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细胞抽提物诱导的体细胞重编程被引量：1: 2013年; 体细胞重编程是指在特定条件下将已分化的体细胞去分化逆转回原始多能状态或转分化为其他类型细胞。目前诱导体细胞重编程的方法主要有:体细胞核移植、细胞融合、特定转录因子转染、细胞抽提物诱导等。近年来抽提物诱导体细胞重编程越来越受到研究者的关注。利用此法,通过重编程不仅可以获得需要类型的细胞,而且方便识别与重编程有关的细胞因子,探求重编程的机制。文章简略概述诱导体细胞重编程的方法,并重点阐述细胞抽提物诱导体细胞重编程的研究进展。; 范宗兴朱化彬杜卫华; 关键词：抽提物重编程体细胞核移植

一种诱导牛胎儿成纤维细胞重编程的方法: 本发明属于细胞领域，公开了一种诱导牛胎儿成纤维细胞重编程的方法。本发明所述方法为牛胎儿成纤维细胞经毛地黄皂苷溶液透化处理后与爪蟾卵母细胞抽提物共孵育，用含2mM CaCl<Sub>2</Sub>的全培养基封闭细胞膜上的可...; 杜卫华范宗兴朱化彬; 文献传递

转乳铁蛋白肽和α干扰素基因的牛胎儿成纤维细胞的制备被引量：1: 2012年; 旨在构建含有乳铁蛋白肽基因和α干扰素基因的载体,并制备转基因牛胎儿成纤维细胞,为研制抗乳房炎和口蹄疫转基因克隆牛提供供体细胞。本研究构建了由山羊β-酪蛋白启动子启动的牛乳铁蛋白肽基因和由CMV启动子调控的人α干扰素基因的载体,以EGFP基因作为报告基因,neo基因作为筛选基因;分别采用脂质体和电击法转染牛胎儿成纤维细胞,G418筛选得到转基因阳性细胞,并用PCR方法检测转基因细胞中目的基因的整合情况,用Western blotting检测α干扰素蛋白的表达。结果,得到了同时含有牛乳铁蛋白肽基因和人α干扰素基因的转基因牛胎儿成纤维细胞,并且α干扰素蛋白在转基因细胞中能有效表达。; 余大为张守峰朱化彬张锦霞范宗兴郝海生刘岩赵学明秦彤杜卫华; 关键词：乳铁蛋白肽 Α干扰素转基因牛胎儿成纤维细胞

抽提物处理供体细胞对克隆胚胎发育的影响被引量：3: 2016年; 本研究采用爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞（JBCFF）,并以发生重编程的细胞为核供体进行体细胞核移植,研究其对克隆效率的影响。分别超排3只爪蟾,收集卵母细胞后提取其抽提物,用BCA蛋白浓度测定试剂盒确定其蛋白含量,SDS-PAGE分析其中所含蛋白的种类。应用细胞膜透化剂Digitonin对建立的JBCFF进行通透处理和PI染色,筛选最适浓度;并用获得的抽提物处理牛体细胞,获得重编程细胞。以发生重编程的体细胞为供体进行核移植,同时比较离子霉素＋6-DMAP和A23187＋6-DMAP两种组合激活后克隆胚的体外发育能力。结果,3个爪蟾卵母细胞抽提物样品的蛋白浓度分别为56.2255、64.6570和71.2158μg/mL,其中所含蛋白种类一致,主要集中在40-55、70-100ku之间。经过连续的筛选,透化剂Digitonin对JBCFF通透处理的最适浓度为7μg/mL,PI染色显示透化效率为55.44%。爪蟾卵母细胞抽提物与体细胞共孵育后继续培养6-7d,细胞聚集形成＂克隆簇＂。分别以＂克隆簇＂细胞和未处理细胞为核供体,制备的重构胚在融合率（92.83%和96.04%）、卵裂率（89.64%和89.78%）和囊胚率（24.06%和23.12%）均无显著差异（P〉0.05）;离子霉素＋6-DMAP和A23187＋6-DMAP两种激活方式对克隆胚胎的分裂率（92.16%和92.28%）和囊胚率（23.21%和24.18%）均无显著影响（P〉0.05）。爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞发生重编程,并恢复到较低的分化状态,但没有显著促进克隆胚胎的体外发育,可见缺少对胚胎发育起重要作用的重编程过程,还需要继续深入研究。; 郭芹芹范宗兴郝海生刘岩赵学明朱化彬杜卫华; 关键词：爪蟾供体细胞重编程克隆胚胎

爪蟾卵母细胞抽提物可诱导牛胎儿成纤维细胞发生部分重编程被引量：1: 2015年; 应用非洲爪蟾卵母细胞抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞(Japanese Black cattle fetal fibroblasts,JBCFF),观察处理前后细胞的形态学变化,同时用免疫荧光染色法检测组蛋白的乙酰化状态和OCT4蛋白的表达,并对其多能性标志基因的mRNA表达水平进行定量分析。结果表明,与未处理细胞相比,经抽提物处理和牛胎儿成纤维细胞组蛋白H3K9乙酰化程度与未处理组无显著差异;培养5~6d后细胞聚集形成'克隆簇'中碱性磷酸酶和Oct4蛋白染色阳性;同时也检测到Oct4和Nanog基因在其中的表达,而Sox2基因未见表达;且Oct4、Nanog基因表达量随处理后细胞培养时间的延长(4、5、6d)而呈依次上升趋势。可见,爪蟾卵母细胞抽提物能诱导和牛胎儿成纤维细胞发生部分重编程,恢复其发育全能性,这对牛诱导性干细胞制备方法的探索和体细胞克隆及转基因克隆牛效率的提高具有一定的借鉴意义。; 杜卫华范宗兴王皓宇郝海生刘岩赵学明秦彤朱化彬; 关键词：爪蟾牛胎儿成纤维细胞重编程

一种改进的核移植方法制备克隆荷斯坦种公牛: 体细胞克隆技术用于性状优良家畜的快速扩繁，能极大地缩短传统育种方式改良家畜品种的进程。本研究旨在运用一种改进的核移植技术扩繁引进的、优秀的后测荷斯坦种公牛。; 余大为孙业清杨林任晶晶范宗兴王皓宇郝海生朱化彬杜卫华; 关键词：荷斯坦牛体细胞克隆核移植良种繁殖

爪蟾卵母细胞抽提物诱导体细胞重编程研究: 本实验应用爪蟾卵母细胞抽提物处理体细胞，使其发生重编程，恢复部分全能性。应用此细胞作为核供体，以期在后续的克隆实验中帮助重构胚发育，提高克隆效率。; 范宗兴余大为郝海生赵学明王栋刘岩秦形朱化彬杜卫华; 关键词：爪蟾细胞克隆体细胞核移植重编程

非洲爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛体细胞重编程及其对核移植胚胎生产效率影响: 体细胞核移植已有近20年的发展历史，但其总效率仍然很低。目前认为是高度分化的体细胞在卵母细胞质中重编程不完全，表观遗传修饰异常所致。本研究采用非洲爪蟾卵母细胞抽提物诱导和牛胎儿成纤维细胞重编程，使其恢复到一个较低的分化状...; 范宗兴; 关键词：爪蟾抽提物重编程体细胞克隆; 文献传递

一种诱导牛胎儿成纤维细胞重编程的方法: 本发明属于细胞领域，公开了一种诱导牛胎儿成纤维细胞重编程的方法。本发明所述方法为牛胎儿成纤维细胞经毛地黄皂苷溶液透化处理后与爪蟾卵母细胞抽提物共孵育，用含2mM CaCl<Sub>2</Sub>的全培养基封闭细胞膜上的可...; 杜卫华范宗兴朱化彬; 文献传递

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范宗兴

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