蔺涛
- 作品数：15 被引量：82H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市技术标准专项中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒野毒株持续性感染细胞模型的建立被引量：2
- 2012年
- 旨为建立高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)野毒株持续性感染细胞模型。通过将HP-PRRSV野毒株JX143感染Marc-145细胞,感染的细胞经连续传代35代,建立了稳定的PRRSV持续感染的细胞模型,获得了JX143-Marc-145-P35细胞株。应用RT-PCR、免疫荧光、空斑形态分析等技术跟踪观察了JX143-Marc145细胞株连续传代过程中病毒在细胞内的存在和生物学特性的变化。为了进一步分析病毒持续性感染过程中基因的特征性变化,通过RT-PCR扩增出JX143-Marc145-P35的全基因,并进行测序和序列分析。结果表明,在细胞模型建立的过程中,细胞病变(Cytopathic effect,CPE)的产生经历了从慢到快又到慢的过程,RT-PCR检测和免疫荧光证实JX143-Marc-145细胞中PRRSV持续稳定存在,表现出病毒持续感染的基本特征。该细胞与正常的Marc145细胞相比,细胞周期无显著差异,但JX143-Marc-145-P35的空斑形态与亲本病毒JX143相比略大。通过序列比较分析,JX143-Marc-145-P35v与亲本猪JX143的同源性为99.4%,存在38个非同义突变,其中,31个位于非结构蛋白,7个位于结构蛋白。试验成功建立了稳定的PRRSV持续性感染细胞模型,细胞周期与正常细胞无显著差异,但病毒在持续性感染过程中无论是基因还是表型都发生了变异,且在体外持续性感染建立的过程中,对于氨基酸突变的选择压力很可能施加于病毒的非结构蛋白和主要糖蛋白。该模型的建立对深入研究病毒与细胞间的相互作用,尤其是PRRSV持续性感染的机制具有重要意义。
- 王小敏李燕华蔺涛刘闰夏何孔旺童光志袁世山
- 关键词：高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞模型
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒5'非编码区前导转录调控序列及其侧翼序列的结构与功能解析被引量：2
- 2011年
- 为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)5'非翻译区(5'UTR)的高级结构与功能,以北美株PRRSV感染性克隆为平台,通过定点突变PCR技术将其5'UTR中一特殊高级调控元件的一级序列进行突变,以改变其二级茎环结构,从而解析该结构的基因调控水平。将突变DNA克隆转染入BHK-21细胞后利用免疫荧光及RT-PCR试验来研究拯救后突变病毒的转录、翻译特性,及通过空斑形态学及病毒生长曲线分析突变病毒的生长特性。结果表明,PRRSV 5'UTR中该高级调控元件的顶端环结构为病毒复制所必需,其只可耐受2个核苷酸的突变;同时发现该调控元件中一保守的茎结构为病毒复制非必需。由此证实了PRRSV 5'UTR中调控病毒复制过程的必需高级结构,为进一步解析PRRSV复制调控元件奠定基础。
- 陆嘉琦高飞刘萍蔺涛袁世山
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制基因表达调控
- 中国部分地区CSFV与PRRSV流行情况调查与PRRSV标记毒株的研究
- 2006年,我国猪群中暴发一种以高热、腹式呼吸、咳嗽、食欲不振、便秘或腹泻、眼分泌物增多等为主要症状的传染病。最初对该病的病因没有明确定论,故将之定名为“猪无名高热”或“猪高热病”。为了研究“猪高热病”中主要病毒性病原在...
- 蔺涛
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒猪瘟病毒分子流行病学活载体疫苗
- 文献传递
- 1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定被引量：20
- 2012年
- 从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。
- 邓宇孙春清张宏彪蔺涛张荣龙进学黄律曹三杰袁世山文心田郑浩
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒进化分析
- 重组杆状病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开一种重组杆状病毒，该重组杆状病毒包含：编码猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性病毒颗粒蛋白的核苷酸序列。本发明还公开了重组杆状病毒的构建方法及应用。本发明的重组杆状病毒，在昆虫细胞、以及PRRSV敏感和非敏感哺乳细胞中...
- 袁世山郑浩高飞郑海红韦祖樟龙进学刘长龙庄金山于丹丹孙志王小敏邓宇李燕华蔺涛周艳刘萍
- 猪源牛病毒性腹泻病毒SD0803株E2蛋白的表达及抗体制备被引量：1
- 2012年
- 表达去除SD0803E2基因跨膜疏水区的sE2蛋白并制备其抗体,为猪源BVDV诊断奠定基础。RT-PCR扩增SD0803株sE2基因,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-sE2,转化BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达,以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备多克隆抗体。采用间接ELISA、Western blot、间接免疫荧光等方法鉴定获得的抗体。结果显示,抗体效价最高可达1∶256 000;制备的抗体可与rsE2蛋白特异性结合;该抗体可特异性识别BVDV感染MDBK细胞表达的E2蛋白,显示抗体高度的特异性。成功构建pGEX-4T-1-sE2原核表达质粒,诱导其表达的蛋白免疫家兔,成功制备的猪源BVDV SD0803株E2抗体。
- 邓宇蔺涛孙春清张宏彪张荣龙进学黄律文心田曹三杰童光志袁世山郑浩
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白抗体制备
- 仔猪水肿病病原菌的分离鉴定被引量：1
- 2008年
- 从江苏淮安某猪场具有典型水肿病临床症状和剖检变化的发病猪组织分离的菌株中挑选5株大肠杆菌,分别命名为JS0001、JS0002、JS0003、JS0004和JS0005。通过培养特性、菌体形态、染色特性、生化鉴定及血清学试验等一系列方法对其进行系统鉴定,并对这5株细菌进行抗药性、溶血性、Vero细胞毒性和小白鼠致病性等试验。试验结果表明,JS0001、JS0002、JS0004和JS0005表现β型溶血,腹腔接种小白鼠,JS0001、JS0002、JS0003、JS0004对其具有较高致病性;5株细菌药敏特性基本一致:对痢特灵(FR)、头孢噻肟(CTX)、阿米卡星(AN)敏感,对头孢曲松(CRO)敏感性最高,而对阿莫西林(AMX)、多西环素(DO)等药物具有耐药性。JS0002J、S0004能够分泌Vero细胞毒素,确定为产类志贺毒素大肠杆菌(SLTEC)。血清学试验结果表明,JS0002J、S0004的血清型为O139,JS0001J、S0003为O141。
- 曹永国刘育华蔺涛李文良黄秦曹瑞兵
- 关键词：仔猪水肿病生化鉴定药敏特性血清型
- 猪源牛病毒性腹泻病毒套式PCR检测方法的建立被引量：11
- 2012年
- 根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。
- 邓宇蔺涛张荣丛雁方张建武袁世山文心田郑浩
- 关键词：猪源牛病毒性腹泻病毒RT-PCRNESTED-PCR
- 猪圆环病毒2型最新研究进展被引量：3
- 2010年
- 刘育华李文良蔺涛陈皓程毅俞明敏
- 关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征免疫抑制性疾病淋巴结病变间质性肺炎进行性
- 重组杆状病毒及其构建方法和应用
- 本发明公开一种重组杆状病毒，该重组杆状病毒包含：编码猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性病毒颗粒蛋白的核苷酸序列。本发明还公开了重组杆状病毒的构建方法及应用。本发明的重组杆状病毒，在昆虫细胞、以及PRRSV敏感和非敏感哺乳细胞中...
- 袁世山郑浩高飞郑海红韦祖樟龙进学刘长龙庄金山于丹丹孙志王小敏邓宇李燕华蔺涛周艳刘萍
- 文献传递
