王克敏
- 作品数：16 被引量：53H指数：5
- 供职机构：上海第二医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因修饰人肝癌和胃癌“瘤苗”及实验性肿瘤联合基因治疗被引量：1
- 2004年
- 恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定.治疗策略也不下十余种,但何种策略为佳尚无定论.目前采用的策略多数为单一基因治疗,而肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的.本研究建立一种细胞因子基因工程人肝癌和胃癌细胞"瘤苗",用于经手术切除的肝癌或胃癌患者,消灭微小残存癌细胞,并预防复发转移;或用于无手术指征的患者或手术后复发患者的辅助性治疗措施.探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究.首先克隆一系列的治疗基因,构建不同载体及调控元件;然后进行不同基因的联合治疗作用,并与放射治疗相结合;最后还筛选新的肿瘤治疗候选基因,旨在为临床提供更有效的肿瘤基因治疗策略和方案.
- 陈诗书钱关祥夏爱娣张腾飞钱书兵魏道严徐荣婷胡亮王克敏程枫于丽莉杨红英许伟榕唐展云朱敏
- 关键词：瘤苗人肝癌实验性肿瘤联合基因基因修饰
- 实验性肿瘤的联合基因治疗研究
- 2004年
- 恶性肿瘤基因治疗的临床研究已有10余年,但疗效尚未确定.治疗策略也不下12种,但何种策略为佳尚无定论.目前采用的策略多数为单一基因治疗,鉴于肿瘤的发生可能涉及多种基因及多种因素,发病过程也是多步骤的,该研究探索多种基因及因素的配合进行实验性肿瘤的联合基因治疗研究.首先克隆一系列的治疗基因,构建不同载体及调控原件,然后进行不同基因的联合治疗作用,并与放射治疗相结合,最后还筛选新的肿瘤治疗候选基因,旨在为临床提供更有效的肿瘤基因治疗策略和方案.
- 陈诗书夏爱娣钱关祥魏道严王克敏唐展云钱书兵糜军赖冠华杨劲松
- 关键词：实验性肿瘤基因治疗克隆细胞因子MHC分子
- 本科生化综合性实验与设计性试验开设的初探
- 由于生物化学是一门实验性很强的学科,因此生化实验课在生化教学中占据突出地位.随着生命科学迅猛发展,新理论、新技术不断问世,并且现代社会对医务工作者的专业与技能要求的提高,兼之教学设备的改善,生化实验课教学改革已成当务之急...
- 赵涵芳张惠民于丽莉王克敏沈文红
- 文献传递
- 阳离子脂质体介导细胞因子基因对小鼠肝癌抑制的作用被引量：4
- 1999年
- 目的观察阳离子脂质体介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因对小鼠肝癌的抑制作用。方法构建含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒载体，用阳离子脂质体ＬｉｐｏｆeｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导的含细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２的质粒ＤＮＡ分别体外转染小鼠肝癌细胞株ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ，并在荷瘤小鼠体内分别直接注射上述阳离子脂质体－ＤＮＡ复合物，观察瘤体大小及小鼠生存期。结果两种阳离子脂质体介导的细胞因子转染后都具有生物学活性，转染效率为１０％左右，瘤内注射后均能延长荷瘤小鼠的生存期。ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子的治疗效果较佳。结论ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ或ＤＯＳＰＥＲ介导细胞因子ＴＮＦ－ａ及ＩＬ－２基因均具有抑制小鼠肝癌生长、延长荷瘤小鼠生存期的作用，ＤＯＳＰＥＲ的效果较好。
- 王克敏赵宇张景迎夏爱娣陈诗书
- 关键词：阳离子脂质体细胞因子基因转移基因治疗
- 人TNF-α基因修饰成纤维细胞的抗肿瘤研究被引量：9
- 1997年
- 为了探讨人TNF-α基因修饰的成纤维细胞在体内的抗肿瘤作用,本文应用含脑心肌炎病毒(EMCV)内核糖体进入位点(IRES)的双顺反子逆转录病毒载体pGCEN/TNF-α来转导TNF-α基因至小鼠成纤维细胞NIH3T3.人TNF-α基因修饰的成纤维细胞NIH3T3/TNF-α能持续高水平表达TNF-α,在小鼠肝癌H22细胞皮下植入后第3天或第7天,肿瘤部位直接注射2.5×10~5NIH3T3/TNF-α.或1×10~6NIH3T3/TNF-α能明显抑制肿瘤生长(P<0.05),增加小鼠存活率(P<0.025).可见人INF-α基因修饰的成纤维细胞有望成为一种安全、简便且有效的肿瘤生物治疗新途径.
- 赖冠华唐展云王克敏钱关祥陈诗书
- 关键词：成纤维细胞基因修饰肿瘤坏死因子抗肿瘤作用
- 转铁蛋白增强脂质体介导基因对肝癌细胞的转染和表达
- 阳离子脂质体是基因治疗中常用的非病毒载体.其主要优点是不含病毒成分,不会引起机体免疫反应,体内应用安全可靠,但存在着转染效率低、表达时间短的缺点,从而直接影响着肿瘤治疗效果.本文运用转铁蛋白增强脂质体介导外源基因对肝癌细...
- 王克敏赵宇夏爱娣陈诗书
- 文献传递
- 白细胞介素2基因修饰瘤苗治疗胃癌复发转移的初步临床研究被引量：2
- 2004年
- 目的观察白细胞介素2(IL-2)基因修饰人胃癌细胞瘤苗(HG-1/IL-2)治疗胃癌术后复发和/或转移患者的临床安全性,并初步评价其对患者免疫指标的影响和疗效。方法应用基因工程技术,以逆转录病毒载体将人IL-2cDNA转导入HLA-A2阳性的人胃癌细胞株MKN-45,经60Co照射灭活后,制备成HG-1/IL-2。15例胃癌术后复发/转移患者入组。以5次接种为1疗程,接种时间分别在第1、8、15、29和58天,每次于一侧腹股沟和对侧腋部皮下注射。每次接种后严格观察不良反应,并在治疗开始前1周和治疗结束后进行免疫学指标和临床受益评价。结果除1例因疾病快速进展,在接种3次后死于多脏器功能衰竭外,余14例均完成5次接种。接种后发热和注射局部红肿、酸胀感是最常见的反应。治疗后未观察到患者血液、肝肾功能等指标的明显异常。部分患者治疗后血清转铁蛋白、免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM、IL-2等体液免疫和CD3、CD4、CD8等细胞免疫指标有一定程度提高。4例获部分缓解,6例稳定,4例病情进展。结论IL-2基因修饰胃癌细胞瘤苗治疗耐受性好,部分患者体液和细胞免疫指标改善明显。该药物可作为辅助治疗手段,应用于胃癌术后复发转移的综合治疗。
- 张俊朱正纲王克敏王秀玲尹浩然钱关祥陈诗书林言箴
- 关键词：白细胞介素2基因修饰瘤苗胃癌复发肿瘤转移
- 白细胞介素-2基因工程人胃癌细胞瘤苗Ⅰ期临床研究被引量：1
- 2003年
- 目的 评价同种异型 (HLA A2 + )白细胞介素 (IL) 2基因工程人胃癌细胞瘤苗 (HG 1/IL 2 )治疗晚期胃癌的临床安全性并观察其不良反应。方法 应用基因工程技术 ,以逆转录病毒载体介导将人IL 2cDNA转导入人胃癌细胞株MKN 4 5 ,经 10 0Gy60 Co照射灭活后 ,制备成HG 1/IL 2。对 16例晚期胃癌病人施行HG 1/IL 2瘤苗治疗。 5次接种为一疗程 ,接种时间分别在第 1、8、15、2 9和 5 8天 ,每次于一侧腹股沟和对侧腋部皮下注射。剂量分为 4级 ,由初始剂量 1× 10 7/次开始逐级增加 ,每个剂量水平 4例。每次接种后严格观察不良反应 ,并在治疗开始前 1周和治疗结束后进行临床评价 ,同时进行凝血功能、血液生化、肿瘤标记物和相关免疫指标检测。结果 除 1例因疾病属快速进展 ,在接种 3次后死于多脏器功能衰竭外 ,余 15例均完成 5次接种。低热和注射局部红肿、酸胀感是最常见的反应。治疗前后未观察到病人血液学、凝血功能、肝肾功能、血清标志物等指标明显异常。部分病人治疗后血清转铁蛋白、IgG、IgA、IgM ,IL 2等体液免疫指标和CD+ 3 、CD+ 4 、CD+ 8等细胞免疫指标有一定程度提高。结论 在密切观察的前提下 ,HG 1/IL 2基因工程化胃癌细胞瘤苗应用于晚期胃癌的辅助治疗是安全可行的 。
- 王克敏张俊朱正纲王秀玲程枫燕敏尹浩然林言箴钱关祥陈诗书
- 关键词：白细胞介素-2基因工程胃癌瘤苗
- 脂质体介导mIL-12基因与MHCⅠ基因联合对小鼠实验性肝癌的治疗作用被引量：12
- 2002年
- 背景与目的:白细胞介素-12及MHCⅠ基因均已单独用于肿瘤基因治疗。为探索两者的抗肿瘤协同效应,本研究探讨小鼠白细胞介素-12(mIL-12)基因与同种异型的MHCⅠ(小鼠为H-2K)基因联合治疗Balb/C小鼠实验性肝癌。方法:分别应用含mIL-12基因、C57BL/6小鼠H-2KbcDNA及绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的真核表达质粒载体pcDNA3,体外经新型脂质体LipofectAMINE2000(LF2000)介导转染小鼠肝癌细胞株MM45T.Li,检测转染细胞外源基因的表达。将经LF2000介导pcDNA3/mIL-12与pcDNA3/H-2Kb转染的MM45T.Li细胞,注射于小鼠皮下,观察致瘤性的变化。在荷瘤Balb/C小鼠瘤内注射上述脂质体-DNA复合物,观察瘤体生长情况及小鼠生存期的改变。结果:LF2000介导pcDNA3/GFP转染MM45T.Li细胞的最佳条件为脂质体与DNA为3∶1(μg∶μg),转染效率达30%。经LF2000介导pcDNA3/mIL-12与pcDNA3/H-2Kb转染的MM45T.Li细胞,RT-PCR检测有mIL-12和H-2KbcDNA的特异扩增片段,WesternBlot检测显示有57kDaH-2Kb蛋白表达,ELISA检测mIL-12分泌量达48ng/ml/106细胞。经LF2000介导pcDNA3/mIL-12与pcDNA3/H-2Kb转染的MM45T.Li细胞,其致瘤性下降;荷瘤Balb/C小鼠瘤内注射该脂质体-DNA复合物,FACS检测显示小鼠脾脏淋巴细胞中CD3+、CD4+和CD8+的数量治疗组较对照组高,?
- 王克敏夏爱娣陈诗书
- 关键词：白细胞介素-12脂质体
- 用多聚酶链反应诊断弓形虫病被引量：14
- 1992年
- 根据本实验室筛选出的弓形虫(ZS_2株)特异DNA克隆片段的部分顺序分析的数据,设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立多聚酶链反应诊断弓形虫病的方法。不同来源的弓形虫株和7例畸形胎儿DNA经体外基因扩增,扩增产物经电泳检测,均出现特异的扩增条带。对42例肝炎综合症的婴儿和33例不良生育史的孕妇的外周血白细胞DNA检测,分别为6例和4例阳性。50例正常人外周血白细胞DNA检测均为阴性。对扩增产物进行Southern印迹分析,以^(32)P标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针,能与阳性病例特异的扩增条带杂交,而不与阴性样品的扩增产物杂交。本法并与其它检测方法的结果相比较,具高度特异、敏感且快速的优点。
- 夏爱娣王克敏董泰忠张惠民吴兆平陈诗书杨惠珍徐克继钱宗立
- 关键词：聚合酶链反应DNA诊断弓形体病
