程燚
- 作品数：7 被引量：16H指数：3
- 供职机构：第三军医大学大坪医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- PCR-CTPP在DNA碱基切除修复基因SNP分型中的应用被引量：1
- 2016年
- 目的分析两对引物-聚合酶链式反应(PCR-CTPP)在碱基切除修复(BER)途径基因单核苷酸多态性(SNP)分型中的应用,为发现新的SNP检测方法提供实验依据。方法采用PCR-CTPP扩增BER途径关键蛋白OGG1、XRCC1及APE1 4个常见SNP位点OGG1Ser326Cys、XRCC1Arg399Gln、APE1Asp148Glu及-141T/G(位于启动子区域)的DNA片段,凝胶电泳显像后判读基因型,同时与DNA测序的方式比对各基因位点的准确性。结果 PCR-CTPP方法基因分型结果与DNA测序得到的基因分型结果完全一致。结论 PCR-CTPP技术可靠、快速,其广泛应用能够有助于基因SNP的分型研究。
- 彭杨程燚杨宇馨李崇义李梦侠张诗珩王东
- 依布硒诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及其机制的研究被引量：4
- 2014年
- 目的探讨依布硒对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法应用CCK-8法观察不同浓度依布硒作用于人多发性骨髓瘤细胞株U266细胞8、24、48、72 h后细胞活力及增殖情况,同时应用Hoechst染色检测细胞凋亡,JC-1检测细胞线粒体膜电位,ROS探针观察依布硒对细胞内活性氧的影响,Western blot检测Bcl-2、Bax、细胞色素C等凋亡相关蛋白及Caspase9激活情况。结果依布硒能够显著抑制多发性骨髓瘤细胞增殖,并诱导细胞凋亡,40μmol/L依布硒使凋亡率达(80.8±3.9)%;同时依布硒能升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位;此外依布硒可诱导细胞色素C从线粒体向胞浆释放但并不激活Caspase9。结论依布硒可诱导多发性骨髓瘤细胞发生非Caspase依赖的细胞凋亡,其机制可能与ROS水平升高有关。
- 张亮杜佳周立为程燚王东谢家印
- 关键词：依布硒多发性骨髓瘤凋亡活性氧
- 三七总皂甙对人急性髓系白血病细胞株U937的抑制增殖及诱导凋亡作用被引量：6
- 2016年
- 目的:观察三七总皂甙(panax notoginsenosides,PNS)对人急性髓系白血病细胞株U937凋亡的影响,并探讨PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。方法:将处于对数生长期的U937细胞分为5组:正常对照组及PNS组(5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L、40mg/L),药物作用12 h、24 h、48 h后,CCK-8比色法检测PNS对肿瘤细胞的相对细胞活力的影响;流式细胞术检测PNS促进细胞凋亡的能力;RT-PCR和Western blot法分别检测不同浓度的PNS对Bax和Bcl-2蛋白表达的影响。结果:CCK-8分析显示,PNS在低浓度(≤40 mg/L)能明显抑制肿瘤细胞的活力,40 mg/L处理组较正常对照组细胞活力在3个时间点分别下降47%、72%、85%;与对照组相比,处理组的凋亡率显著增加,10 mg/L、20 mg/L、40 mg/L实验组凋亡率分别上升7%、10%、43%;PNS能明显增加细胞内Bax mRNA及蛋白的表达,抑制Bcl-2 mRNA及蛋白的表达。结论:PNS具有抑制人急性髓系白血病细胞株U937的增殖抑制及凋亡诱导作用,并能影响Bax和Bcl-2蛋白的表达。文章探讨了PNS抑制肿瘤发展可能存在的作用机制,为将来进一步研发PNS作为白血病治疗药物奠定基础。
- 李响李郑程燚贾晓兰王劲
- 关键词：三七总皂甙BAXBCL-2
- APE1和p53蛋白在A549细胞和HeLa细胞中的结合作用被引量：3
- 2013年
- 目的探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(apurinic/apyrimidinic endonuclease,APE1)和p53蛋白内源性和外源性相互结合作用。方法将重组质粒pET42a-hAPE1转染E.coli BL21(DE3),应用IPTG诱导GST-APE1蛋白表达,鉴定后经金属螯合层析技术纯化,通过Western blot鉴定纯化蛋白,得到GST-APE1融合蛋白。免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)和GST蛋白沉降实验分别检测内源性和外源性APE1和p53蛋白结合作用,免疫荧光标记结合激光共聚焦显微镜技术确定APE1和p53蛋白亚细胞定位。结果转染质粒经IPTG诱导表达,应用SDS-PAGE发现GST-APE1在预期位置64×103处存在阳性条带,"Ni"柱纯化后得到GST-APE1融合蛋白,通过Western blot鉴定。免疫共沉淀和GST蛋白沉降实验证实APE1和p53存在内源性和外源性结合作用。激光共聚焦显微镜观察免疫荧光标记的APE1和p53蛋白均为核浆共表达蛋白,氧化应激处理后,蛋白逐渐由胞浆向胞核移位,二者共定位于核膜处较明显。结论 APE1和p53蛋白在A549和HeLa细胞中存在内源性和外源性结合作用,可能与其转录调控及肿瘤放化疗疗效有关。
- 张翀李梦侠程燚李增鹏王阁王东杨镇洲
- 关键词：P53蛋白相互作用
- 骨髓瘤细胞表达APE1促进THP-1细胞破骨样分化
- 2013年
- 目的研究在非接触式共培养体系下,RNA干扰多发性骨髓瘤细胞株U266 APE1表达对与其共培养的THP-1细胞破骨样分化的影响。方法①将构建的APE1 siRNA表达载体导入U266细胞中。②Western blot法检测U266细胞中APE1及破骨细胞分化因子(RANKL)蛋白表达。③建立非接触式共培养体系:THP-1+U266共培养组、THP-1+U266APE1 siRNA共培养组和THP-1细胞单培养组。④抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色鉴定破骨样细胞,RT-PCR法检测THP-1细胞Cathepsin K和V-ATPase mRNA表达水平。⑤光镜下观察骨切片陷窝形成。结果 APE1 siRNA能明显抑制U266细胞中APE1及RANKL蛋白表达(P<0.01)。THP-1细胞与U266细胞共培养后,THP-1细胞可分化为TRAP阳性的破骨样细胞,Cathepsin K和V-ATPase基因表达显著升高(P<0.05);U266细胞经APE1 siRNA处理后,共培养体系中THP-1细胞诱导分化的OCLs数量减少,Cathepsin K和V-ATPase基因水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论APE1 siRNA能明显抑制U266细胞诱导的THP-1细胞的破骨样分化,其机制可能与APE1下调U266细胞RANKL有关。
- 周立为杜佳张亮程燚王东谢家印
- 关键词：APE1骨髓瘤骨病THP-1
- 基于ChIP-seq技术的肺癌细胞DNA碱基损伤热点全基因组分析被引量：1
- 2021年
- 目的建立可用于在全基因组水平分析DNA碱基损伤位点分布的方法,利用该方法分析非小细胞肺癌A549细胞株中DNA碱基损伤热点区域的分布规律。方法利用染色质免疫沉淀偶联测序(chromatin immunoprecipitation sequencing, ChIP-seq)技术对A549细胞中与脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(apurinic/apyrimidinic endonuclease 1, APE1)和8-氧鸟嘌呤DNA糖化酶1(8-oxoguanine DNA glycosylase 1, OGG1)蛋白特异结合DNA片段进行序列鉴定,通过生物信息学的方法分析全基因组DNA碱基损伤热点分布规律。结果 APE1和OGG1结合峰主要分布在基因启动子区,比例分别为41.70%和49.26%,APE1和OGG1结合峰于TSS上游2 000 bp区域内分别占比38.80%和39.80%,APE1与OGG1结合峰具有显著相关性(r=0.636 3,P<0.01)。APE1和OGG1共同结合峰相关基因数有25 038个,其中与肿瘤发生直接相关的有641个。结论建立在全基因组水平分析DNA碱基损伤位点分布的方法;在非小细胞肺癌细胞中,DNA碱基损伤并非随机分布而主要分布于基因调控功能区,碱基损伤修复蛋白结合相关热点区域与肿瘤发生及肿瘤炎症微环境密切相关。
- 李世勋程燚戴楠熊艳丽李梦侠
- 关键词：碱基切除修复
- 基于远红外荧光标记的脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶活性检测方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立远红外荧光标记的脱嘌呤脱嘧啶(apurinic/apyrimidinic,AP)核酸内切酶活性检测方法。方法通过5'标记远红外荧光基团(IR700)合成得到AP核酸内切酶活性检测底物,并通过与经典的同位素法对比,检验此方法的可靠性、灵敏度及实用性。结果远红外荧光标记法较传统的同位素法检测AP核酸内切酶更为敏感(10%上升到30%),且操作时间从传统的1 d缩减至2 h。结论远红外荧光标记法检测AP核酸内切酶活性更敏感,且操作方便、无放射性污染,易于推广。
- 程燚王东李梦侠
- 关键词：活性检测
