秦立蓬
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 间充质干细胞亲和肽的筛选与用途
- 本发明涉及细胞、多肽生物技术领域。本发明的目的在于筛选到一种与MSC强结合的小肽用于MSC的分离纯化及作为载体用于靶向治疗制剂的制备。本发明所述的MSC亲和肽序列为富含Ser、Thr、Asn、Lys的环七肽序列。本发明利...
- 裴雪涛赵敬湘杨丽平王韫芳闫舫师伟秦立蓬管利东
- 文献传递
- 神经元限制性沉默因子对人胰岛素基因转录调控作用的研究被引量：5
- 2007年
- 为了研究神经元限制性沉默因子(NRSF)调控神经元及胰岛细胞中神经特异性基因的表达,进一步寻找胰岛细胞中可能存在的其他NRSF调控基因.先用生物信息学手段对相关基因进行了分析.筛选及序列比对发现,人胰岛素核心启动子区有一段与NRSE相似的序列,提示,它可能受NRSF调控.构建了含NRSF基因的慢病毒载体,将其稳定转染于INS-1细胞.构建了3种荧光素酶报告载体:含有人胰岛素启动子-荧光素酶(hInsP-LUC)的慢病毒载体,pGL3-Basic载体和含有2拷贝NRSE样基序-荧光素酶(NRSE-LUC)的报告载体.利用稳定转染及瞬时转染实验观察NRSF对报告载体中荧光素酶活性的影响.利用电泳迁移率变动分析实验观察NRSE样基序与NRSF蛋白的结合情况,并通过竞争结合实验、引入特异性抗体实验证实探针与蛋白质结合的特异性.RT-PCR检测证实,感染空病毒的INS-1细胞不表达NRSF,感染含目的基因慢病毒的INS-1细胞能表达NRSF.将含有hInsP-LUC的慢病毒载体稳定转染于上述2种细胞,荧光素酶活性分析结果显示,NRSF的过表达能明显降低胰岛素启动子的活性.瞬时转染hInsP-LUC报告系统于上述2种细胞,结果也显示NRSF能明显抑制胰岛素启动子-荧光素酶的活性.将含有NRSE-LUC的报告载体瞬时转染于上述2种细胞,结果表明过表达NRSF的INS-1细胞组的荧光素酶相对值比对照组有明显下降.电泳迁移率变动分析实验进一步证实,此NRSE样序列可以与NRSF蛋白特异结合,这种特异结合可以被标准的NRSE序列所竞争.结果表明,人胰岛素启动子中含有NRSE样序列,该序列通过与NRSF蛋白结合从而抑制人胰岛素启动子的转录活性.这一研究工作有助于进一步了解NRSF在胰岛细胞中的调控作用.
- 刘庆斌李艳华杨印祥袁红丰张锐秦立蓬吕洋张赛男孙迪金陈琳白慈贤南雪王韫芳裴雪涛
- 关键词：胰岛素启动子
- 一个用于转染细胞分选的双顺反子载体的构建及其应用
- 2005年
- 为简化转染细胞的分选过程,构建了一个含有细胞表面标志CD34基因的双顺反子载体p3.1-IRES-CD34.利用来源于脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点(IRES),实现目的基因与CD34基因的共同表达.将绿色荧光蛋白(EGFP)作为目的基因插入载体的多克隆位点,然后转染NIH-3T3细胞,通过免疫磁珠分选(MACS)方法来分选细胞.结果表明:对于转染细胞,均可实现快速分选(瞬时转染细胞约48h,稳定转染10￣15天),并且获得较高纯度(95%以上)的表达目的基因细胞.
- 曲笑霞秦立蓬岳文高艳红李艳华袁红丰王韫芳刘大庆闫舫施双双裴雪涛
- 关键词：转染细胞分选CD34
- 间充质干细胞亲和肽的筛选与用途
- 本发明涉及细胞、多肽生物技术领域。本发明的目的在于筛选到一种与MSC强结合的小肽用于MSC的分离纯化及作为载体用于靶向治疗制剂的制备。本发明所述的MSC亲和肽序列为富含Ser、Thr、Asn、Lys的环七肽序列。本发明利...
- 裴雪涛赵敬湘杨丽平王韫芳闫舫师伟秦立蓬管利东
- 文献传递
- 胎儿骨髓间充质干细胞中SSEA-4阳性表达细胞的分离和检测被引量：7
- 2006年
- 为了验证成体干细胞中全能性干细胞存在的可能性,以SSEA-4抗原为筛选标志,利用免疫磁珠筛选技术从胎儿来源的骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,fMSCs)中筛选并培养得到SSEA-4表达阳性的fMSC-SSEA-4细胞,从形态学、生长曲线、表面标志及细胞周期、核型分析等方面检测其生物学性状,并通过Oct-4及SSEA-4抗体的表达及致瘤性等方面分析其全能性状．同时观察了fMSC-SSEA-4细胞的诱导分化能力．结果发现,fMSC-SSEA-4细胞的形态学表现、细胞周期和生长曲线检测与fMSCs无明显差异;fMSC-SSEA-4细胞Oct-4和SSEA-4抗体表达阳性,并且表现为正常的二倍体核型,无明显的致瘤性状．在不同的诱导条件下,fMSC-SSEA-4细胞可向成骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞分化．实验结果提示,fMSCs中存在有全能干细胞性状的一群细胞,从而为进一步深入研究和更好地应用fMSCs提供了理论依据．
- 刘大庆杨印祥高艳红袁红丰秦立蓬王韫芳南雪施双双岳文裴雪涛
- 关键词：胎儿骨髓间充质干细胞全能性生物学性状
- 静态单轴拉伸应变刺激对细胞有丝分裂方向的影响被引量：4
- 2008年
- 力学刺激对细胞发育具有重要意义,它如何对细胞分化及组织形态的发生产生影响是一个尚未完全阐明的问题.细胞的有丝分裂过程与细胞增殖、分化以及胚胎发育、组织器官形态形成和损伤组织的修复再生等特性密切相关,例如,细胞的有丝分裂方向就是影响细胞极性分化,乃至组织形态发生的因素之一.那么,力学刺激是否通过改变细胞有丝分裂方向从而影响细胞的分裂分化呢?以小鼠成骨细胞系MC3T3为模型,探讨了静态单轴拉伸应变刺激对细胞形态、应力纤维排布方向和有丝分裂方向的影响.结果显示,在4%及8%静态单轴拉伸应变条件下,48h之内细胞形态发生明显变化,细胞呈梭状,长轴沿应变方向排列,细胞骨架微丝呈束状平行排列,方向与应变方向相关.统计学分析表明,4%应变刺激48h后、8%应变6h后、8%应变12h后、8%应变24h后,及8%应变48h后,分别有49%,43%,54%,54%,和62%的细胞应力纤维排列方向与单轴拉伸应变方向的夹角在30!以内,以及50%,48%,56%,53%和62%的细胞有丝分裂方向与单轴应变方向夹角在30"以内.统计学分析表明,细胞形态、应力纤维排布及有丝分裂方向与拉伸方向相关,且应力纤维排列方向和有丝分裂方向之间呈现高的相关性,这种相关性在拉伸刺激48h后表现很明显,由此推测,存在力学刺激影响细胞形态及细胞应力纤维排布方向,控制有丝分裂方向的机制.
- 王婧胡青华米强赵磊周军年秦立蓬杨春王韫芳庄逢源
- 关键词：有丝分裂
- 卵巢癌相关基因（Spindlin 1）蛋白多克隆抗体的制备与鉴定
- ＜正＞目的：卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤之一, 死亡率高。因此寻找卵巢癌发生中的敏感和特异基因将为其诊断和治疗开辟新的途径。本课题组已获得与卵巢癌相关基因,Spindlin 1。本研究制备了 Spindlin 1蛋白抗体,...
- 陈琳吕洋秦立蓬张鹏袁红丰李艳华白慈贤管利东裴雪涛
- 文献传递
- 重组腺病毒载体pAd-pdx-1的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达
- ＜正＞ 目的骨髓间充质干细胞（MSC）是具有多向分化潜能的一群细胞。大量实验结果表明MSC不但可以分化为骨、软骨、肌肉、脂肪细胞等,还可以跨胚层分化为神经细胞、肝细胞。另外,我们实验室前期的工作表明体外MSC可以被定向诱...
- 李艳华张锐秦立蓬赵连旭王蕴芳岳文裴雪涛
- 文献传递
- 骨髓间充质干细胞亲和肽的筛选被引量：1
- 2006年
- 采用噬菌体肽库技术,用分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞筛选噬菌体环七肽库,通过酶联免疫吸附实验挑选出亲和性强的克隆．测序分析相应的基因组成,推导多肽序列,获得骨髓间充质干细胞高亲和性多肽,并合成FITC标记的亲和肽(FITC-CSTNPKVLC),流式细胞仪检测结果显示,合成多肽对筛选细胞具有良好的亲和力。
- 赵敬湘杨丽平刘大庆秦立蓬王韫芳白慈贤南雪裴雪涛
- 关键词：骨髓间充质干细胞噬菌体肽库测序分析
- 人spindlin 1基因全长cDNA的克隆与定位被引量：3
- 2004年
- 利用分子克隆技术和生物信息学手段,克隆并命名了人spindlin 1基因。此基因cDNA全长4375bp,含有236～949bp完整开放读框,预测编码27ku的膜内蛋白。新基因在核酸序列上与鼠spindlin基因有96％同源,其编码氨基酸序列与鼠spindlin蛋白98％同源。生物信息学分析表明该基因定位于9q22.1-22.3区域,基因组DNA全长为52.3 kb,由5个外显子和4个内含子组成,内含子和外显子之间的剪切完全符合GT-AG法则。利用绿色荧光蛋白与spindlin 1基因的融合蛋白表达载体转染COS-7细胞表明spindlin 1表达的蛋白定位于胞核,且转染后的细胞中较多见胞核形态的改变,例如出现双核或巨型核。
- 岳文孙丽亚李春海高艳红秦立蓬白慈贤裴雪涛
- 关键词：CDNA克隆生物信息学亚细胞定位
