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邵珠卿: 作品数：14 被引量：22H指数：3; 供职机构：南京大学生命科学学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>

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猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4: 2009年; 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。; 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪; 关键词：猪链球菌2型克隆

组氨酸三聚体蛋白在2型猪链球菌的定位被引量：3: 2009年; 目的研究组氨酸三聚体蛋白(histidine triad protein,Htp)在2型猪链球菌(Streptococcus suis 2,S.suis 2)05ZYH33中的定位,以及sortase A(srtA)基因缺失对该蛋白表达的影响。方法通过生物软件分析Htp氨基酸序列的分子特征;以纯化的Htp重组蛋白为免疫原,免疫新西兰兔,获得兔抗Htp抗血清;利用western blotting和ELISA检测该抗体的特异性和效价;以抗Htp抗体为工具通过流式细胞术验证Htp在菌体表面的定位,并比较05ZYH33和srtA基因敲除突变株△srtA菌体表面Htp的表达量。结果生物软件预测发现Htp存在信号肽和跨膜序列,具备表面蛋白的特征;流式细胞分析发现Htp定位于S.suis 2表面;△srtA菌体表面Htp的量明显少于野生型菌株。结论本研究明确了Htp在S.suis 2菌体表面的定位并发现srtA基因敲除后细菌表面的Htp有所减少,为进一步研究Htp在猪链球菌致病过程中发挥的功能及其调控机制奠定了基础。; 邵珠卿潘秀珍韩明月李先富秦跃红王长军唐家琪; 关键词：流式细胞术 SORTASE

2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析被引量：7: 2010年; 目的克隆2型猪链球菌高亲和力锌吸收蛋白(High-affinity zinc uptake system protein,ZnuA)编码基因并进行原核表达,研究ZnuA蛋白的免疫学活性。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因znuA,构建重组表达质粒pET32a::znuA,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;Western blot检测ZnuA蛋白的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA检测多抗血清效价。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;Western blot结果表明ZnuA蛋白具有良好的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清。结论在原核系统中成功地表达了znuA基因编码的蛋白,且ZnuA重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究znuA基因在猪链球菌致病过程中的作用以及猪链球菌疫苗的开发奠定了基础。; 韩明月潘秀珍邵珠卿李先富刘文静郑峰王长军唐家琪; 关键词：猪链球菌

链球菌超抗原生物学特性研究进展被引量：5: 2009年; 链球菌超抗原在多种链球菌感染导致的疾病中发挥着重要作用。随着研究的深入,对链球菌的认识也取得了新的突破。文中对当前研究证实的链球菌超抗原成员及其结构特征、致病机制、表达调控进行了综述,并展望其在肿瘤治疗中的意义。; 邵珠卿潘秀珍唐家琪; 关键词：链球菌超抗原肿瘤治疗

2型猪链球菌层粘连蛋白结合蛋白的原核表达及免疫原性检测被引量：2: 2011年; 目的表达2型猪链球菌(Streptococcus suis2,S.suis2)层粘连蛋白结合蛋白(Lmb)并检测其免疫原性。方法 PCR检测lmb基因在不同血清型S.suis中的分布。将S.suis2中国强毒株05ZYH33的lmb基因克隆至表达载体pET32a,转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导表达,His亲和层析柱纯化重组蛋白。Western blot检测Lmb的免疫原性。结果 lmb基因存在于大多数S.suis血清型中。诱导表达并纯化后获得较高纯度的重组蛋白。重组Lmb能够和感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。结论 lmb基因在S.suis不同血清型中广泛分布,Lmb在细菌感染宿主过程中表达,可以作为疫苗开发的候选分子。; 潘秀珍邵珠卿李先富刘文静王长军唐家祺; 关键词：2型猪链球菌

2型猪链球菌lmb-htp操纵子的鉴定及其编码蛋白作为疫苗候选分子的研究: 猪链球菌(Streptococcus suis,简称S.suis)是一种重要的人兽共患病病原菌。2型猪链球菌(S.suis2)是35个血清型中临床分离率最高和致病性最强的血清型,近年来在全世界范围内多个国家流行,给全世界...; 邵珠卿; 关键词：2型猪链球菌编码蛋白; 文献传递

基于慕课应用的导师制生物化学实验教学实践被引量：1: 2020年; "以学生为中心、能力培养为目标"的研究型实验课程建设是高等院校本科实验教学改革的趋势。顺应学科发展和高等教育现代化进程的推进,南京大学生物化学实验以巩固基础理论、训练实验技能、培养学生发现和解决问题能力为目标,在教学内容更新和教学思想改革进行尝试和探索。我们充分利用生物化学实验慕课和导师制实施教学,将基础实验自主学习和创新性综合实验的自由探索相结合,实现了教学内容升级、教学质量提升和学生能力培养的三者统一。为实验类课程"研究型教学"进行了有益的探索和尝试。并以此为基础,规划设计了更高要求的实验课程教学内容,以期将实验课程建设成拓展视角、训练思维、培养能力的最佳平台。; 张冬梅李俊卢彦吴兴新邵珠卿张小辉; 关键词：生物化学实验导师制研究型教学

2型猪链球菌AdcR蛋白的原核表达被引量：2: 2015年; 目的表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)调控因子AdcR蛋白,为研究其在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白的作用机制奠定基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找出编码AdcR的基因。以AdcR基因序列为基础,利用Primer5.0设计引物,采用PCR扩增AdcR基因,经BamHⅠ和HindIII双酶切后将目的片段通过T4DNA连接酶连接至表达载体pET32a,转化大肠埃希菌E.coli BL21,加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L,37℃诱导4h表达AdcR蛋白,然后利用His亲和层析柱纯化AdcR蛋白。结果通过Blast分析,从2型猪链球菌05ZYH33全基因组序列中找到编码AdcR的编码基因05SSU0109。以合成的特异引物PCR扩增出469bp的AdcR片段,连接原核表达载体pET32a后转化E.coli,经IPTG 37℃诱导4h,成功表达出AdcR蛋白,其分子质量单位为40ku,与理论值相符。经His-Tag亲和层析纯化,获得较高纯度的重组AdcR蛋白。结论在大肠埃希菌中成功表达了可溶性的AdcR重组蛋白,为AdcR在2型猪链球菌中调控组氨酸三聚体家族蛋白作用机制研究奠定了基础。; 王玲倪华邵珠卿侯田青过雨晴杜世仁胡丹王长军潘秀珍; 关键词：2型猪链球菌克隆

2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2: 2009年; 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。; 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪; 关键词：猪链球菌克隆

2型猪链球菌组氨酸三聚体蛋白家族05SSU1267的克隆、表达及免疫保护作用研究被引量：2: 2012年; 目的对2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)05ZYH33组氨酸三聚体蛋白家族(Histidine triadprotein,Htp)成员编码基因05SSU1267进行克隆、表达,并研究其免疫保护作用。方法根据05ZYH33基因组编码的05SSU1267基因序列设计引物,PCR扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET32a,并转化E.coli BL21(DE3)。通过IPTG诱导表达、His-Tag亲和层析柱纯化获得重组蛋白,并将纯化后的蛋白用于Western blot分析。以纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备兔多抗血清,并通过ELISA检测多抗血清的效价。重组蛋白免疫Balb/c小鼠,研究其免疫保护作用。结果 Western blot显示重组蛋白可以与兔抗05ZYH33全菌血清反应,显示该蛋白具有较好的免疫反应原性;ELISA结果显示重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清;动物保护实验表明该蛋白具有一定的免疫保护作用。结论在原核系统成功表达了05ZYH33 Htp蛋白05SSU1267,动物实验结果表明其能够在Balb/c小鼠中发挥一定的免疫保护作用,研究结果为Htp蛋白作为2型猪链球菌疫苗候选分子以及进一步了解该蛋白家族的生物学功能奠定基础。; 侯田青郭静静邵珠卿李先富王长军潘秀珍; 关键词：2型猪链球菌原核表达免疫保护

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