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金扩世: 作品数：12 被引量：100H指数：5; 供职机构：解放军农牧大学军事兽医研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家攀登计划更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

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猪瘟病毒cDNA片段的合成及克隆: 1995年; 以猪瘟病毒石门系毒株常规感染 PK15细胞48小时后,去上清,直接用异硫氰酸胍一步法提取细胞总 RNA。根据猪瘟病毒Alfort 株的基因组序列化学合成了8条引物,用3′端引物及提取的总 RNA 进行反转录合成第一链 cDNA,再以此单链 cDNA 为模板,用 PCR 法扩增猪瘟病毒 cDNA 片段,2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果证明所扩增片段的长度与根据 Alfort 株基因组序列推测的长度相符,依次为693bp,629bp,346bp,285bp,120bp。用限制性内切酶分析进一步证明了所扩增片段的正确性。; 李红卫涂长春章金钢金扩世扈荣良刘士英殷震; 关键词：猪瘟病毒扩增片段电泳鉴定克隆琼脂糖凝胶

减蛋综合征病毒基因组Hind Ⅲ酶切片段的克隆及酶谱分析被引量：10: 1998年; 以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法克隆减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ）基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段，用Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ－ｄＵＴＰ标记的ＥＤＳＶＨｉｎｄⅢ片段探针打点杂交，证实１３个克隆插入了ＥＤＳＶＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ片段。酶切分析结果表明，克隆到了Ａ、Ｂ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ７个不同大小的片段，选取含有上述插入片段的、具有代表性的７个相应质粒ｐＵＨＡ、ｐＵＨＢ、ｐＵＨＦ、ｐＵＨＧ、ｐＵＨＨ、ｐＵＨＩ、ｐＵＨＪ，在分别以ＢａｍＨＩ、ＢｇｌⅡ、ＣｌａⅠ、ＥｃｏＲＩ、ＥｃｏＲＶ、ＰｓｔⅠ、ＳｍａⅠ、ＸｂａⅠ、ＸｈｏⅠ单酶切的基础上，经适当组合的双酶切，得出各片段存在的单一酶切位点为Ａ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ、ＳｍａⅠ、ＸｈｏⅠ位点；Ｂ：ＢｇｌⅡ、ＳｍａⅠ位点；Ｆ：ＢｇｌⅡ、ＥｃｏＲＶ位点；Ｇ：ＰｓｔⅠ位点；Ｈ：０；Ｉ：ＰｓｔⅠ位点；Ｊ：ＥｃｏＲＶ、ＸｈｏⅠ位点。为进一步筛选病毒复制非必需区，构建腺病毒表达载体，以及研究禽类腺病毒的分子生物学特性打下了基础。; 胡敬东章金钢李红卫金扩世涂长春殷震; 关键词：减蛋综合征病毒克隆

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆及在原核细胞中的表达被引量：12: 1999年; 应用ＲＴＰＣＲ分两段扩增猪瘟病毒（ＨＣＶ）石门株Ｅ２基因，然后对其进行了克隆。利用两个片段重叠部分的单一ＢｇｌⅡ位点，将它们连接成为完整的Ｅ２基因，并克隆到ｐＵＣ１９质粒中，获得重组质粒ｐＨＣＥ２。另设计一对引物，以ｐＨＣＥ２为模板扩增出不含信号肽的Ｅ２基因，然后将其克隆到表达载体质粒ｐＢＶ２２０和ｐＥＴ２８ａ（＋）中，获得重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２，用酶切、ＰＣＲ和序列分析鉴定Ｅ２基因插入位置、方向和读码框架的正确性。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ和直接ＥＬＩＳＡ检测表明重组质粒ｐＢＶＥ２和ｐＥＴＥ２转化、诱导的受体菌均能表达Ｅ２抗原。; 李红卫涂长春余兴龙金扩世吕宗吉李茂祥章金钢殷震; 关键词：猪瘟病毒 E2基因克隆原核细胞猪瘟

新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析被引量：49: 1999年; 新城疫病毒（ＮＤＶ）长春株在鸡胚增殖后纯化，提取ＲＮＡ，然后利用特异性引物，经ＲＴ－ＰＣＲ一次性扩增出了ＮＤＶ长春株的全长Ｆ基因。将该Ｆ基因插入ｐＫＳ（－）后，进行了序列测定。序列分析表明，该Ｆ基因核苷酸长度为１７５８ｂｐ，编码５５３个氨基酸，序列中有６个糖基化位点，１３个半胱氨酸残基，裂解位点区（１１２～１１７）氨基酸序列为Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ，与所有弱毒株在这一区域的序列（Ｇｌｙ－Ａｒｇ／Ｌｙｓ－Ｇｌｎ－Ｇｌｙ／Ｓｅｒ－Ａｒｇ－Ｌｅｕ）相符，证明长春株为弱毒株。同源性分析表明，长春株Ｆ基因与目前国外发表的其他ＮＤＶＦ基因相比，核苷酸序列同源性在８８％～９９％之间。; 王兴龙金宁一丁壮金扩世罗坤罗坤王宏伟郭志儒殷震; 关键词：新城疫病毒 F蛋白基因 RT-PCR

异源猪瘟病毒C株E2基因保护性抗原编码区的序列分析与比较被引量：17: 1998年; 应用ＲＴ－ＰＣＲ扩增了我国南京、成都、吉林３个兽医生物制品厂提供的猪瘟病毒兔化弱毒株（Ｃ株）的Ｅ２基因保护性抗原编码区，然后将其克隆到ｐＧＥＭ－Ｔ载体中，用Ｓａｎｇｅｒ′ｓ双脱氧法对重组质粒中的插入片段进行了序列分析。将测得的这３个厂生产的Ｃ株的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列与作者实验室测得的国内石门株和国外测得的Ｃ株相同区域进行同源性比较，发现不同来源的Ｃ株及石门株之间存在不同程度的差异，核苷酸同源性为９３．６％～９９．６％，氨基酸同源性为９０．６％～９８．９％。; 李红卫涂长春吕宗吉孙明金扩世余兴龙殷震; 关键词：猪瘟病毒 E2基因

猪瘟病毒保护性抗原E2基因的克隆、序列分析及在大肠杆菌中的表达: 1997年; 本研究首次用RT-PCR技术分两段扩增了我国猪瘟病毒(HCV)标准强毒石门株的主要保护性抗原E2基因,并将其进行了克隆和序列分析。将这两个片段连接成完全的E2基因,并将其克隆到原核表达载体pBV220和pET-28a(+)中,重组表达载体转化、诱导的受体菌经Western印迹和直接ELISA检测能够表达E2抗原。用RT-PCR技术对从我国多个地区收集的猪瘟病料进行检测,结果从吉林、长春、南京、重庆、昆明、佛山病料中扩增出了HCV; 李红卫涂长春金扩世王新平吕宗吉余兴龙殷震; 关键词：猪瘟病毒肠杆菌 E2基因氨基酸序列野毒株

猪瘟兔化弱毒囊膜糖蛋白EI基因的扩增与克隆: 1997年; 本试验直接从细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒（ＨＣＬＶ）ＲＮＡ，并根据猪瘟病毒（ＨＣＶ）Ａｌｆｏｒｔ株和Ｂｒｅｓｃｉａ株的核苷酸序列，将ＥＩ基因分两段，设计并合成了４条引物。采用反转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），成功地扩增出了ＨＣＬＶ保护性囊膜糖蛋白ＥＩ基因。以ｐＧＥＭ－Ｔ和ｐＵＣ１９为载体，将ＥＩ基因的两个片段分别进行克隆并转化到大肠杆菌ＪＭ１０１。经过分析鉴定。; 金扩世李红卫章金刚王新平涂长春殷震; 关键词：猪瘟兔化弱毒疫苗

牛β-酪蛋白基因上游调控序列PCR扩增及克隆: 1998年; 采用蛋白酶Ｋ法从母牛肝中提取染色体ＤＮＡ，将其纯化后作为ＰＣＲ扩增模板。以引物设计软件从牛β－酪蛋白基因上游６００ｂｐ至第１个外显子设计引物，引物长度１９ｎｔ，跨度６３７ｂｐ。扩增产物电泳结果显示，在分子量Ｍａｒｋｅｒ６５７ｂｐ带附近，出现一明显亮带，这一结果与设计产物大小基本一致。用低温冷冻法纯化ＰＣＲ产物，煮沸裂解法提取载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＫｓ＋质粒，ＥｃｏＲＶ酶切质粒ＤＮＡ，Ｔ４ＤＮＡ连接酶连接ＰＣＲ扩增片段和质粒ＤＮＡ。将重组质粒ＤＮＡ转化到ＪＭ１０１大肠杆菌中，经筛选、酶切、测序鉴定，结果表明所克隆的片段为牛β－酪蛋白基因上游调控序列。; 刘松财张玉静欧阳红生张永亮刘万臣黎诚耀赵建军金扩世汪玉松; 关键词：Β-酪蛋白 PCR 克隆

鸡减蛋综合征病毒分离株AA－2基因组Hind　Ⅲ酶切部分片段的分子克隆被引量：12: 1996年; 以非免疫鸭胚增殖的减蛋综合征病毒（ＥＤＳＶ），经差速离心法纯化，电镜下观察到病毒无囊膜，大小为７０～８５ｎｍ。以蛋白酶Ｋ法抽提病毒基因组，琼脂糖凝胶电泳只出现１条分子量约３４ｋｂ、背景清晰的核酸带。ＨｉｎｄⅢ酶切ＥＤＳＶＤＮＡ可见１０条片段，以ｐＵＣ１９质粒为载体，采用鸟枪法对病毒基因组的ＨｉｎｄⅢ酶切片段进行分子克隆，获得１７个重组质粒，通过酶切、斑点杂交鉴定，证实已经成功地克隆到ＥＤＳＶ的５．２４ｋｂ、２．０２ｋｂ、１．６５ｋｂ、１．４７ｋｂ、１．４１ｋｂ等５个ＤＮＡ片段。; 胡敬东章金钢陶全福李红卫扈荣良金扩世涂长春殷震; 关键词：EDSV 克隆斑点杂交

猪瘟兔化弱毒E2基因序列测定与分析: 1997年; 采用微量法(100μl)从牛睾丸细胞培养液中提取猪瘟兔化弱毒(HCLV)RNA,成功地用于RT-PCR扩增。采用Taq Track Sequence System试剂盒方法,用Bio-Rad Model 300 Xi DNA测序仪直接用PCR产物进行序列测定。经过反复多次的序列测定,HCLV E2基因的全部序列已被证实。该序列已被国际基因库(GeneBank)收录,编号为U72048。将测定的HCLV囊膜糖蛋白E2基因序列输入计算机,采用DNAsis软件与日本的GPE株、ALD株和欧洲的Brescia株。; 金扩世李红卫王新平王新平殷震; 关键词：E2基因序列测定与分析猪瘟兔化弱毒猪瘟病毒防御措施

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