陈先春
- 作品数：12 被引量：13H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 核仁磷酸蛋白突变基因表达对NIH3T3细胞增殖和凋亡的影响被引量：4
- 2010年
- 目的探讨核仁磷酸蛋白(nucleophosmin,NPM)突变基因对小鼠NIH3T3成纤维细胞系体外增殖和凋亡的影响以及其分子机制。方法通过脂质体介导将真核表达载体pEGFP-C1-NPMc+转染NIH3T3细胞,G418筛选稳定表达NPM突变蛋白细胞株,RT-PCR和Western blot检测NPM突变基因和蛋白的表达。MTT、克隆形成实验检测细胞体外增殖能力;FCM检测细胞周期分布及凋亡水平的改变,并通过对周期调控因子p21及凋亡相关分子Caspase-3活性检测,初步探讨NPM突变参与细胞恶性增殖的分子机制。结果建立了稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞株。NPM-mA实验组细胞较对照组细胞增殖能力及平板克隆形成率明显增高(P<0.05);甲基纤维素集落形成实验显示各组细胞在甲基纤维素上均不能形成集落;与对照组比较,NPM-mA实验组细胞中G1期细胞比例(42.27±0.86)%显著减低(P<0.01),S期细胞比例(43.08±0.74)%显著增加(P<0.01),同时伴有p21 mRNA水平下降,稳定表达NPM突变基因的NIH3T3细胞凋亡率(1.00±0.13)%明显降低(P<0.01),Caspase-3活性(0.784±0.080)下降(P<0.01)。结论NPM突变基因可促进NIH3T3细胞体外增殖,抑制细胞凋亡发生。
- 邵会媛杨再林高玉洁苗宗玉覃凤娴陈先春蔡晓钟张伶
- 关键词：细胞增殖细胞凋亡NIH3T3细胞
- NPM1突变基因调控K562白血病细胞侵袭表型的相关机制
- 2011年
- 目的探讨CXCR4、Angs在NPM1突变参与调控的白血病细胞浸润转移中的作用，以期进一步明确NPM1突变在白血病浸润转移中的调控机制。方法通过基因转染构建稳定表达NPM1突变蛋白的K562白血病细胞株（K562-mA）。qRT—PCR检测各组细胞CXCR4、Ang-1／2的mRNA表达水平；Western免疫印迹和流式细胞仪分别检测细胞CXCR4总蛋白和膜蛋白的表达。结果建立了稳定表达NPM突变基因的K562-mA细胞株。与未处理组和空载体转染组相比，K562-mA细胞CXCR4的mRNA和蛋白表达水平显著增高；Ang-1mRNA表达水平明显降低、Ang-2mRNA表达水平明显增高。结论CXCR4、Ang-1／2可能在MPM1突变调控白血病细胞的浸润转移中发挥重要作用。
- 陈先春覃凤娴谭诗张慧娟邵会媛张伶
- 关键词：白血病趋化因子受体4血管生成素
- 人干细胞标志Musashi2在急性髓系白血病细胞分化中的表达变化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨人干细胞标志Musashi2(Msi2)在佛波酯(phorbol myristoyl acetate,PMA)诱导急性单核白血病细胞株THP-1分化过程中的表达变化。方法 PMA作用THP-1细胞0、6、12、24 h后,倒置显微镜下观察THP-1细胞形态学改变,计算分化细胞百分数;流式细胞仪检测THP-1细胞表面分化抗原CD11b的表达;定量PCR和Western blot检测Msi2的基因及蛋白表达水平;定量PCR检测Msi2下游信号分子Numb的mRNA水平;定量PCR和Western blot检测Numb下游分子Notch1的mRNA和蛋白表达水平。结果 PMA处理24 h后可诱导THP-1细胞出现巨噬细胞样分化表型,实验组分化细胞的百分比显著高于未处理组(P<0.05)。同时24 h组CD11b表达量(59.30±8.70)较未处理组(0.32±0.08)显著增加(P<0.05)。实验组白血病细胞经PMA处理24 h后,Msi2的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.33±0.08)和(0.50±0.01),显著低于未处理组(P<0.05);PMA处理12 h后Numb的mRNA相对表达量为(2.92±0.33),较未处理组明显升高(P<0.05);而PMA处理24 h后Notch1的mRNA和蛋白相对表达量分别为(0.31±0.03)和(0.23±0.01),较未处理组显著下降(P<0.05)。结论干细胞标志Msi2表达随THP-1细胞分化而下降,Msi2-Numb-Notch1通路可能参与白血病细胞的分化调控。
- 张慧娟谭诗陈莎娜王娟覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：分化佛波酯THP-1细胞
- NPM1突变基因经RAS/MAPK/ERK信号通路调控白血病细胞体外侵袭
- 第一部分，NPM1突变基因调控白血病细胞MMPs和Ang水平 核仁磷酸蛋白(nucleophosmin，NPMI)基因是急性髓系白血病中发生突变频率最高的基因，其基因突变参与调控白血病的发生和发展。临床上，发生NPM1...
- 陈先春
- 关键词：细胞浸润血管生成素信号通路
- 干细胞标志Musashi2基因RNAi腺病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:构建人干细胞标志分子Musashi2(Msi2)RNAi腺病毒载体,并检测其在膀胱癌细胞株BIU87中的干扰效果及对细胞增殖的影响。方法:将2对干扰片段msi2-1和msi2-2及阴性对照scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,经酶切鉴定及测序后,将测序正确的克隆经PmeⅠ酶切后与pAdeasy-1骨架质粒在BJ5183菌内重组,重组质粒经PacⅠ酶切后转染入293A细胞,进行腺病毒的包装和扩增。Real-time PCR和Western blotting法分别检测腺病毒感染BIU87细胞后Msi2的mRNA和蛋白表达水平,MTT实验检测干扰Msi2对BIU87细胞增殖的影响。结果:成功将干扰片段和scramble片段克隆入pSES-HUS穿梭载体,构建出pAdeasy-1-pSES-HUS-msi2和pAdeasy-1-pSES-HUS-scramble重组腺病毒载体并包装扩增出腺病毒。与scramble组比较,msi2-1和msi2-2组的Msi2mRNA和蛋白表达水平均明显下降(P<0.05)。干扰Msi2后,BIU87细胞增殖能力下降(P<0.05)。结论:成功构建Msi2RNAi腺病毒载体,其可有效抑制膀胱癌细胞株BIU87内Msi2的表达并抑制细胞增殖。
- 张慧娟谭诗陈莎娜王娟覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：RNA干扰腺病毒载体
- 过表达突变的NPM1基因对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的影响被引量：2
- 2012年
- 目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1)和未处理组(THP-1)为对照。MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比较,实验组THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强(P<0.05),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G1期细胞比例显著减低(P<0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响。
- 覃凤娴邵会媛陈先春谭诗张慧娟肖玲张伶
- 关键词：白血病凋亡
- NPM1突变基因通过MMPs参与调控白血病细胞体外侵袭被引量：1
- 2011年
- 核仁磷蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变是目前急性髓系白血病(AML)中突变率最高的基因改变,在白血病的发生发展过程中发挥重要的调控作用。为探讨NPM1突变参与调控白血病髓外浸润的分子机制,将表达质粒pEGFPC1-NPM1-mA转染THP-1细胞系,筛选稳定表达NPM1突变蛋白的白血病细胞株(THP-1-mA)。利用RT-PCR及Western blot分析了THP-1-mA细胞与亲代细胞间MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2表达水平的差异。结果显示,具有体外高侵袭能力的THP-1-mA组细胞MMP-2的mRNA水平和蛋白水平均明显高于两对照组,而MMP-9 mRNA表达水平虽有所增高,但蛋白表达水平却明显降低。同时,与空载体转染组和未处理组细胞相比,THP-1-mA组细胞TIMP-2的mRNA水平和蛋白水平表达显著降低,差异具有统计学意义;TIMP-1表达水平无明显改变。提示MMP-2及其抑制剂TIMP-2在NPM1突变参与调控的白血病细胞髓外浸润中可能发挥重要作用。
- 邵会媛苗宗玉覃凤娴陈先春谭诗张慧娟张伶
- 关键词：白血病MMPSTIMP
- 核仁磷酸蛋白基因突变对K562白血病细胞分化的影响
- 2012年
- 核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变在急性髓系白血病的发生发展中发挥着重要作用,而与白血病分化阻滞的关系尚未完全阐明。为探讨NPM1基因突变对白血病细胞体外分化的影响,将携带NPM1 A型突变(NPM1-mA)的表达质粒载体pEGFPC1-NPM1-mA转染白血病K562细胞系,构建稳定表达NPM1-mA蛋白的细胞株(K562 mA),同时设立野生型NPM1转染组(K562 wt)、空载体转染组(K562 C1)和未处理组(K562)为对照。利用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导各组细胞分化,瑞氏–吉姆萨染色观察细胞分化的形态改变,计算诱导分化率;相差显微镜计数贴壁细胞数量;流式细胞术分析细胞表面分化抗原CD41的表达。结果显示,PMA作用72 h后,与对照组相比,K562 mA组细胞的诱导分化率及贴壁细胞数明显降低(P<0.05);同时,CD41的表达受到显著抑制(P<0.01)。提示NPM1基因突变能够阻滞白血病细胞系K562的体外分化。
- 谭诗张慧娟王娟陈莎娜覃凤娴陈先春张伶
- 关键词：白血病细胞分化K562细胞系
- NPM1突变通过NF-κB调控白血病细胞化疗药物敏感性
- 目的观察携NPM1突变的白血病细胞对化疗药物的敏感性,并初步探讨其分子机制。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1-mA)的载体pEGFPC1-NPM1-mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 A型突变蛋白...
- 覃凤娴邵会媛陈先春谭诗张慧娟张伶
- 文献传递
- 稳定表达核仁磷酸蛋白1突变基因的白血病细胞株的构建及鉴定
- 2011年
- 目的构建稳定表达人核仁磷酸蛋白1(Nucleophosmin 1,NPM1)A型突变蛋白(NPM1-mA)的白血病髓性细胞系,并进行鉴定。方法利用xfectTM转染试剂将含人NPM1-mA基因的重组质粒pEGFP-C1-NPM1-mA分别转染THP-1和K562细胞系,G418筛选阳性克隆,建立稳定表达NPM1-mA的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA。采用RT-PCR和Western blot检测细胞NPM1-mA mRNA和蛋白水平的表达,细胞免疫化学法检测NPM1-mA蛋白的亚细胞定位,细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力的改变。结果构建的白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA的RT-PCR产物均可见446 bp的NPM1-mA基因条带;NPM1-mA蛋白的表达量明显升高;NPM1-mA蛋白存在于构建的2株白血病细胞胞浆中;与空载体转染组和未转染组细胞相比,转染NPM1-mA基因后,THP-1细胞体外增殖能力增强,K562细胞体外增殖能力减弱。结论已成功构建了稳定表达NPM1-mA的两株白血病细胞株THP-1-mA和K562-mA,为进一步研究NPM1基因突变对白血病细胞生物学特性的影响提供了良好的细胞模型。
- 邵会媛覃凤娴苗宗玉陈先春谭诗高玉洁张伶
- 关键词：白血病突变K562细胞系
