罗天杰
- 作品数：5 被引量：4H指数：2
- 供职机构：暨南大学更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金广东省自然科学基金广东省教育部产学研结合项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组PACAP衍生物RMBYLL的高效制备及其体外生物学效应被引量：2
- 2011年
- 为了利用基因工程技术高效制备具有治疗Ⅱ型糖尿病功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生物RMBYLL,并在体外研究其生物学效应,采用基因重组技术表达重组肽RMBYLL,纯化、制备并鉴定重组肽RMBYLL后,利用特定细胞系和Western-blot等技术,检测RMBYLL对VPAC1、VPAC2和PAC1受体的选择性和激动活性,以及重组肽RMBYLL对胰岛素受体介导的信号传导最终效应物—葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。实验结果表明:利用重组肽技术制备的RMBYLL的M_r为3.901k,纯度大于95%,其产率为18.7 mg/(L发酵产物);制备的RMBYLL可与VPAC2受体特异结合并显著促进VPAC2-CHO细胞cAMP的产生,其受体半激活浓度(EC_(50))为0.90 nmol/L,目的肽RMBYLL可显著增强3T3-L1脂肪细胞GLUT4的表达,阳性实验组是对照组的1.91倍。由此表明,利用本研究确立的表达、纯化策略可实现高活性RMBYLL的高效制备,应用前期构建的含有特定受体的CHO细胞和3T3-L1脂肪细胞模型,可方便有效地进行相关药物肽的体外生物学效应研究。
- 马义叶祖禄罗天杰徐文娜
- 关键词：基因重组生物学效应
- 新型重组VPAC2激动剂RD的制备及促进胰岛素功能的分子机制
- 2014年
- 利用DNA重组、原核表达、Chitin-Beads柱和HPLC纯化、质谱鉴定等技术,制备了一种新型具有抗2型糖尿病功能的VPAC2受体激动剂RD,并初步研究和揭示了其在Ⅱ型糖尿病治疗中有效促进胰岛素信号传导的分子机制。实验结果表明:利用基因重组技术制备的VPAC2受体激动剂RD的分子量为3 785.0 Da,纯度为96%;将重组肽作用于正常或胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞(IR模型细胞),1和5μmol/L重组肽RD可促进正常3T3-L1脂肪细胞IRS-1蛋白的表达(分别增加36%和42%),而促进IR模型细胞IRS-1蛋白的表达增加更为明显(分别增加55%和63%)。IR模型细胞经1,5和10μmol/L重组肽RD处理后,p IRS1(ser307)的表达水平分别比降低了5.9%,10.7%和32.7%。在IR模型细胞中,5和10μmol/L RD处理组,IRS-2蛋白的表达水平分别降低12.8%和40.6%;而1,5和10μmol/L RD各处理组p IRS2蛋白的表达水平分别降低35.1%,40.8%和48.5%。5 and 10μmol/L RD处理的IR模型细胞中Akt蛋白的表达显著增强,表达量分别增加74%和77%。1,5和10μmol/L的重组肽RD处理的IR模型细胞中,Akt Ser473磷酸化水平分别降低33.9%,64.0%和71.1%;Akt Thr308磷酸化水平分别升高13.5%,78.6%和83.3%。建立了重组VPAC2受体激动剂RD的制备技术,并在体外细胞水平检测了其效果(显著促进正常3T3-L1脂肪细胞及IR模型细胞IRS-1蛋白的表达;降低IR模型细胞p IRS1(ser307),IRS-2,p IRS2蛋白的表达;促进IR模型细胞Akt蛋白的表达及Akt Thr308磷酸化水平等),为阐明其在2型糖尿病治疗中的分子作用机制及药用研发提供了实验基础。
- 马义罗天杰洪岸
- 关键词：基因重组糖尿病胰岛素
- 垂体腺苷酸环化酶激活肽衍生多肽RHMP的重组制备及促角膜损伤修复的初步研究被引量：2
- 2013年
- 利用基因工程技术高效制备具有促进角膜损伤修复功能的垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RHMP,并在体外研究其生物学效应,为角膜疾病的治疗提供了新思路。采用基因重组技术表达重组肽RHMP,经Chitin-Beads柱纯化、HPLC及SDS-PAGE、质谱鉴定后,研究其对小鼠角膜损伤修复的影响。实验结果表明:利用基因重组技术制备的PACAP衍生多肽RHMP的分子量为3.4kDa,纯度为96%;将重组肽作用于创伤后的小鼠角膜,12h、24h、36h、48h后角膜修复率分别为(49.58±1.74)%、(93.66±3.39)%、(99.6±0.43)%、(99.8±0.14)%,而对照组修复率分别为(9.76±1.58)%、(29.02±1.63)%、(55.10±1.49)%、(78.59±2.52)%,P<0.001,差异具有统计学意义,重组肽RHMP可显著促进小鼠角膜损伤修复。因此,利用以上确立的表达、纯化策略,可实现新型基因重组PACAP衍生多肽RHMP的高效制备,重组多肽RHMP可快速有效地促进损伤角膜的修复,从而有望成为一种新型角膜损伤治疗药物;同时,建立的小鼠角膜上皮损伤模型可用于相关药物的生物学效应研究。
- 徐文娜马义叶祖禄罗天杰饶磊洪岸
- 关键词：基因重组垂体腺苷酸环化酶激活肽角膜损伤修复
- PACAP衍生多肽RDB的高效制备及其改善胰岛素抵抗作用的初步研究
- 2013年
- 为了制备垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)衍生多肽RDB并初步研究其改善脂肪细胞胰岛素抵抗的作用,利用基因工程技术,选用大肠杆菌偏爱密码子,以重叠延伸PCR方法合成RDB基因序列,定向插入到高效表达载体pKYB-MCS中,用大肠杆菌ER2566进行表达,融合蛋白经Chitin-Beads柱纯化后,利用β-巯基乙醇诱导蛋白内含肽的N端自剪切,释放目的肽,再用HPLC制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB,实现RDB的高效制备;利用制备的重组肽RDB研究其对胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的改善作用及初步机制。制备的重组肽RDB的Mr为3.990 k,纯度大于95%,其产率为17.3 mg/L发酵产物;制备的RDB可明显促进胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖利用及信号分子IRS-1的表达。结果表明在确立的优化条件下可高效制备纯度较高的PACAP衍生多肽RDB(纯度≥95%),RDB能改善胰岛素抵抗3T3-L1脂肪细胞的胰岛素敏感性,其作用机制与胰岛素信号通路相关蛋白的表达有关。
- 罗天杰马义叶祖禄徐文娜饶磊洪岸
- 关键词：垂体腺苷酸环化酶激活肽基因工程3T3-L1细胞胰岛素抵抗
- 重组TNF-α衍生物RMPT的制备及其抗肿瘤作用初步研究
- 2013年
- 利用基因重组技术制备具有抗肿瘤作用的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)衍生多肽RMPT,并研究其体外生物学效应。PCR方法合成RMPT基因序列,定向插入高效表达载体pTXB1-MCS,在大肠杆菌ER2566中诱导表达重组融合蛋白并建立RMPT融合蛋白诱导表达的优化体系。N端自动切割、纯化、HPLC制备获得RMPT,电泳和质谱鉴定其分子质量。CCK-8检测RMPT对肿瘤细胞的抑制作用。实验结果表明:重组工程菌可溶性RMPT融合蛋白最佳诱导表达条件为37℃、8 h、IPTG浓度0.75 mmol/L;DTT诱导蛋白内含肽自剪切固相纯化和HPLC制备重组肽RMPT,纯度大于95%,电泳和质谱鉴定其分子质量为3.7 ku,结果与理论值相符合,其产率为10.8 mg/L发酵液;体外研究表明,RMPT能够高效抑制多数肿瘤细胞增殖。
- 叶祖禄马义徐文娜罗天杰饶磊洪岸
- 关键词：基因重组抗肿瘤作用
