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无乳链球菌及其血清型的PCR方法鉴定被引量：3: 2013年; 无乳链球菌(S.agalactiae)是引起奶牛乳房炎和新生儿期侵袭性感染(包括败血症、肺炎和脑膜炎)的重要病原菌。为快速准确地鉴定S.agalactiae及其血清型,本研究对22株从国内不同地区分离的牛源链球菌进行生化鉴定以及针对S.agalactiae保守基因sip进行PCR鉴定,并采用多重PCR技术扩增sip基因阳性菌株的cps基因进行血清分型。结果显示,PCR扩增sip基因阳性17株,其中15株生化试验与PCR结果一致;多重PCR扩增cps基因显示,其中Ia型4株、Ⅱ型11株、Ⅲ型2株。本研究为鉴定S.agalactiae及其血清型提供了参考。; 汤炜周雪于立权吴志军朱战波崔玉东; 关键词：无乳链球菌多重PCR 血清型

大肠杆菌表面展示Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性: 奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(S.aureus)就是其中最主要的致病菌之一。S.aureus引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生...; 张建新汤炜周雪杨汐静韩冰孙虎男于立权朴范泽崔玉东; 关键词：奶牛乳房炎免疫保护; 文献传递

停乳链球菌GapC_(1-150aa)蛋白单克隆抗体的制备及其线性表位鉴定被引量：3: 2015年; 链球菌GapC蛋白是表达于各种链球菌的膜蛋白，具有良好的免疫原性。为研制预防链球菌感染的表位疫苗和研发以单克隆抗体（MAb）为基础的检测试剂盒，本研究利用表达的停乳链球菌GapC蛋白aa1～aa150片段制备了3株MAbs，并利用噬菌体展示技术对这3株MAbs的抗原表位进行分析，获得一个线性表位1377HDILDG142。该研究不仅有助于了解链球菌GapC的免疫保护作用机制，也有助于进一步研究表位疫苗和建立检测方法。; 张丽萌周雪魏玉华樊自尧汤炜代建杨轩张建新杨汐静刘道龙王成王健南于永忠吴志军于立权孙虎男马金柱宋佰芬朱战波崔玉东; 关键词：停乳链球菌 GAPC 单克隆抗体 B细胞抗原表位

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌对四环素耐药性分析被引量：4: 2010年; 为分析奶牛乳房炎中分离的金黄色葡萄球菌(S.aureus)四环素耐药机制,本研究以K-B法和常量肉汤法测定最低抑菌浓度(MIC)值,并对26株奶牛乳房炎S.aureus进行四环素耐药表型检测及加入利血平后的MIC值检测;以PCR检测四环素耐药基因tetM、tetO、tetL和tetK,对扩增产物进行序列分析。检测结果表明:26株菌株中,7株对四环素耐药,19株敏感;利血平能显著降低部分耐药株对四环素的MIC值;在7株耐药菌株中,1株检测出tetM基因,6株检测出tetK基因,没有检测到tetL和tetO基因;tetK基因与S.aureus质粒pT181同源性为100%,tetM基因与转座子Tn916序列同源性为99.9%。实验研究表明,26株奶牛乳房炎S.aureus四环素耐药表型与耐药基因相符,耐药机制以外排蛋白介导为主,并在国内牛源S.aureus中首次检测到tetK基因。; 丁兆凤汤炜佟春玉陈龙欣周雪徐菲一朱战波崔玉东; 关键词：奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌四环素耐药基因

大肠杆菌表面展示Lpp'OmpA-TRAP融合蛋白及其免疫原性: 究拟利用大肠杆菌Lpp'OmpA来表面展示金黄色葡萄球菌(S.aureus)的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎S.aureus疫苗提供数据支持。本研究通过over-lap PCR方法融合了lp...; 张建新汤炜周雪杨汐静韩冰孙虎男于立权朴范泽崔玉东; 关键词：大肠杆菌免疫原性

应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌GapC1的大肠埃希菌被引量：1: 2015年; 目的应用RED同源重组技术构建表面展示链球菌Gap C1-150 aa(Gap C1)的大肠埃希菌,为进一步构建大肠埃希菌表面展示重组菌株奠定基础。方法根据Gen Bank中登录的gap C基因序列(GI:30348860)设计引物,以质粒p KD3、p QE30/lpp-omp A-gap C为模板进行PCR扩增、融合,获得融合片段,转化入含p KD46质粒的大肠埃希菌HB101中,利用p KD46编码的RED系统将融合片段重组入基因组中,经氨苄西林(Amp)和氯霉素(Cm)抗性筛选,获得去除p KD46质粒的重组菌(HB101LOG)。对重组菌株进行PCR、Western blot、流式细胞术、荧光显微镜及生物学特性检测。结果 PCR结果显示,重组菌株构建正确;重组大肠埃希菌HB101LOG在菌体表面表达了外源蛋白Gap C1-150 aa;激光共聚焦显微镜观察到HB101LOG可见明显的绿色荧光,HB101未见绿色荧光;重组菌株HB101LOG和HB101的生长曲线符合大肠埃希菌的生长规律。结论应用RED系统成功构建了能展示链球菌Gap C1-150 aa的大肠埃希菌重组菌株。; 杨汐静张建新陈晓亭汤炜于思淼刘伟姚笛吴志军于立权朱战波崔玉东; 关键词：链球菌大肠埃希菌 RED同源重组

金黄色葡萄球菌TraP蛋白单克隆抗体制备被引量：2: 2012年; 研究通过骨髓瘤细胞SP2/0与经金黄色葡萄球菌(S.aureus)TraP蛋白免疫的小鼠脾细胞融合,并进一步筛选和单克隆化,获得了11株稳定分泌抗TraP蛋白的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,其中8株McAb(2A1、3A6、3B1、1B4、2C5、4C7、5C3和2D8)亚类为IgG1,3株McAb(2A7、3A1和1C4)亚类为IgM,轻链均为κ链。8株IgG1型McAb的小鼠腹水的抗体效价均达到1∶128 000,交叉实验结果显示这8株McAb不与S.aureus的ClfA、ClfB、Cna、FnbPA和IsdB蛋白以及链球菌的GapC蛋白反应,具有良好的特异性,Western-blotting结果显示这8株McAb识别的都是TraP的线性表位。; 周雪范志勇汤炜张丽萌李闰婷周瑜崔玉东; 关键词：金黄色葡萄球菌 TRAP 单克隆抗体

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汤炜