谢熙
- 作品数：23 被引量：50H指数：5
- 供职机构：宁波大学海洋学院更多>>
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- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 三疣梭子蟹蜕皮周期中MIH基因mRNA水平与蜕皮激素浓度变化被引量：22
- 2013年
- 甲壳动物的蜕皮过程被认为是由位于眼柄的X器-窦腺复合体(XO-SG)分泌蜕皮抑制激素(MIH)通过调节Y器(YO)合成蜕皮激素而调控的。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)发现MIH基因在三疣梭子蟹眼柄X器-窦腺复合体中表达最强。采用qRT-PCR分析了MIH基因在三疣梭子蟹蜕皮周期中的表达变化,结果表明;A期为(0.42±0.08)倍,B期为(1.09±0.09)倍,C期为(1.35±0.16)倍,D0亚期为(1.00±0.10)倍,D1亚期(0.78±0.07)倍,D2亚期为(0.27±0.08)倍,D3/4亚期为(0.20±0.04)倍。采用高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-MS/MS)法完成了三疣梭子蟹蜕皮周期中蜕皮激素(20E)浓度变化的测定。A/B期蜕皮激素的浓度较低,低于仪器检测限0.33 pg,C期为(1.666±0.762)ng/mL,D0亚期为(4.047±1.5133)ng/mL,D1亚期为(6.756±4.928)ng/mL,D2亚期为(8.609±3.827)ng/mL,D3亚期为(19.534±4.799)ng/mL,D4亚期为11.616 ng/mL。在三疣梭子蟹蜕皮周期中,MIH基因表达量与血淋巴中蜕皮激素浓度呈现一定拮抗性,揭示MIH抑制Y器合成蜕皮激素而调控着三疣梭子蟹蜕皮的发生和进行。
- 汪春建朱冬发亓一舟胡则辉谢熙沈洁
- 关键词：三疣梭子蟹蜕皮抑制激素
- 三疣梭子蟹fps克隆及其在卵巢发育中的表达分析被引量：3
- 2016年
- 法尼基焦磷酸合成酶(FPS)是类异戊二烯生物合成途径中的关键酶,参与甲壳动物甲基法尼酯(MF)等萜类激素的合成。为研究FPS在甲壳动物卵巢发育中的调控作用,采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增技术(RACE技术)克隆得到了三疣梭子蟹fps(Ptfps)的序列全长(Gen Bank登录号:KM013803)。结果显示:Ptfps cDNA全长为2 360 bp,开放阅读框长1 290 bp,编码429个氨基酸。生物信息学分析发现PtFPS具有7个异戊烯基转移酶的保守结构域,与已公布的内华达古白蚁FPS同源性最高(达到58%)。实时荧光定量PCR分析结果显示:fps主要在大颚器(MO)中表达,远高于其它组织的表达水平(P<0.01);在第1次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅳ期显著升高(P<0.05),之后略有下降;在第2次卵巢发育过程中,fps的表达水平在Ⅲ期显著升高(P<0.05),并在IV期达到最大。以上结果表明fps可能参与三疣梭子蟹卵巢发育的调控。
- 朱韬朱冬发邱锡尔周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹克隆卵巢发育
- 三疣梭子蟹甲基法尼酯合成及在卵巢发育和蜕皮中的作用
- 萜类激素甲基法尼酯（MF）是昆虫保幼激素III（JH III）的非环氧化形式，其参与调控甲壳动物的生长、蜕皮、生殖及渗透压调节等多种生理过程，被一致认为是甲壳动物中JH的对等物。MF的生理功能及作用机理一直是甲壳动物内分...
- 谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹卵巢发育基因表达
- 文献传递
- 三疣梭子蟹FAMeT基因克隆及其在蜕皮周期中的表达水平被引量：12
- 2013年
- 为了研究法尼酸甲基转移酶(FAMeT)在甲壳动物蜕皮调控中的作用,采用反转录PCR(RT-PCR)和cDNA末端快速扩增技术(RACE)克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列(GenBank登录号:KC192659),它包括一个201 bp的5'非编码区、一个318 bp的3'非编码区和一个825 bp的开放阅读框(ORF),编码274个氨基酸;推导的氨基酸序列与已公布的其他甲壳动物FAMeT进行比对,发现一致性达75%～97%,其中与远海梭子蟹FAMeT的一致性最高;而且该氨基酸序列由两个CF(CPAMD8/FAMeT)区域组成,这两个CF区域是FAMeT的标志,在所有甲壳动物的FAMeT里均有发现,因此推导的氨基酸序列是三疣梭子蟹FAMeT基因。运用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的方法分析了其在不同组织中、不同蜕皮周期中的表达量变化,发现FAMeT在三疣梭子蟹的各个组织里均有表达,且在胸神经节里表达最强;在三疣梭子蟹蜕皮过程中,大颚器中FAMeT在D1期表达最强,然后逐渐下降至D4最低。该结果表明FAMeT在三疣梭子蟹蜕皮调控中起着重要的作用。
- 谢熙朱冬发崔晓雨汤洁邱锡尔
- 关键词：三疣梭子蟹克隆
- 三疣梭子蟹类保幼激素羧酸酯酶在甲基法尼酯降解过程中的作用探究
- 羧酸酯酶(Carboxylesterase,CXE)是一种广泛存在于动植物及微生物中的多功能酶类,其在代谢、神经发生及发育调控等过程中扮演了重要的角色.根据其不同的生理生化作用,昆虫羧酸酯酶一般被分为三类：(1)消化及解...
- 陶甜刘明鑫谢熙邵娟姜青华朱冬发
- 关键词：三疣梭子蟹羧酸酯酶基因克隆
- 三疣梭子蟹蜕皮激素及甲基法尼酯生物合成通路基因的分子克隆和表达分析
- 甲壳动物的生长发育过程受到Y器(YO)合成分泌的蜕皮激素(Ec)和大颚器(MO)合成分泌的甲基法尼酯(MF)等内分泌因子的密切调控.甲壳动物Ec主要由Halloween基因编码的酶类催化合成，本研究克隆获得了Spo、Di...
- 谢熙姜青华陶甜刘明鑫邵娟朱冬发
- 关键词：三疣梭子蟹蜕皮激素生物合成RNA干扰
- 三疣梭子蟹IAG基因的原核表达及质谱鉴定被引量：1
- 2021年
- 基于已知的三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)胰岛素样促雄腺激素(IAG)序列,对其ORF区域进行扩增,并连接至pET-22b、pET-28a和pET-28a-sumo等不同的原核表达载体中,随后分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)与Rosetta(DE3)。通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达带有His标签的IAG重组融合蛋白,发现仅pET-28a-sumo-IAG有可见表达,且转化至Rosetta(DE3)菌株的IAG重组蛋白表达量较高。进一步对Rosetta-pET-28a-sumo-IAG的表达条件进行优化,发现IPTG终浓度为0.6 mmol/L,16℃诱导16 h后重组蛋白表达量最大。制备的融合蛋白主要以可溶性形式高效表达,通过HisTrap HP柱进行纯化后,经Western Blot分析发现该融合蛋白可与鼠抗His-tag多克隆抗体发生特异性结合。将制备的蛋白进行质谱分析,得到的2条肽段能够分别与三疣梭子蟹的B链和A链相匹配,表明重组融合蛋白表达成功。
- 脱萍谢熙喻国洪朱冬发
- 关键词：三疣梭子蟹原核表达质谱鉴定
- 甲壳动物RNAi技术研究与应用进展被引量：3
- 2015年
- RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指由双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)诱发的一种使特定基因沉默的现象。作为一种研究基因功能、发现新基因和抗病毒的新型手段,近年来RNAi技术在昆虫、真菌、植物和哺乳动物等的研究中已被广泛应用,但是在甲壳动物研究中尚处于起步阶段。对甲壳动物RNAi技术实施方法做了简要介绍;着重综述了RNAi技术在甲壳动物CHH家族神经肽类基因功能、蜕皮和生长调控机制、配子及性腺发育调控和甲壳动物抗病毒机制研究上的应用进展。
- 邱锡尔朱冬发周彦琦柳志业谢熙
- 关键词：RNAI甲壳动物基因功能抗病毒
- 三疣梭子蟹卵巢发育过程中FAMeT和MIH基因表达变化
- 为了研究法尼酸甲基转移酶（FAMeT）和蜕皮抑制激素（MIH）在甲壳动物卵巢发育中的作用，本文首先采用反转录PCR（RT-PCR）和cDNA末端快速扩增技术（RACE）克隆得到了三疣梭子蟹FAMeT的全长cDNA序列（G...
- 谢熙
- 关键词：三疣梭子蟹卵巢发育实时荧光定量PCR
- 文献传递
- 三疣梭子蟹Met蛋白基因克隆及其在甲基法尼酯调控的卵黄蛋白原转录激活过程中的作用
- 萜类激素在节肢动物的生长发育过程中扮演了重要角色,如昆虫中的保幼激素(Juvenile hormone,JH)和甲壳动物中的甲基法尼酯(Methyl famesoate,MF)。但由于大量结合蛋白的存在,JH和MF的核受...
- 刘明鑫陶甜谢熙姜青华邵娟朱冬发
- 关键词：三疣梭子蟹卵巢发育基因克隆
