石庆华
- 作品数：46 被引量：213H指数：8
- 供职机构：新疆农业大学农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 小花棘豆(Oxytripis glabra DC)毒素基因的cDNA克隆及序列测定被引量：3
- 2005年
- 在完成小花棘豆毒素 95 %氨基酸序列的基础上 ,根椐已知的氨基酸序列 ,设计合成了特异简并引物 .以小花棘豆总RNA为模板 ,逆转录合成cDNA第一链 ,用置换法合成双链cDNA .用特异引物对此双链cDNA进行PCR扩增 ,将扩增后的目的基因与用SmaⅠ酶切的质粒pUC 18连接 ,转化大肠杆菌JM10 7.筛选阳性克隆进行序列分析 ,获得了OXY基因的全部序列 .经测序后测得基因序列与原氨基酸序列对照完全一致 .GenBnak数据检索说明 ,OXY基因编码序列确定是一个从未报道的序列 .此研究结果对该毒素的应用研究奠定了基础 .
- 张桦王希东石庆华张强许健喻梅辉
- 关键词：CDNA克隆
- 玉米热激蛋白基因ZmHsp90-1的克隆及表达分析被引量：5
- 2012年
- Hsp90是普遍存在于原核和真核细胞中的一种高度保守的分子伴侣。本研究从玉米中克隆了一个Hsp90同源基因,命名为ZmHsp90-1基因,并对其进行了初步的序列分析。该基因cDNA序列全长2371bp,开放阅读框2094bp,编码697个氨基酸,蛋白质分子量约79.98kD。蛋白结构预测及同源比对分析表明,ZmHsp90-1基因编码蛋白含ATPase位点和Hsp90保守结构域,并与拟南芥、水稻等多种物种的热激蛋白高度同源;进化树分析表明ZmHsp90-1与拟南芥AtHsp90.1基因关系较近,蛋白序列相似性达88.3%。目的蛋白亚细胞定位显示,ZmHsp90-1蛋白在细胞质中表达。实时荧光定量PCR分析表明,ZmHsp90-1对非生物胁迫高温、高盐、ABA、低温、干旱均具有明显的应答反应。推测ZmHsp90-1是玉米的一个胁迫相关基因。
- 刘玲玲柳思思翁建峰王昌涛李新海张世煌石庆华王丽娟郝转芳
- 关键词：玉米热激蛋白非生物胁迫
- 棉花咖啡酸-O-甲基转移酶基因的原核表达及蛋白纯化鉴定被引量：9
- 2010年
- 为获得大量高纯度的GhCOMT2蛋白以便研究其功能和性质,以pMD18-GhCOMT2质粒为模板,PCR扩增GhCOMT2基因的cDNA编码区,构建原核表达载体pET-28a-GhCOMT2,经酶切鉴定并测序后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,并采用Western blotting方法鉴定表达产物。结果表明:在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中成功表达了与标签蛋白融合的GhCOMT2蛋白,大小约为40.062 kD,浓度为0.62 mg/mL。重组蛋白的最佳诱导条件为:0.2 mmol/LIPTG在16℃诱导12 h。重组蛋白以可溶形式高效表达,用蛋白标签亲和层析柱(HisTrapTMHP)获得纯化重组蛋白,Western blotting分析表明其能与His多克隆抗体起特异性反应。
- 李波倪志勇石庆华范玲
- 关键词：原核表达蛋白纯化WESTERNBLOTTING
- 刺山柑(Capparis spinosa)总RNA不同提取方法的比较被引量：2
- 2009年
- 以野生刺山柑叶片为材料,采用70%丙酮抽提研磨材料,结合TRIZOL,CTAB,SDS 3种常见的RNA提取方法提取总RNA,通过RNA获得率、纯度、电泳图谱以及RT-PCR反应等分析,初步确立了一种有效的提取刺山柑叶片总RNA的改良SDS法。该方法提取的RNA A260/A280值在1.88-1.94之间,电泳图谱完整,具有产量高、时间短、成本低等特点,所得的RNA可以用于RT-PCR和cDNA文库构建以及Northern杂交等后续实验。
- 栾东东石庆华陈虹董玉芝
- 关键词：RNA提取CTAB法SDS法TRIZOL法
- 鹰嘴豆籽粒贮藏蛋白双向电泳的研究被引量：1
- 2008年
- 以鹰嘴豆为材料,通过对样品制备、电泳条件的优化,建立其籽粒贮藏蛋白的双向电泳技术,并通过电泳图谱的分析,了解贮藏蛋白等电点和相对分子质量的分布情况.结果表明,经考马斯亮蓝染色获得贮藏蛋白斑点约380个,等电点范围在pH4.0～8.0,其中大部分集中在pH6.0～7.0;鹰嘴豆籽粒贮藏蛋白质的相对分子质量为11000～120000,表现出2个分布峰,一个在30000～40000,另一个在50000～60000;鹰嘴豆与大豆籽粒贮藏蛋白的分子质量和等电点分布基本相似.
- 王显生高文瑞石庆华张桦张巨松李建贵何小玲麻浩
- 关键词：鹰嘴豆贮藏蛋白双向电泳
- 鹰嘴豆种子蛋白分析被引量：4
- 2009年
- 利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对不同品种的鹰嘴豆的种子蛋白进行分析,结果显示:6种鹰嘴豆种子的蛋白质主要由清蛋白、球蛋白、盐溶和醇溶蛋白质组成,其中清蛋白和球蛋白种类较多,盐溶蛋白和醇溶蛋白种类较少。在清蛋白和球蛋白的种类方面,165号(卡布里型),阿克苏鹰嘴豆(卡布里型),88-1(迪西型)和阿瓦提2号鹰嘴豆(卡布里型)较185号(迪西型)和176号(迪西型)多;在盐溶蛋白和醇溶蛋白种类方面,6个品种的蛋白种类均较少。
- 石庆华王希东张桦林嘉鹏陈芯
- 关键词：鹰嘴豆SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳种子蛋白
- 鹰嘴豆的RAPD品种鉴定和聚类分析被引量：5
- 2008年
- 用CTAB法提取了6种鹰嘴豆品种总DNA，使用RAPD技术对其进行了品种鉴定。从113种随机引物中筛选出7种扩增较稳定的引物。来扩增6种嘴豆品种总DNA，共扩增出29条带，每种引物扩增出3-7条带；多态性条带共16条，多态性比例为55.17％。利用DPS软件所做的统计分析和聚类分析结果表明6个品种间的相似系数在0.4286-0.8462，平均相似系数为0.6416；可聚成2类：165号、阿克苏号、阿瓦提号可聚为A类；88-1号、176号、185号可聚为B类，同一类品种间体现了一定的相关性。
- 许磊王希东张桦石庆华
- 关键词：鹰嘴豆RAPD聚类分析
- 小麦网腥黑粉菌冬孢子总DNA提取方法比较被引量：2
- 2007年
- 目的:研究提取不同时期小麦网腥黑粉菌冬孢子总DNA的最佳方法。方法:应用改良过的四种方法(CTAB法、SDS-CTAB法、SDS法和尿素法)对小麦网腥黑粉菌冬孢子总DNA进行提取。结果:提取当年小麦网腥黑粉菌冬孢子DNA,纯度(OD260/OD280):CTAB法>SDS-CTAB法>SDS法>尿素法=1.876>1.7815>1.7789>1.6095;产率(μg/g):SDS-CTAB法>SDS法>尿素法>CTAB法=796.25>664>306>291.5。提取15年的小麦网腥黑粉菌冬孢子DNA,纯度(OD260/OD280):CTAB法>SDS-CTAB法>SDS法>尿素法=1.91795>1.8876>1.65985>1.55925;产率(μg/g):尿素法>CTAB法>SDS法>SDS-CTAB法=1529.25>799>687.25>372.5。结论:SDS-CTAB法是提取当年小麦网腥黑粉菌冬孢子DNA的最佳方法。CTAB法是提取15年的小麦网腥黑粉菌冬孢子DNA的最佳方法。
- 郭同军邢巍婷石庆华张桦
- 关键词：CTAB法SDS法尿素法
- 棉花线粒体atp9基因的克隆和转录研究获取渠道分析
- 2012年
- 以三系杂交棉胞质雄性不育系P30A、保持系P30B和恢复系Y18为材料,通过Tail-PCR从可育胞质获得线粒体atp9基因序列,并利用Northern blot分析了atp9基因在棉花幼蕾的的转录情况。结果显示:在三系中atp9基因均存一个0.5 kb的强杂交带和一个1.0 kb的弱杂交带,杂交结果无明显差异;三系中atp9基因编码区共有7个编辑位点,第7个编辑位点密码子由于编辑转变为终止密码子使翻译提前终止;atp9基因在保持系中幼蕾的编辑频率要明显低于不育系和恢复系;发现atp9基因的编辑与棉花胞质形式相关,而且不同的核背景也会影响编辑率,推测线粒体atp9基因与棉花的胞质雄性不育具有一定的相关性,但有待更进一步分析。
- 史计张锐石庆华张晓郭三堆
- 关键词：棉花线粒体TAIL-PCRRNA编辑
- 鹰嘴豆锌指蛋白基因ZF1的克隆及表达分析被引量：6
- 2009年
- 利用一段从PEG胁迫的鹰嘴豆幼苗叶片所构建的cDNA文库中得到的EST序列,通过3′RACE方法克隆到一个鹰嘴豆C2H2型锌指蛋白基因ZF1,该基因不含内含子,编码一条244个氨基酸残基的多肽,含有两个典型的Cys2/His2锌指结构。其氨基酸序列含有一个可能的核定位型号,农杆菌介导的洋葱表皮细胞GFP瞬时表达实验表明,ZF1蛋白位于细胞核内。半定量RT-PCR分析表明,ZF1在鹰嘴豆的根、茎、叶、花、幼荚和幼胚中均有表达,在茎和叶中表达较弱,为组成型转录因子。半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR检测结果显示,ZF1不但受高温及干旱诱导,而且还受6-苄基腺嘌呤(6-BA)、脱落酸(ABA)、乙烯利(Et)、赤霉素(GA3)、吲哚-3-乙酸(IAA)、茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)和氧胁迫诱导。这些结果表明,ZF1基因可能作为一个核调控因子参与植物的生长代谢以及多种生物与非生物胁迫的应答。
- 陈晨彭辉高文瑞石庆华张桦张巨松李建贵麻浩
- 关键词：鹰嘴豆锌指蛋白基因克隆胁迫
