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郭淑芳: 作品数：24 被引量：48H指数：4; 供职机构：武汉大学基础医学院病毒学国家重点实验室更多>>; 发文基金：国家自然科学基金湖北省教育厅科学技术研究项目国家重点基础研究发展计划更多>>; 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>

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一种从血清标本中快速提取HBV DNA方法的建立被引量：15: 2005年; 目的:建立一种快速提取血清标本中HBVDNA的方法,即裂解液煮沸法。方法:以碱裂解法和经典的苯酚法为对照,比较3种方法提取的HBVDNA纯度和半巢式PCR后的阳性率。结果:用裂解液煮沸法提取的HBVDNA进行半巢式PCR的阳性率最高,与两种对照方法之间的差异有极显著意义(P<0.01)。结论:裂解液煮沸法是一种快速、简单、高效的提取血清中HBVDNA的方法。; 郭龙华董长垣高婧郭淑芳陈晓刘文惠; 关键词：乙型肝炎病毒 DNA提取半巢式PCR

同时携带人血管内皮生长因子和血管生成素基因的内皮祖细胞血管再生研究: 2007年; 目的用腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）载体将人血管内皮生长因子165 （vascular endothelial growth factors,VEGF165）和血管生成素-1（angiopoietin-1,Angl）基因同时转入骨髓源性内皮祖细胞（endothelial progenitor cells,EPCs）中,观察外源基因的表达并评价其促血管再生的能力。方法用同时携带人VEGF165和Angl基因的AAV载体AAV2-hAngl/VEGF165转染体外培养的兔骨髓源EPCs,用RT-PCR和细胞免疫化学法检测外源基因的表达。实验用新西兰大白兔24只,制作成右下肢缺血模型,随机分成3组：PBS、EPC和EPC/AV组。造模后第10天,向缺血肌组织中分别注射PBS、EPCs和AAV2-hAngl/VEGF165转染的EPCs,用免疫组织化学法评价其血管再生效应。结果EPCs可高效地被AAV2-hAngl/VEGF165转染而表达Angl和VEGF165。细胞移植4周后,EPC/AV组存活的EPCs密度（283±137）/mm^-2明显高于EPC组（191±88）/mm^-2;EPC/AV组的毛细血管密度（856±212）/mm^-2明显高于EPC组（564±177/mm^-2）和PBS组（308±112）/mm^-2;α-SMA阳性血管密度（6.9±3.0）/mm^-2明显高于PBS组（3.6±1.8）/mm^-2,P〈0.05。结论AAV载体可同时将人VEGF165和Angl基因转入EPCs中,转染后的EPCs具有更强的促血管再生能力。; 陈锋谭最董长垣谢友利吴云陈晓郭淑芳; 关键词：血管内皮生长因子类血管生成素1 腺相关病毒内皮祖细胞

腺相关病毒介导的血管内皮生长因子基因与内皮祖细胞联合治疗肢体缺血被引量：3: 2007年; 目的探讨腺相关病毒（AAV）介导的人血管内皮生长因子165（hVEGF165）基因转染的兔骨髓内皮祖细胞（EPCs）自体移植对于移植细胞存活率和缺血肢体血管再生的影响。方法构建、制备携带hVEGF165基因或β-半乳糖苷酶（β-gal）基因的AAV载体AAV-hVEGF165和AAV-LacZ；用AAV-hVEGF165和AAV-LacZ分别转染体外培养的EPCs，得到AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC，用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术检测外源基因的表达。分别用AAV／VEGF-EPC、AAV／LacZ-EPC和PBS自体移植于兔右下肢缺血的肌组织，28d后行双侧肢体血流和免疫组织化学检测。结果AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC内可检测到外源基因的表达。AAV／VEGF-EPC、AAV／LacZ-EPC和PBS组患／健侧血流比值、毛细血管密度分别为0．73±0．21、0.64±0．13、0．45±0．10；（962±291）、（557±132）、（361±69）／mm^2。AAV／VEGF-EPC和AAV／LacZ-EPC组移植成活的EPCs密度分别为（330±81）／mm^2和（204±55）／mm^2。结论AAV能够高效将外源基因转入EPCs，对其进行基因修饰。自体移植从V-hVEGF165酤转染的EPCs可提高其移植存活率和增强其促进缺血肢体血管再生能力。; 陈锋谭最董长垣陈晓郭淑芳; 关键词：腺相关病毒内皮细胞血管内皮生长因子缺血

人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC_3株超微结构的动态观察: 2006年; 目的探讨蓝舌病毒靶向抗肿瘤的细胞生物学机制。方法利用透射电镜观察蓝舌病毒HbC3株感染人肝癌细胞Hety-3B的形态发生学以及该病毒引起的细胞的病理改变。结果 BTV-HbC3以受体介导的胞饮作用穿入细胞，溶酶体水解病毒外衣壳，使之成为亚病毒粒子，胞浆内有病毒包涵体及未装配成熟的亚病毒颗粒。随后亚病毒颗粒装配上外层蛋白结构，形成成熟的病毒粒子。病毒感染细胞12～18h时，细胞以挤出的方式释放病毒并达到高峰。18-48h时，病毒进入超感染期，大量细胞发生病变，出现细胞凋亡和溶解。结论一旦蓝舌病毒感染Hep-3B肿瘤细胞即可在细胞内增殖并诱导该肿瘤细胞进入凋亡，死亡的肿瘤细胞释放出的病毒粒子并再次感染其他肿瘤细胞，直至将全部肿瘤细胞杀灭，其溶瘤方式为链式反应。; 汪艳雷森林郭淑芳易有荣董长垣

乙型肝炎病毒X基因真核表达的载体构建及鉴定: 2007年; 目的:构建HBV X基因与pCDNA3.1相融合的高效真核表达载体,为进一步研究HBV X基因的功能奠定基础。方法:设计并合成HBV X基因的引物,以HBV DNA阳性血清PCR扩增得到HBV X基因全序列;将X基因连接到真核表达载体pCDNA3.1上后,酶切图谱分析、PCR检测和扩增产物序列分析等,鉴定所构建的真核表达载体。结果:以重组载体为模板扩增得到的片段大小与已知HBV X基因大小相同,酶切也得到目的基因片段,测序结果也显示与已知X基因序列相同。结论:成功构建了HBV X基因的真核表达载体,为进一步研究HBVX基因及其产物的功能奠定了基础。; 朱珺刘军董长垣郭淑芳陈杰; 关键词：乙型肝炎病毒 X基因真核表达载体 PCDNA3.1

RT-PCR检测蓝舌病毒技术的建立被引量：3: 2001年; Using primers complementary to the conserved sequence previously published of BTV genomic dsRNA segment 7,a part of the 5′end of segment 7 was synthesized and amplified by RT PCR method.We adapted this method to test on 12 blood samples suspected to be with BTV and the blood sample of a health sheep as a negative control.The results suggested that eleven of the twelve samples were positive,one was negative.In order to compare the sensitivity and reliability of RT PCR technique,Vero cells were used to isolate BTV from these suspected samples and the results will be a control.The study proved that RT PCR is a rapid,sensitive and precise method for detection and identification of bluetongue virus in clinical samples,animal quarantine and scientific research.; 张芃玮董长垣涂攀郭淑芳陈晓严银芳; 关键词：蓝舌病毒 DSRNA RT-PCR 病毒核酸检测

一种新的高纯度蓝舌病毒中国湖北株制备方法被引量：1: 2004年; 目的 :获得高纯度蓝舌病毒HbC株 ,为制备生产和实验室研究奠定基础。方法 :利用反向免疫共沉淀方法获取纯化的蓝舌病毒颗粒 ;运用透射电镜和凝胶过滤层析检测纯化产物病毒的结构完整性和纯度 ;组织培养技术检测产物的生物学活性并计算纯化得率。结果 :纯化后的病毒经凝胶过滤层析分析仅见一个层析峰 ;所对应的电镜照片背景干净 ,未见明显杂质 ;纯化后的病毒对Vero细胞的TCID50 是 1 0 -5.7·ml-1 ;纯化得率为 5 0 .4 %～70 .8%。结论 :这种新方法能制备出高纯度、高活性的蓝舌病毒 ,且得率较高 ,易于放大生产。; 卢莉莉董长垣郭淑芳罗翔张蔚英刘文培; 关键词：凝胶过滤层析

虎杖大黄素对豚鼠皮肤Ⅰ型人疱疹病毒感染的治疗作用被引量：10: 2003年; 目的 :观察虎杖大黄素在活体中抗Ⅰ型人疱疹病毒作用。方法 :以阿昔洛韦 (ACV )为阳性对照 ,以含 1.0ml/LTween 80的PBS及PBS为阴性对照 ,用HSV 1HS 1株感染豚鼠皮肤复制动物模型 ,观察虎杖大黄素抗Ⅰ型人疱疹病毒的药效。结果 :ACV及虎杖大黄素处理皮区的累积计分依次为 (14 .2 0± 6 .70 )分 ,(7.0 0± 6 .16 )分 ;ACV及虎杖大黄素处理皮区的痊愈时间分别为 (7.2 0± 1.0 8)d ,(6 .30± 1.4 0 )d ,与PBS及含 1.0ml/LTween 80的PBS处理皮区有明显的差异 ,且与皮肤样本的病毒滴度检测结果相一致。结论 :虎杖大黄素比ACV治疗豚鼠皮肤Ⅰ型人疱疹病毒感染的效果好。; 王志洁黄铁牛郭淑芳王瑞华; 关键词：皮肤

腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子体外转染兔骨髓内皮祖细胞被引量：1: 2007年; 目的:探讨腺相关病毒-2(AAV-2)介导人血管内皮生长因子-165(hVEGF165)转染兔骨髓内皮祖细胞(EPCs)及其对EPCs增殖能力的影响。方法:构建携带hVEGF165基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体pAAV-hVEGF165;制备携带hVEGF165基因的rAAV(rAAV-2-hVEGF165)和携带β-半乳糖苷酶(-βgal)基因的rAAV(rAAV-2-LacZ);体外培养和鉴定兔骨髓EPCs;分别用rAAV-2-hVEGF165和rAAV-2-LacZ体外转染EPCs(AAV/VEGF-EPC和AAV/LacZ-EPC);用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术等法检测hVEGF165和-βgal的表达,MTT法检测AAV/VEGF-EPC的增殖能力。结果:经酶切鉴定和DNA测序,得到了序列正确的重组质粒pAAV-hVEGF165;AAV/VEGF-EPC能够表达hVEGF165蛋白,AAV/LacZ-EPC能够表达-βgal;rAAV-2-hVEGF165对于EPCs的转染率为64.4%;AAV/VEGF-EPC的增殖能力明显强于AAV/LacZ-EPC和EPCs。结论:EPCs可以被rAAV-2-hVEGF165高效转染,其增殖能力明显增强。本文为进一步探讨AAV/VEGF-EPC用于缺血性血管疾病治疗的可能性奠定了基础。; 陈锋谭最董长垣陈晓郭淑芳; 关键词：腺相关病毒内皮祖细胞血管内皮生长因子 Β-半乳糖苷酶

小鼠HSV-2阴道炎粘膜上皮细胞凋亡和NF-κB异常表达的关系: 2004年; 目的探讨HSV 2在体内诱导细胞凋亡的效果、形态学特点、NF κB蛋白的表达和TNF的促进凋亡作用。方法用HSV 2 333株感染小鼠阴道 ,光镜下进行原位观察 ,TUNEL末端标记染色显示凋亡的细胞 ,免疫组化技术检查NF κB蛋白的表达。结果感染后的第 1天粘膜上皮内即出现大量的凋亡细胞 ,第 3- 6天凋亡细胞的数量及上皮内的分布范围达最高水平。凋亡细胞被TUNEL标记染成棕褐色 ,经免疫组化技术证实凋亡细胞有NF -κB蛋白的表达。结论HSV 2 333株阴道感染可同时诱导细胞坏死及凋亡 ,NF κB蛋白的表达参与了细胞凋亡的发生 ,TNF可以促进HSV 2在体内诱导的细胞凋亡。细胞凋亡可能在限制病毒产生子代及限制感染区域扩展中起重要作用。; 唐省三董长垣王立华陈晓郭淑芳陈保平苏越刘红云; 关键词：HSV-2 NF-ΚB 细胞凋亡小鼠形态学特点上皮

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