王永生
- 作品数：41 被引量：72H指数：5
- 供职机构：河南农业大学更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 表达PEDV中国变异株S蛋白复制型重组人腺病毒4型的构建及其免疫原性研究被引量：3
- 2018年
- 为构建表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白复制型重组人腺病毒4型(HAdV-4)及评价其免疫原性,本研究利用RT-PCR扩增得到PEDV中国变异株纤突(S)基因的N-末端区域(1 bp^1 140 bp),构建重组质粒p Ad4FAST-Shuttle-S,重组质粒经线性化和同源重组,得到含有PEDV S基因的重组HAdV-4感染性克隆,纯化的感染性克隆DNA经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞,拯救得到表达PEDV变异株S蛋白的重组病毒rAd4△E3-S。将该重组病毒免疫小鼠,间接ELISA测定其血清中抗S蛋白抗体水平,利用体外淋巴细胞转化试验和流式细胞技术检测免疫小鼠T淋巴细胞反应。结果显示,重组病毒能够表达PEDV S蛋白,并且能刺激小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。本实验结果为进一步研究重组病毒在猪体上的免疫反应奠定基础,也为PEDV活载体疫苗的研发提供实验依据。
- 王晓雪刘延珂杨东东吴艳阳高冬生王永生李永涛赵军王川庆张改平
- 关键词：S基因活载体疫苗
- 一种猪伪狂犬病病毒变异株HN-QYY、HN-QYY-gE-及其构建方法和应用
- 本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，公开一种猪伪狂犬病病毒变异株HN‑QYY、HN‑QYY‑gE<Sup>‑</Sup>及其构建方法和应用。猪伪狂犬病病毒变异株HN‑QYY，保藏编号：CGMCC No.15192。猪伪狂犬...
- 陈陆王永生常洪涛石昂王新卫王川庆
- 利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建猪伪狂犬病病毒gE基因缺失疫苗株被引量：7
- 2020年
- 通过对4株伪狂犬病病毒(PRV)流行株进行比较,选择免疫原性最高的HNQYY2012为亲本株,利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统构建带有LoxP位点的HNQYY2012ΔgE/EGFP^+,然后利用环化重组酶(Cre)去除增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因,构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE。PCR鉴定和测序结果表明,PRV gE基因缺失株构建成功;一步生长曲线表明,HNQYY2012ΔgE增殖速度慢于亲本株,但最高滴度与亲本株相近;HNQYY2012ΔgE和亲本株对小鼠的半数致死量分别为10^3.8TCID50和10^2.5TCID50,表明gE基因缺失株毒力降低。制备的灭活疫苗免疫小鼠能完全抵御5LD50和10LD50强毒攻毒。本文利用CRISPR-Cas9技术和Cre/loxP系统成功构建PRV gE基因缺失株HNQYY2012ΔgE,为猪伪狂犬病灭活疫苗的研制提供了参考。
- 史志斌马宁宁刘占王永生陈陆
- 关键词：猪伪狂犬病CRE/LOXP系统免疫效力
- 一种猪伪狂犬病病毒变异株HN-QYY-gE-/TK-的构建方法和应用
- 本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，公开一种猪伪狂犬病病毒变异株HN‑QYY‑gE<Sup>‑</Sup>/TK<Sup>‑</Sup>的构建方法和应用。以HN‑QYY为亲本毒株，依次缺失gE基因和TK基因，获得猪伪狂犬病...
- 陈陆王永生常洪涛石昂王新卫王川庆
- 河南省猪细小病毒2型流行特征和遗传进化分析
- 2024年
- 为了解河南省猪细小病毒2型(PPV2)的遗传进化和流行特征,本试验对2021—2022年河南省不同地区猪养殖场送检的759份临床样品进行PCR检测,选取4份不同地区的PPV2阳性样品,对其进行全基因组测序,并与35条国内外PPV2参考序列进行同源性分析、系统发育分析和重组分析。结果显示,送检临床样品PPV2检出率为15.81%(120/759),与猪细小病毒7型(PPV7)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的混合感染率依次为35.83%、25.00%和20.83%。鉴定的4株PPV2分别命名为PPV2XM-15/2021、PPV2ZMD-20/2021、PPV2ZK-9/2021和PPV2SQ-16/2021。4株PPV2鉴定株的全基因组核苷酸同源性为95.0%~99.7%,处在不同进化分支,亲缘性较远,与35株PPV2参考株的全基因组核苷酸同源性为93.9%~99.8%、NS基因核苷酸和氨基酸同源性均为92.6%~99.8%、Cap基因核苷酸和氨基酸同源性均为88.7%~100%。PPV2ZMD-20/2021株、PPV2ZK-9/2021株和PPV2SQ-16/2021株可能为重组毒株。结果表明,河南省猪场PPV2检出率较高,且与多种病原混合感染,其中与PPV7混合感染最常见;PPV2遗传进化差异较大,存在重组现象,且重组位置不唯一。
- 许夕雅韩紫薇杨寒高冬生王永生陈陆
- 关键词：全基因组遗传进化分析
- 用鸡胚源细胞系繁殖传染性法氏囊病毒制备灭活疫苗和联苗的方法
- 本发明涉及一种用鸡胚源细胞系繁殖IBDV制备疫苗的方法。其主要包括：①制苗用细胞DF-1的传代与培养；②繁殖IBDV HQ株细胞毒种；③繁殖制苗用病毒液；④制苗用毒液的浓缩、灭活；⑤制备新-法、新-支-法、新-支-减-法...
- 王泽霖王川庆赵军陈陆王新卫杨霞常洪涛姚惠霞刘红英王雷王永生
- 文献传递
- 鸡IBDV在微载体微型反应器DF-1细胞系上繁殖特性研究被引量：5
- 2013年
- 对IBDV在微型生物反应器转管DF-1细胞系上繁殖特性进行了较为系统的研究，转管中接种DF-1细胞3×10’个左右，培养6d细胞增至2．4～2．5×10^8个，确定培养6d为最佳接毒时间；病毒的最佳接种剂量为0．78TCID50／细胞（即0．78MOI），最佳收毒时间为接毒后的28h；上清和全悬液毒价呈平行关系，但后者更高，可达10^9.5TClD5.0／mL以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系，在细胞生长期内（6d）平均每个细胞耗糖量为6．5×10μg／24h，可根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量；接毒后糖耗速率的高峰要先于病毒滴度高峰，在糖耗高峰出现后下降至趋于零的瞬间收获，可获得较高毒价的病毒液。在毒价高峰时收获1／2毒液后9h，收获1／3毒液后18h可再次获得最高毒价的毒液，这可能与高密度培养中及时补充新的培养液有关。本试验为IBDVHQ株在生物反应器上大规模培养提供了参考依据。
- 杨霞周欣陈陆王永生赵军王川庆王泽霖
- 关键词：传染性法氏囊病毒
- 两步化学转化法构建猪圆环病毒2型ORF2基因重组腺病毒质粒被引量：3
- 2010年
- 为了利用化学转化法快速构建携带猪圆环病毒2型ORF2基因的重组腺病毒质粒以便获得表达该基因的重组腺病毒,首先把骨架质粒pAdeasy-1通过化学法转化到氯化钙法制备的E.coliB J5183感受态菌中,通过含氨苄青霉素的LB平板筛选出含骨架质粒的阳性菌B J5183/p,再次用化学法把插入有猪圆环病毒2型ORF2基因的穿梭质粒rpShuttle-CMV-276经Pm eⅠ酶切线性化后转化到B J5183/p感受态细胞中进行同源重组,再在含卡那霉素的LB平板上培养,筛选出卡那霉素抗性菌进行质粒抽提纯化,酶切并电泳鉴定,获得重组阳性质粒rPAD-276。结果表明,运用2步化学转化法构建重组腺病毒质粒是一种简便、快捷且容易操作的方法。
- 郭全海陈陆王川庆吴德峰李志娟王永生刘扬科
- 关键词：猪圆环病毒2型ORF2基因
- 一种猪伪狂犬病病毒变异株HN-QYY-gE-/TK-的构建方法和应用
- 本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，公开一种猪伪狂犬病病毒变异株HN‑QYY‑gE<Sup>‑</Sup>/TK<Sup>‑</Sup>的构建方法和应用。以HN‑QYY为亲本毒株，依次缺失gE基因和TK基因，获得猪伪狂犬病...
- 陈陆王永生常洪涛石昂王新卫王川庆
- 文献传递
- 一种表达猪圆环病毒2型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒株及其构建方法
- 本发明属于猪伪狂犬病病毒技术领域，公开一种表达猪圆环病毒2型ORF2基因重组猪伪狂犬病病毒株及其构建方法。所述重组猪伪狂犬病病毒株为rPRV‑gE<Sup>‑</Sup>/TK<Sup>‑</Sup>/ORF2<Sup>...
- 陈陆时庆贺石昂常洪涛王永生王新卫高冬生王川庆
- 文献传递
