葛俊超
- 作品数：10 被引量：24H指数：4
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌克隆
- 苏中地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查
- 猪链球菌(SS)是重要的人兽共患病病原体,作为一种兼性厌养的革兰氏阳性细菌,通常存在于猪的上呼吸道,可引起仔猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎、败血症、肺炎以及断奶仔猪的猝死,并可感染人。根据菌体荚膜多糖抗原性的不同,用协同凝...
- 鞠爱萍王长军郑峰潘秀珍董亚青葛俊超唐家琪
- 关键词：猪链球菌人兽共患病病原体分子流行病学
- 文献传递
- 江苏省中部地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查被引量：6
- 2008年
- 目的了解江苏省中部地区正常猪群猪链球菌及主要致病血清型分布。方法采集江苏省中部地区正常屠宰猪样本303份，用聚合酶链反应（PCR）法进行猪链球菌及主要致病血清型的检测，并对3株分离的猪链球菌菌株进行系统的生物学和分子遗传学鉴定。结果303份猪标本中，2005年正常猪群中猪链球菌的携带率达88．0％，其中1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为9．6％、8．5％、11．3％、29．5％；2006年正常猪群中猪链球菌的携带率为82．5％，1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为17．6％、2．4％、25．8％、20．0％；3株分离菌株均为2型，2a毒力因子表现型为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf^-／sly^-／fops^＋／orf2^＋／89k^-，2f、14e毒力因子表现型均为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf／sly^-／fbps^-／orf2^-／89k；3株分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等高度敏感，但对阿米卡星和四环素有显著的耐药性；对BALB／c小鼠和家兔无明显致病性。结论江苏省中部地区正常猪群中猪链球菌携带率处于较高水平，多种血清型同时存在，毒力因子表型与流行毒力株有显著差异。
- 鞠爱萍王长军郑峰潘秀珍董亚青葛俊超陆承平唐家琪
- 关键词：猪链球菌聚合酶链反应流行病学分子
- 信号肽与猪链球菌GDH融合的DNA疫苗构建及体液免疫研究被引量：4
- 2008年
- 目的设计、构建猪链球菌GDH真核表达载体并研究DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫。方法在猪链球菌保护性抗原GDH基因5′末端引入人IL-2信号肽序列,通过PCR进行拼接,得到的融合DNA片段经过酶切克隆入质粒pcDNA3.0,构建核酸疫苗重组质粒pcDNA3.0-gdh。通过肌肉注射途径将重组质粒pcDNA3.0-gdh免疫小鼠,经ELASA实验和Western blot进行检验。结果构建的表达载体在小鼠体内表达出正确的目的蛋白,能诱导体液免疫。结论构建的DNA疫苗能够引起体液免疫,为研究猪链球菌核酸疫苗提供分子工具。
- 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军郑峰李先富唐家琪
- 关键词：猪链球菌DNA疫苗信号肽
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 ofs N-片段基因敲除株的构建被引量：1
- 2009年
- 通过生物信息学分析2型猪链球菌(Streptococcus suisserotype 2,S.suis2)中国强毒株05ZYH33的基因组,预测并发现猪链球菌血清浑浊因子(Opacity factor ofS.suis,OFS)的编码基因ofs.为了构建ofsN-末端片段ofs37-683的基因敲除株,首先构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为ofs37-683上、下游同源序列的基因敲除质粒,并对该质粒进行PCR和酶切鉴定.根据同源重组的原理,通过电转化方法筛选得到ofs37-683基因敲除株.PCR、测序和RT-PCR分析结果均显示ofs37-683已完全被壮观霉素抗性基因替代,证实ofs37-683基因敲除株构建成功.该敲除株的获得为进一步研究ofs在猪链球菌2型致病机制中的作用奠定基础.
- 史沛举郝喜娜葛俊超王长军王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌
- gdh基因在猪链球菌中的分布及重组GDH的抗原性研究被引量：7
- 2008年
- 目的了解谷氨酸脱氢酶基因(gdh)在不同血清型猪链球菌(S.suis)中的分布情况,分析重组谷氨酸脱氢酶(GDH)的抗原性,为其应用于S.suis感染诊断和疫苗研究提供实验数据。方法应用PCR方法检测不同血清型S.suis中的gdh;利用45 kD重组GDH制备多克隆抗体,Western blot方法分析S.suis各血清型菌株与多克隆抗体的反应以及实验感染S.suis2型的猪血清与重组GDH的反应情况。结果在S.suis35个血清型标准株中,除了22、26、27、29、32及34型以外,其余包括1、2、1/2、7、9和14型在内的29个血清型、61株国内外S.suis2型分离株全部扩增出目的条带。用重组GDH免疫小鼠,在小鼠血清中均检测到抗GDH的抗体;Western blot结果显示,全部被检菌株与抗GDH血清反应均有单一特异性反应条带,6份实验感染猪血清均能与重组GDH产生反应条带。结论重组GDH具有免疫原性和反应原性,该蛋白有可能作为建立诊断试验的候选抗原,为进一步开展相关的血清学诊断方法和疫苗研究奠定基础。
- 潘秀珍赵华梅葛俊超王长军李先富郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶抗原
- 应用上转换发光技术快速检测抗2型猪链球菌抗体被引量：2
- 2008年
- 目前，国内针对猪链球菌2型（S．suis2）抗体的检测方法仅限于用ELISA进行实验室分析，而且各种免疫学检测方法均有一定的非特异性反应。因此，建立适用于现场的S．suis2抗体快速检测方法，对于流行区疫情监测预警、早期控制以及临床诊断均有重要的应用价值。
- 郑峰周蕾葛俊超魏华潘秀珍季红峰朱进杨瑞馥唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌抗体
- 猪链球菌2型中国强毒株CovR重组蛋白及其抗体的制备被引量：3
- 2009年
- 目的通过构建pET32a-covR原核表达质粒,表达并提纯CovR重组蛋白,制备其多克隆抗体。方法采用PCR法,从四川资阳病人分离株05ZYH33基因组扩增CovR的编码基因covR,构建重组表达质粒pET32a-covR,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE鉴定后,His亲和层析柱纯化CovR重组蛋白;免疫新西兰兔制备特异性抗体,Western blot检测兔多抗血清的特异性,间接ELISA检测其滴度。结果covR基因在原核细胞中得到高效表达,重组蛋白免疫新西兰兔后血清效价高达1∶204800,且重组蛋白能够与之发生特异性的反应。结论成功构建了表达载体pET32a-covR,可在E.coliBL21中高效表达,制备了特异性抗体,为进一步研究CovR的调控机理奠定了基础。
- 郝喜娜史沛举葛俊超王晶王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌原核表达
- 孤儿调控因子CovR调控高致病性2型猪链球菌毒力的实验研究
- 2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2，S.suis 2)是一种重要的人畜共患传染病原体。S.suis2感染的发病机制仍不清楚。本研究在前期完成对1998年江苏流行的强毒株98HAH12...
- 葛俊超
- 关键词：2型猪链球菌细菌毒力发病机制
- 文献传递
