep。pCI-PCV2-Rep质粒转染PK15细胞后48h,通过RT-PCR可检测到PCV2RepmRNA的转录;用猪PCV2多抗血清作间接免疫荧光试验,可检测到Rep基因表达产物。在表达量低的细胞中,PCV2Rep蛋白主要位于PK15的细胞浆,在表达量高的细胞中,细胞浆和细胞核中均含有大量的Rep蛋白,表明Rep对PK15细胞的细胞浆和细胞核的亲嗜性没有明显差别。
- 申会刚周继勇陈庆新郭军庆陈婷飞商绍彬李增魁
- 关键词：PK15细胞REP间接免疫荧光试验基因表达产物质粒转染
- 猪圆环病毒Ⅱ型浙江株的鉴定
- 从浙江省猪场采取以呼吸症状、淋巴结肿大、生长迟缓为特征猪淋巴结、肾脏、肺脏、脾脏等器官,参照Geneband已报道的PCV基因序列设计一对检测和一对全基因引物,提取淋巴结、肾脏、肺脏、脾脏等组织DNA,并以之为模板进行P...
- 陈庆新叶菊秀陈婷飞商绍彬郑肖娟李增魁周继勇
- 文献传递
- 猪Ⅱ型圆环病毒浙江株的分离及全基因组结构分析被引量：19
- 2004年
- 用PCR方法对从浙江省猪场收集的、以淋巴结肿大和生长迟缓为特征的患猪腹股沟淋巴结进行PCV2检测。将检测为阳性的病料研磨、离心、过滤除菌后 ,接种PCV freePK 1 5细胞进行病毒分离 ,分离获得 3株病毒 ,命名为HZ0 2 0 1、HZ0 2 0 2、NB0 30 1。PK 1 5细胞增殖所得病毒离心纯化后 ,在电镜下可观察到直径约为 1 7～ 2 0nm ,呈二十面体对称的病毒粒子。以组织和病毒的细胞DNA为模板进行PCV2的全基因扩增 ,测序结果显示 ,3株病毒分离物全基因序列均由 1 76 7bp组成 ,直接来自病料与细胞分离毒株的核苷酸同源性为 1 0 0 %。基因组内含有 1 1个ORF。通过比较发现 ,分离毒株与PCV2参考株的同源性介于 94 2 %～ 99 7%之间 ;与PCV1参考株的同源性为77 2 %～ 77 9%。
- 陈庆新周继勇叶菊秀申会刚陈婷飞
- 关键词：猪圆环病毒2型基因结构PCV2
