陆黎敏
- 作品数：15 被引量：70H指数：6
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- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- miR-221对小鼠乳腺上皮细胞增殖和泌乳功能的影响
- 陆黎敏
- 关键词：MICRORNASMIR-221GHR细胞增殖
- 蛋氨酸对奶牛乳腺上皮细胞亚细胞蛋白质组的影响研究被引量：3
- 2012年
- 为寻找奶牛乳腺上皮细胞亚细胞结构中与泌乳相关的重要蛋白质、从蛋白质水平揭示乳蛋白合成的调控机制,应用双向凝胶电泳技术分离体外培养的蛋氨酸处理组与正常组奶牛乳腺上皮细胞蛋白质,利用Image Maser 2D软件对图谱进行对比分析,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和数据库检索鉴定,并采用实时荧光定量PCR技术在mRNA水平上验证2-DE结果。质谱鉴定出8个表达上调的差异蛋白质,大多数差异蛋白质的功能涉及细胞骨架构成、能量代谢等过程。这些差异点的发现为研究奶牛泌乳机理提供了有益的线索。
- 王佳丽高学军李庆章黄建国陆黎敏骆超超刘荣金鑫
- 关键词：蛋氨酸奶牛乳腺上皮细胞双向电泳蛋白质组
- 蛋氨酸对体外培养奶牛乳腺上皮细胞泌乳能力的影响被引量：9
- 2012年
- 研究蛋氨酸与乳蛋白合成及乳腺泌乳能力的关系。建立体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,采用高效液相色谱法、实时荧光定量PCR、细胞活力分析仪、甘油三酯试剂盒检测不同浓度蛋氨酸(0、0.2、0.4、0.8、1.2、1.6mmol/L)对体外培养24h的奶牛乳腺上皮细胞泌乳的影响。结果表明,蛋氨酸在1.2mmol/L时对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞增殖的促进作用最明显,乳糖分泌量最高,β-酪蛋白mRNA表达量最高且甘油三酯合成最多(P<0.01)。
- 王佳丽高学军李庆章黄建国陆黎敏乔彬潘洪宝
- 关键词：蛋氨酸奶牛乳腺上皮细胞乳糖Β-酪蛋白甘油三酯
- 牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法
- 牛肌卫星细胞的体外分离培养及诱导分化的方法，它涉及细胞的体外分离培养及诱导分化的方法。它解决了现有牛肌卫星细胞的分离培养存在成本高，传代稳定性不好，且诱导分化存在所获肌管数量少及不具有收缩功能的问题。方法：清洗组织，用胰...
- 严云勤佟慧丽李树峰兴孝友高学军陆黎敏李光鹏金慧然
- 文献传递
- 牛骨骼肌特异性启动子的筛选被引量：7
- 2011年
- 分别构建含有牛骨骼肌α-肌动蛋白(-αactin)启动子、牛骨骼肌肌球蛋白轻链2(mylpf)启动子及牛肌酸激酶(ckm)启动子的荧光素酶报告基因表达质粒。将3种荧光素酶表达质粒分别与含有海肾荧光素酶的质粒共转染牛成肌细胞和牛成纤维细胞。经双荧光素酶检测得到转染成肌细胞,72 h后,-αactin启动子的表达量显著高于mylpf启动子和ckm启动子,转染成纤维细胞72 h后,这3种启动子的表达量和空载体相近。结果表明,-αactin启动子在成肌细胞中的表达效率高于mylpf启动子和ckm启动子;3种启动子在成纤维细胞中的表达量与空载体相近,证明了这3种启动子的骨骼肌特异性。通过对骨骼肌特异性启动子的研究,为外源基因在骨骼肌组织的特异性表达提供了试验依据,为进一步研究转基因肉牛奠定了基础。
- 朱丹丹高学军严云勤刘晓飞陆黎敏
- 关键词：启动子成肌细胞成纤维细胞
- MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控的作用及机理研究报告被引量：1
- 2016年
- 该研究采用组织块儿培养法,成功构建了体外培养的奶牛乳腺上皮细胞模型,应用CASY细胞分析仪检测了不同浓度和作用时间下蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞活力的影响,利用高效液相色谱检测了β-casein的分泌情况,确定了蛋氨酸和赖氨酸最佳剂量分别为0.6 mmol/L和1.2 mmol/L,最佳作用时间为24 h。建立奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组技术,应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋氨酸和赖氨酸对奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的差异影响,发现蛋氨酸处理组,mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)和e EF1B蛋白质表达上调;并应用荧光定量PCR和Western blotting技术验证差异蛋白在转录水平和蛋白水平上的表达,与2-DE结果一致。实验过程中构建了真核表达载体p GCMVIRES-EGFP-MAPK1、e EF1B,转染至奶牛乳腺上皮细胞中,通过G418筛选获得稳定转染的细胞株;然后通过基因沉寂和过表达等技术,减少或增加MAPK1、e EF1B的表达水平后,检测泌乳信号转导通路中重要调控蛋白的表达情况,发现蛋氨酸和赖氨酸营养素可以通过调节MAPK1、e EF1B介导m TOR信号转导通路,影响Stat5的表达,进而调节乳蛋白的表达。以上实验结果为奶牛营养基因组学的研究提供了理论依据和技术方法。
- 陆黎敏黄建国李庆章高学军
- 关键词：蛋氨酸赖氨酸奶牛乳腺上皮细胞
- 双向电泳检测奶牛乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质方法的建立被引量：2
- 2011年
- 为研究不同激素或营养素对乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质的影响,本实验建立细胞核磷酸化蛋白质提取方法及双向电泳实验技术。结果表明,细胞核磷酸化蛋白纯化结合双向电泳技术是乳腺上皮细胞核磷酸化蛋白质组学研究的有效方法,可为进一步研究乳腺上皮细胞机理提供技术基础。
- 黄建国高学军李庆章陆黎敏骆超超王佳丽刘荣乔彬金鑫
- 关键词：细胞核磷酸化蛋白质双向电泳奶牛乳腺上皮细胞
- MAPK1和eEF1B对奶牛乳腺上皮细胞泌乳调控作用及机理研究
- 我国是一个奶业大国，但奶牛产奶量低、发病率高严重制约着我国奶牛养殖业的发展，如何提高乳产量及乳蛋白含量成为我们亟待解决的问题。蛋氨酸和赖氨酸是乳蛋白合成的重要前体物质，以前的研究主要侧重于蛋氨酸和赖氨酸对奶牛生产性能的影...
- 陆黎敏
- 关键词：蛋氨酸赖氨酸奶牛乳腺上皮细胞
- 文献传递
- 奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质组双向电泳方法的建立被引量：3
- 2012年
- 蛋白质样品的双向电泳分离效果受各种试验条件的影响较大,针对不同来源的蛋白样品进行试验条件的优化可获得具有较高分辨率的双向电泳图谱。试验拟建立优化的奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质双向电泳分离体系,按标准条件对蛋白质进行双向电泳分离,并对关键因素进行优化,采集电泳图谱并分析双向电泳图谱中蛋白斑点的数量、图像分辨率及背景条纹的变化。通过对试验条件的筛选和优化,成功建立了具有较高分辨率的奶牛乳腺上皮细胞核蛋白质组双向电泳分离体系。
- 刘荣髙学军李庆章黄建国陆黎敏骆超超金鑫王佳丽
- 关键词：双向电泳蛋白质组奶牛乳腺上皮细胞
- 牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达被引量：14
- 2010年
- 【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高(P<0.01)。细胞形态观察显示成肌细胞融合为肌管。【结论】构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成肌细胞中高效表达,myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。
- 汤展毅严云勤高学军陆黎敏朱丹丹冀志庚
- 关键词：稳定转染成肌细胞
