程丽琴
- 作品数：17 被引量：54H指数：5
- 供职机构：浙江大学动物科学学院动物预防医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省自然科学基金浙江省重点科技计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆及在E.coli中的表达被引量：9
- 2002年
- 核衣壳蛋白基因 (N基因 )是传染性支气管炎病毒的重要结构基因 .根据已报道的序列设计引物 ,利用RT PCR技术从病毒RNA中扩增和克隆到了N基因的cDNA ,并测定了核苷酸序列 .克隆的N基因片段ORF全长 12 30bp ,编码 4 0 9个氨基酸 .将该片段序列与其他IBV病毒株比较 ,核苷酸的同一性为 87 0 %～ 98 6 %,氨基酸的同一性为 91 0 %～ 98 1%.将该cDNA亚克隆到pBV2 2 0表达载体 ,转化大肠杆菌DH5α菌株 ,Western印迹检测 ,获得了分子量约 4
- 周继勇丁红梅程丽琴沈行燕
- 关键词：禽病毒传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因克隆E.COLI
- 表达传染性支气管炎病毒纤突蛋白的转基因马铃薯生产方法
- 本发明公开了传染性支气管炎病毒纤突蛋白转基因马铃薯的生产方法。传染性支气管炎病毒纤突蛋白基因插入到植物表达载体pBI121上，经三亲交配的方法把重组表达载体导入农杆菌中，外源基因经农杆菌介导法转化马铃薯茎段，通过再生植株...
- 周继勇吴建祥程丽琴
- 文献传递
- 植物可食性疫苗
- 2002年
- 程丽琴周继勇
- 关键词：植物转基因植物基因工程
- 传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因变异及在大场杆菌中的表达(英文)被引量：3
- 2003年
- 核衣壳蛋白 (N)是传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白之一。以前的研究结果显示 IBV- ZJ971毒株以引起腺胃肿大为特征 ,IBV- X和 N毒株以引起肾炎为特征。为了探讨不同组织嗜性传染性支气管炎病毒 N基因的变异 ,我们依据已发表的 IBV- Beaudette毒株 N基因的序列设计和合成引物 ,RT-PCR扩增 IBV- ZJ971、N、X和 H5 2的核衣壳蛋白基因 ,并测序、分析和在 E.coli中进行表达。结果显示 :IBV- ZJ971、N、X和 H5 2毒株的 N基因的 ORF由 12 30 bp组成 ,编码 4 0 9个氨基酸。与来源于 Gen Bank中的 IBV毒株比较 ,IBV- ZJ971、N、X和 H5 2与其它 IBV毒株的核苷酸同源性分别是 87.0 - 98.6 %、86 .6 - 99.7%、86 .3- 99.7%、87.2 % - 98.5 % ,氨基酸的同源性分别是 90 .0 - 97.8%、 90 .5 - 98.8%、 90 .0 -98.8%、 91- 98%。IBV- ZJ971毒株的 N蛋白不同于其他 IBV的独特变异是 111,117,14 2 ,171和 4 0 1位点上的氨基酸改变 ,IBV- N和 X毒株的 N蛋白不同与其它 IBV的独特变异是 4 6 ,4 8,189,190 ,2 2 0 ,2 2 3,2 36 ,2 37,2 4 0 ,2 86 ,2 99,30 1334,335 ,336 and35 1位点上的氨基酸改变。说明 IBV嗜腺胃毒株(ZJ971)和嗜肾毒株 (N和 X)的 N基因以散在的点突变为特征。将 IBV- ZJ971毒株的 N基因在 E.
- 周继勇丁红梅程丽琴Jimmy Kwang
- 关键词：传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因变异大肠杆菌
- 传染性支气管炎病毒S1蛋白在马铃薯中的表达
- 与传统的疫苗生产方法相比,用转基因植物表达的抗原作为疫苗日益增多。本文研究了传染性支气管炎病毒(IBV)S1蛋白在转基因马铃薯(品种东农303)中的表达及其免疫原性。将IBV S1蛋白cDNA序列构建到CaMV 35S启...
- 周继勇吴建祥程丽琴郑晓娟龚辉商绍斌周恩民
- 关键词：传染性支气管炎病毒S基因转基因马铃薯
- 文献传递
- 转基因植物疫苗免疫原基因表达研究概述被引量：3
- 2001年
- 程丽琴周继勇
- 关键词：基因表达
- 新的禽传染性支气管炎病毒变异毒株S基因克隆
- 从鸡腺胃肿大的病例中鉴定了一株新的禽传染性支气管炎病毒变异毒株(2J971株),对该毒株进行RT—PCR扩增,将得到的S基因cDNA克隆入pBS SK(+)质粒中。结果显示,传染性支气管炎病毒嗜腺胃毒株2J971株S基因...
- 周继勇沈行燕程丽琴丁红梅吴建祥
- 关键词：S基因克隆
- 禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体的构建被引量：4
- 2001年
- :以含传染性支气管炎病毒 ( ZJ971毒株 ) S1基因的质粒 PBS为模板 ,根据其序列设计引物进行PCR扩增 ,得到 1.7kb左右的 S1基因产物 ;用 Xbal I和 Bam HI酶切纯化 ,并在 T4 DNA连接酶的作用下 ,定向克隆到植物表达载体 PBI12 1中 ,PCR及酶切鉴定表明 。
- 吴建祥周继勇程丽琴沈行燕丁红梅
- 关键词：禽传染性支气管炎病毒S1基因植物表达载体定向克隆
- 鸡传染性支气管炎病毒H52毒株S基因的克隆及序列分析
- 2002年
- 将含有鸡传染性支气管炎病毒 (IBV) H5 2毒株的尿囊液浓缩 ,用 TRIzol试剂抽提病毒 RNA作为反转录 -聚合酶链反应 (RT- PCR)的模板 ,参照已发表的 IBV- Beaudette株 S基因序列 ,设计并合成一对特异性引物 ,扩增得到长度约 3.6 kb的 S基因片段 ,利用引物设计中 Eco R I和 Bam H I酶切位点插入到克隆载体 p Blue Script SK的多克隆位点中 ,转化感受态 E.coli DH5 α。经酶切分析和 PCR等方法鉴定 ,筛选出阳性克隆 ,进行核苷酸序列测定 ,证实获得了 S基因的全长序列。利用 DNAstar等分析软件与 Gen Bank中其它 IBV毒株的核苷酸及其推导的氨基酸进行序列同源性比较分析 ,结果表明 ,H5 2毒株与已报道的核苷酸的同源性在 83.4 5 %～ 99.71%之间 ,氨基酸的同源性在 82 .10 %～ 99.2 6 %之间。
- 程丽琴周继勇沈行燕陈吉刚陈声明
- 关键词：S基因克隆
- 艾维茵商品肉用鸡白细胞介素-2基因的克隆及其二级结构分析被引量：5
- 2003年
- 根据Sundick等发表的鸡白细胞介素 2 (IL 2 )基因序列设计一对特异性引物 ,从伴刀豆球蛋白A (ConA)体外激活的脾淋巴细胞中提取mRNA ,通过RT PCR方法获得艾维茵商品肉用鸡IL 2cDNA基因。将其连接到测序载体 pGEM TEasyVector ,测序后用Pcgene和DNAstar软件分析。结果显示 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2基因长 734bp ,编码一由 14 3个氨基酸组成的前体蛋白 ,与来自GenBank的另外 3个品系 (Kestrelleghorn ,Obese和SC)鸡IL 2比较 ,其核苷酸和氨基酸序列同源性为 98.9%～ 10 0 %和 97.2 %～ 10 0 %。二级结构预测表明 ,艾维茵商品肉用鸡IL 2N端存在一条由 2 2个氨基酸组成的前导肽及 4个半胱氨酸形成的链内二硫键 ,并存在类似人IL 2的 4个α螺旋 ,这些结构很可能在维持IL 2生物学活性中发挥重要作用。基因系统进化树分析表明 ,艾维茵商品肉用鸡与SC鸡IL 2的亲缘关系较近 ,与火鸡、Kestrelleghorn和Obese鸡IL 2的亲缘关系较远。
- 陈吉刚周继勇王金勇程丽琴陈庆新叶菊秀郑肖娟商绍彬
- 关键词：白细胞基因克隆
