林方昭
- 作品数：85 被引量：139H指数：7
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院输血研究所更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划国家公益性行业科研专项成都市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程哲学宗教更多>>
- 年轻血液抗衰老研究的最新进展
- 窦苗苗王宗奎林方昭李长清
- 国产静脉注射人免疫球蛋白制品中凝血激活物水平分析被引量：2
- 2015年
- 目的分析11家中国血液制品企业共计64批次上市后的静脉注射人免疫球蛋白（immunoglobulin for intravenous injection,IVIG）（p H 4）制品中凝血激活物水平,对国内IVIG制品在促凝血方面的安全性作出评估,为提高制品质量标准提供参考。方法利用非活化的部分凝血活酶时间法（non-activated partial thromboplastin time,NAPTT）、凝固法（一期法）及本实验室建立的改良凝血酶生成试验（modified thrombin generation test,M-TGT）,分别测定64批次国产和7批次进口IVIG样品的NAPTT、系列凝血因子活性、活化凝血因子Ⅺ（FⅪa）的含量及凝血酶生成含量达到最高值时所需时间（time to peak,TTP）,分析IVIG的凝血激活物水平。结果除国内厂家F所生产的2批IVIG中FⅪ活性为0.030～0.036 IU/ml外,其余国产62批次产品中FⅪ活性均低于试剂最低检测限未检出;所有产品中TTP均大于40 min,FⅪa含量均小于0.37 nmol/L,NAPTT均大于203 s。结论所调查的11家共计64批次的国产IVIG制品的凝血激活物水平均较低。今后在我国是否推行IVIG制品的凝血激活物检测尚需进一步研究。
- 孙盼马莉袁婧林方昭刁戈李长清
- 关键词：静脉注射人免疫球蛋白安全性
- 洗涤条件不同因素及其水平对凝血酶原复合物的影响研究被引量：1
- 2012年
- 目的探讨凝血酶原复合物制备过程洗涤条件中不同因素及其水平对凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ收率及比活的影响。方法选择DEAE-SephadexA-50凝胶洗涤液中柠檬酸钠、氯化钠、pH3种可变因素,每因素取3水平,设计正交试验,配制9种洗涤液,进行9组实验。9等份A-50凝胶干粉平衡处理后,按每克凝胶干粉1.60L的比例,分别加入等量健康人混合去冷沉淀血浆,4～6℃条件下,搅拌吸附凝血因子;吸附后A-50凝胶分别用对应的洗涤液洗涤3次后洗脱,收集洗脱液获得凝血酶原复合物浓缩物,重复3次实验。检测洗脱液蛋白浓度及凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ活性,计算不同洗涤条件制备的凝血酶原复合物浓缩物中凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的收率及比活。
- 曹海军叶生亮王宗奎杜晞张学俊林方昭李长清
- 关键词：凝血酶原复合物冷沉淀柠檬酸钠蛋白浓度
- 低温乙醇法影响蛋白C的抗凝活性的研究
- 2012年
- 目的人血浆蛋白C(protein C,PC)是在肝脏中合成的一种维生素K依赖性的丝氨酸蛋白酶原,是体内重要的抗凝剂。Cohn组分Ⅳ(Cohn FractionⅣ,CFⅣ)是常规工业化血浆蛋白生产过程(低温乙醇法)中的副产物,其中包含了血浆中大约90%的蛋白C。调查3批次低温乙醇法生产血浆蛋白的原料血浆和产生的CFⅣ中的蛋白C的抗原含量、酰胺酶活性和抗凝活性,分析低温乙醇法是否影响蛋白C的抗凝活性。方法将CFⅣ按1∶10(w/v)加入20mmol/L的枸橼酸钠缓冲液,4℃搅拌5h,抽提出CFⅣ中的蛋白C,并尽可能多的挥发其中的乙醇后,离心(4℃,6500g),弃去沉淀。
- 王宗奎杜晞王玉梅李长清曹海军林方昭袁靖张学俊叶生亮胡吉军
- 关键词：抗凝活性血浆蛋白酰胺酶枸橼酸钠丝氨酸蛋白酶
- 3个厂家静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性评价
- 2012年
- 目的实验考察了3个厂家、15个批次静注人免疫球蛋白(人IgG)的Fragment crystallizable region(Fc段)生物学活性,初步分析可能影响静注人IgG Fc段活性的因素。研究对静注人IgG制品的有效性和安全性做出评估,为建立新的静注人IgG制品质量标准提供理论依据。方法选用Oct公司静注人IgG2个批次、GT公司静注人IgG6个批次和ST公司静注人IgG7个批次,通过麻疹腮腺炎风疹联合减毒活疫苗抗原敏化红细胞的溶血反应动力学曲线测定,计算人IgG激活补体活性功能指数,以此测定制品Fc段生物学活性。结果实验进行3次测定,定义Oct2为100%,计算各个样品平均值和数值标准差。
- 张学俊周琼秀田力刘彬林方昭袁靖李长清
- 关键词：FC人免疫球蛋白减毒活疫苗溶血反应
- 血型、年龄、性别及保存时间对血浆中凝血因子Ⅷ和纤维蛋白原水平的影响
- ＜正＞目的系统分析ABO血型系统、年龄、性别及保存时间等对血浆中FⅧ活性和Fbg含量的影响。方法用凝固法检测121份不同血型、年龄、性别的正常献浆者的新鲜冰冻血浆（FFP）中FⅧ活性和Fbg含量。10份非O型的血浆分别在...
- 王宗奎杜唏李长清曹海军马莉孙盼林方昭叶生亮
- 文献传递
- 去冷沉淀血浆质量分析被引量：1
- 2012年
- 目的比较去冷沉淀血浆(CRP)制备前后系列凝血因子、纤维蛋白原(Fib)和血管性血友病因子裂解蛋白酶(AD-AMTS13)质量变化。方法运用Biggers一期法测定140人份新鲜冰冻血浆(FFP)和CRP中FⅡ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ促凝活性水平;采用免疫比浊法测定上述样本中Fib和血管性血友病因子抗原因子活动度(vWF∶Ag)水平;运用荧光共振能量转移法(FRET)测定70人份FFP和CRP中的血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13)水平。同时比较了上述检测指标两者间的差异。结果与FFP比较,CRP中FⅧ∶C、Fib、vWF∶Ag水平分别为(20±10)%、(151±42)mg/dl、(15±9)%(P<0.01);
- 马莉孙盼林方昭刁戈李剑平张红抑刘建强张心声柏则蓉周静宇黎美君李长清
- 关键词：冷沉淀免疫比浊法凝血因子促凝活性FRET
- 人D-二聚体分离纯化及鉴定
- 2013年
- 目的分离纯度较高和人D-二聚体(D-dimer),为制备抗人D-二聚体单克隆抗体提供可靠抗原。方法以凝血酶、凝血因子等处理人纤维蛋白原,得到交联纤维蛋白,经纤溶酶消化,得到交联纤维蛋白降解产物(FDP);对FDP作Sephacryl S-300凝胶过滤层析和聚焦层析,分离纯化得到D-dimer。采用免疫比浊法测定D-dimer含量、染料结合法测定纯化蛋白含量,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)观察D-dimer的纯化情况,WestonBlot法确认D-dimer的存在。结果制备得到的FDP SDS-PAGE图谱显示有多条蛋白条带,1条分子量为180～250kD蛋白条带在Western Blot图谱中显示可以被D-dimer单克隆抗体特异性地识别。FDP经Sephacry S-300凝胶层析和聚焦层析后得到纯度较高的D-dimer(n=3):总蛋白含量比为(77.82±7.98)%,蛋白回收率(25.27±6.35)%;SDS-PAGE图谱显示:经过两步层析得到的终产物为分子量180～250 kD的蛋白;Western Blot证实:经过Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析处理,最终得到分子量为180～250 kD的终产物可被D-dimer单克隆抗体特异性识别。结论采用Sephacryl S-300凝胶层析和聚焦层析能够分离纯化获得较高纯度的D-dimer,可作为制备D-dimer单克隆抗体的抗原。
- 苏娜林方昭李长清马莉肖薇肖小璞
- 关键词：D-二聚体凝胶层析
- 毛细管区带电泳用于血浆蛋白质混合物的分析被引量：2
- 2012年
- 目的探索建立采用毛细管区带电泳(CZE)法分析血浆相关蛋白质的条件和方法。方法 1)以血浆COHN法组分Ⅳ(CFⅣ)抽提液为样品,代表蛋白质混合物,分别从波长、基本缓冲液、添加剂、PH、温度等方面,摸索CEZ分析蛋白质混合物的较优条件和方法;2)将摸索得到的较优条件下的CZE分析CFⅣ抽提液的结果,并与通过高效液相色谱(HPLC)法、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法及双向电泳(2-DE)法分析CFⅣ抽提液的结果比较;3)采用较优条件下的CZE法分析标准血浆、标准血浆经离子交换层析(IEC)的FⅧ粗提液等,考察该条件是否适用于血浆中的其他组分。结果 1)CZE法分析CFⅣ抽提液的较优条件为:20℃以214 nm紫外吸收波长,0.5 psi压力进样10 s,10 kV恒压分析50 min,缓冲体系为pH 9.0的0.04 mol/L硼酸硼砂、0.05%SDS、0.007 5%腐胺;2)采用此条件的CZE法分析CFⅣ得到14个蛋白峰、分析时间50 min,HPLC法分析得到10个蛋白峰、分析时间60 min,SDS-PAGE法分析得到11条蛋白条带、分析时间120 min,2-DE法分析得到14个蛋白点数(与CZE分析的蛋白峰数数量相同)、分析时间3 d;3)CZE法用于标准血浆、标准血浆经离子交换层析的FⅧ粗提液的分析可分别分辩出22和11个蛋白峰。结论以CZE法分析血浆相关蛋白混合物与现有分析方法比较,能达到较好的分析效果,经摸索确定的较优分析条件具有一定的通用性。
- 魏薇李长清林方昭杜晞张学俊肖小璞
- 关键词：毛细管区带电泳血浆蛋白质高效液相色谱
- 凝血因子Ⅶ的基因多态性与疾病相关性研究进展
- 凝血因子Ⅶ(FⅦ)作为外源性凝血途径的启动因子，在凝血机制中发挥着关键的作用，而FⅦ基因的突变又可导致常染色体隐性遗传病——FⅦ缺乏症。近年来，随着冠心病发病率的逐年增加，大量的临床和基础研究开始投向FⅦ与冠心病的关联上...
- 王丽洁林方昭肖小璞
- 关键词：冠心病发病机制基因多态性
