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环介导等温扩增(LAMP)技术鉴定简单异尖线虫: 简单异尖线虫ITS保守区域的基因序列设计特异性引物进行环介导等温扩增(LAMP).对反应体系、反应温度、反应时间等进行优化，用简单异尖线虫ITS序列重组质粒进行灵敏性和特异性试验，并用简单异尖线虫样品进行验证.LAMP的...; 陈信忠郑洋妹龚艳清; 文献传递

SYBR GreenⅠ荧光定量PCR鉴定简单异尖线虫: 根据简单异尖线虫的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)基因序列设计了一对引物,用以扩增简单异尖线虫114bp基因片段,以此构建重组质粒(AS-ITS-pGM)。用该质粒为模板建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测简单...; 龚艳清郑洋妹陈信忠; 关键词：荧光定量PCR 简单异尖线虫; 文献传递

简单异尖线虫环介导等温扩增（LAMP）鉴定方法的建立和应用被引量：9: 2010年; 目的建立快速鉴定简单异尖线虫的环介导等温扩增方法（LAMP）. 方法根据简单异尖线虫ITS保守区域的基因序列设计特异性引物进行LAMP扩增,对反应体系中dNTPs、Mg^2＋、Betaine和2对引物的浓度,以及反应温度、反应时间等进行优化;在优化后的体系下,将10倍比稀释的简单异尖线虫ITS序列重组质粒进行灵敏性试验;用典型异尖线虫、对盲囊线虫、针蛔线虫对该方法进行特异性试验;并用7份简单异尖线虫样品进行验证. 结果 LAMP的最佳反应体系为0.8 mmoL/L dNTPs、10 mmol/L Mg^2＋、0.8 mmoL/L Betaine、0.2μmol/L外引物、1.6μmoL/L内引物、8 U Bst DNA聚合酶大片段以及适量的模板,反应温度为62℃,反应时间为60 min;检测简单异尖线虫的灵敏度达到10拷贝/μl,且对典型异尖线虫、对盲囊线虫、针蛔线虫无交叉反应;7份简单异尖线虫样品经LAMP验证均为阳性.结论 LAMP方法灵敏性高、特异性强,并且操作简便、成本低,是鉴定简单异尖线虫的有效手段.; 郑洋妹陈信忠龚艳清杨俊萍; 关键词：简单异尖线虫环介导等温扩增技术

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR鉴定简单异尖线虫方法的建立被引量：1: 2010年; 根据GenBank发表的简单异尖线虫保守的ITS-2基因序列设计一对引物,用以扩增简单异尖线虫114 bp基因片段。用简单异尖线虫的重组质粒(AS-ITS-pGM)为模板建立SYBR Green I荧光定量PCR检测简单异尖线虫的方法,并用该方法对经PCR-RFLP鉴定为简单异尖线虫的样品进行鉴定。结果表明,本研究建立的简单异尖线虫SYBR Green I荧光定量PCR方法特异性强、敏感性高,稳定性好,可用于简单异尖线虫的鉴定。; 龚艳清郑洋妹陈信忠; 关键词：荧光定量PCR 简单异尖线虫

环介导等温扩增技术检测动物病原研究进展被引量：5: 2009年; 综述了环介导等温扩增技术检测病毒、细菌和寄生虫等动物病原方面的研究和应用最新进展。; 郑洋妹陈信忠; 关键词：环介导等温扩增技术病原

海鱼异尖线虫分子检测和鉴定技术的研究: 异尖线虫是世界各大海域鱼类普遍寄生的寄生虫。人误食寄生在海鱼体内的异尖线虫科某些种的活的Ⅲ期幼虫可引起异尖线虫病/(Anisakiasis/)。到目前为止已报道可引起人异尖线虫病的主要有6种异尖线虫,即简单异尖线虫/(A...; 郑洋妹; 关键词：PCR-RFLP 环介导等温扩增实时荧光定量PCR; 文献传递

利用PCR-RFLP技术鉴别异尖线虫被引量：3: 2010年; 应用PCR-RFLP技术对福建沿海海鱼中常见的简单异尖线虫、典型异尖线虫、对盲囊线虫和针蛔线虫幼虫进行鉴定.采用通用引物扩增上述4种异尖线虫幼虫的核糖体DNA内转录间隔区(ITS)序列,对PCR产物进行回收、克隆和测序.根据序列分析结果,选用限制性内切酶HinfⅠ和RsaⅠ进行酶切,酶切产物经琼脂糖电泳分析.结果表明:同时使用HinfⅠ和RsaⅠ酶,可以将4种异尖线虫进行分类;应用特异性引物扩增这4种异尖线虫,获得了预期扩增片段.可见,根据4种线虫ITS序列建立的PCR-RFLP技术能够对这4种异尖线虫进行准确、特异和快速的鉴定.; 郑洋妹龚艳清陈信忠; 关键词：PCR-RFLP 简单异尖线虫

用PCR和PCR-RFLP方法检测和鉴定进口海鱼中的异尖线虫幼虫被引量：3: 2010年; 应用PCR和PCR-RFLP方法对厦门口岸进口的各种海鱼中的异尖线虫幼虫进行检测鉴定。结果在带鱼、竹荚鱼、金线鱼、大眼鲷和白姑鱼等海鱼中发现了简单异尖线虫、典型异尖线虫、对盲囊线虫和针回线虫等4种异尖线虫。带鱼和竹荚鱼的异尖线虫感染率达100%,竹荚鱼异尖线虫感染强度最高,白姑鱼感染率和感染强度相对较低。少数海鱼同时感染2种以上异尖线虫,从带鱼中同时检出简单异尖线虫和针蛔线虫,从竹荚鱼中检出简单异尖线虫、对盲囊线虫和典型异尖线虫。内切酶实验结果表明,应用限制性内切酶HinfI有效鉴别上述4种异尖线虫。; 龚艳清郑洋妹陈信忠; 关键词：PCR PCR-RFLP

南美白对虾亲虾暴发性传染病病原调查被引量：1: 2009年; 对福建、广东沿海对虾育苗场的南美白对虾亲虾暴发性传染病进行病原学研究,结果表明大部分亲虾感染了白斑综合症病毒,还有一些亲虾同时感染桃拉综合症病毒。发病对虾体色发红,部分对虾体表可见大小不一的白色斑点。对这些病毒的PCR扩增产物进行测序,并进行同源性比较,结果表明导致本次对虾传染病的WSSV基因片段与基因库已报告的WSSV具有很高的同源性。结合流行病学特点,可确定这些亲虾主要因感染了WSSV和TSV而发病死亡。; 龚艳清郑洋妹苏亚玲陈信忠; 关键词：南美白对虾对虾白斑综合症病毒

环介导等温扩增(LAMP)技术鉴定简单异尖线虫: 根据简单异尖线虫ITS保守区域的基因序列设计特异性引物进行环介导等温扩增(LAMP)。对反应体系、反应温度、反应时间等进行优化,用简单异尖线虫ITS序列重组质粒进行灵敏性和特异性试验,并用简单异尖线虫样品进行验证。LAM...; 陈信忠郑洋妹龚艳清; 关键词：简单异尖线虫环介导等温扩增技术; 文献传递

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