杨雯
- 作品数：11 被引量：35H指数：4
- 供职机构：蚌埠医学院更多>>
- 发文基金：安徽省教育厅重点项目国家重点基础研究发展计划广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 抗弓形虫药物的研究进展被引量：10
- 2014年
- 刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种能引起人畜共患的机会致病性孢子虫,可感染人及多种恒温动物,严重威胁着人类健康和畜牧业的发展,然而至今仍没有理想的治疗弓形虫病的药物。本文对具有抗弓形虫活性的西药、中药、新型生物制剂的治疗效果、毒副作用及复发率等方面进行综述,为开发新型毒副作用小、疗效显著的抗弓形虫药物提供理论参考。
- 王旗杨雯杨小迪陈兴智
- 关键词：弓形虫
- 西咪替丁伍用弓形虫ROP2蛋白免疫小鼠诱导免疫反应的初步研究被引量：8
- 2013年
- 目的观察西咪替丁伍用弓形虫棒状体蛋白2(ROP2)免疫小鼠诱导的免疫反应。方法 80只BALB/c小鼠随机分为A组、B组、C组和D组,各组分别经皮下注射PBS、弓形虫ROP2蛋白+PBS、弓形虫ROP2蛋白+福氏佐剂和弓形虫ROP2蛋白+西咪替丁[200 mg/(kg.d)]免疫BALB/c小鼠,每次ROP2蛋白免疫剂量为100μg/只(200μl),共免疫3次,每次间隔2周。于首次免疫前和每次免疫后2周,采血分离血清。末次免疫后2周,每组小鼠随机处死8只,无菌分离脾细胞,CCK-8法测定淋巴细胞增殖活性。流式细胞术检测小鼠全血T细胞亚群。ELISA法检测小鼠血清IgG抗体和γ干扰素(IFN-γ)水平。各组剩余12只小鼠经腹腔感染弓形虫RH株速殖子(5×104个/鼠),观察攻击感染后小鼠生存时间。结果末次免疫后2周,A、B、C和D组小鼠的血清IFN-γ水平分别为(659.750±239.962)、(872.750±197.011)、(1 600.750±480.680)和(1 494.375±451.655)pg/ml,血清特异性IgG抗体水平分别为0.504±0.078、0.592±0.160、1.068±0.111和1.046±0.147,脾细胞增殖活性分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,外周血CD4+/CD8+比值分别为0.504±0.078、0.592±0.160、0.831±0.130和0.762±0.089,C和D组均显著高于A和B组(前3个指标,均P<0.01;后者,均P<0.05),D组与C组的差异均无统计学意义(P>0.05)。各免疫组弓形虫攻击感染后,A、B、C和D组小鼠的生存时间中位数分别为96、108、132和132 h,C组和D组小鼠平均存活时间显著长于A组和B组(P<0.05),D组与C组的相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论西咪替丁可增强ROP2蛋白诱导的细胞免疫和体液免疫反应。
- 陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新
- 关键词：刚地弓形虫西咪替丁蛋白疫苗
- 刚地弓形虫SAG3基因体外扩增及生物信息学分析被引量：2
- 2009年
- 目的获取刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株表面抗原SAG3目的基因片段,对其结构和功能进行生物信息学分析,预测其编码蛋白作为候选抗原基因的可行性。方法提取弓形虫的基因组DNA,自行设计一对寡核苷酸引物,PCR体外扩增SAG3基因,用生物信息学方法对SAG3蛋白的理化性质、结构和功能进行预测。结果扩增出的基因片段约1174bp,测序后鉴定其为弓形虫RH株SAG3基因片段。预测SAG3蛋白相对分子质量约为41785.2,能形成两个功能结构域,氨基酸序列的前38(或39)位为信号肽序列。通过多种预测方法分析SAG3氨基酸序列抗原表位可能位于第10、50、80、95、160、180、220、250、300、330和360位点内或附近。结论成功获得SAG3基因,为深入研究该基因结构奠定了基础。
- 杨雯朱穗京田春林王卫群刘晓泉
- 关键词：刚地弓形虫体外扩增生物信息学分析
- 三种免疫调节剂增强弓形虫重组ROP2疫苗保护效应的研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察弗氏佐剂(Freund’s Adjuvant,FA)、匹多莫德(Pidotimod,PT)和西咪替丁(Cimetidine,CIM)等3种免疫调节剂增强重组弓形虫棒状体蛋白2(rROP2)疫苗的免疫保护效应。方法将100只BALB/c小鼠随机分为PBS对照组、重组rROP2疫苗组、FA-rROP2疫苗组、PT-rROP2疫苗组和CIM-rROP2疫苗组等5组;FA、PT和CIM分别与rROP2抗原混合皮下注射免疫,检测小鼠细胞免疫和体液免疫指标,并观察弓形虫RH株攻击感染后的生存时间。结果 FA-rROP2组、CIM-rROP2组小鼠血清IFN-γ、特异性IgG、脾细胞增殖活性及外周血CD4+/CD8+比值均显著高于rROP2蛋白组(P<0.05);PT对外周血CD4+/CD8+比值无明显影响,但显著增加了IFN-γ的水平及脾细胞增殖活性。小鼠攻击试验表明,FA-rROP2组、PT-rROP2组以及CIM-rROP2组小鼠存活时间显著长于rROP2组和PBS对照组组;rROP2蛋白组各项指标均显著高于PBS组(P<0.05)。结论 FA、PT和CIM可增强rROP2蛋白抗原诱导的细胞免疫和体液免疫反应,都能延长攻击感染小鼠的生存时间,具有增强rROP2蛋白疫苗保护效应的功能。其中CIM的佐剂样免疫促进作用接近于FA,但副作用显著低于后者,具有临床实用的潜在价值。
- 陈兴智杨小迪杨雯陈勇刘丽丽沈继龙孙新
- 关键词：弓形虫匹多莫德西咪替丁免疫佐剂
- 弓形虫表面抗原SAG4基因的克隆、表达和鉴定被引量：4
- 2009年
- 目的对弓形虫表面抗原SAG4基因进行克隆、表达和免疫反应性分析。方法根据弓形虫RH株SAG4基因序列(GenBank登录号为AF340224.1)设计引物,体外扩增目的基因,并将其克隆至pMD19-T载体,经PCR和双酶切鉴定并测序,亚克隆至pET28a(+)质粒,转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析SAG4重组蛋白的表达情况,蛋白质印迹(Westernblot-ting)分析该蛋白与弓形虫慢性感染小鼠血清的免疫反应性。结果扩增获得的目的基因片段为537bp。生物信息学分析表明重组基因编码产物为弓形虫SAG4抗原,是一种外膜蛋白。重组菌经IPTG诱导后,以包涵体的形式稳定表达SAG4。Westernblotting分析结果表明,诱导表达的蛋白能被弓形虫慢性感染小鼠血清识别,其相对分子质量(Mr)约为18740。结论重组蛋白SAG4有一定的免疫反应性。
- 杨雯万孝玲田春林王卫群刘晓泉
- 关键词：弓形虫克隆表达免疫反应性
- 弓形虫表面抗原SAG3和SAG1基因的克隆表达、纯化及鉴定
- 目的:运用PCR体外扩增法获取弓形虫表面抗原SAG3和SAG1目的基因片段,构建重组表达质粒pET29a/(+/)-SAG3和pET29a/(+/)-SAG1,分别在大肠埃希菌/(Escherichia coli/)中诱...
- 杨雯
- 关键词：弓形虫SAG1纯化抗原性
- 文献传递
- 一种自制的小鼠断尾采血简易装置被引量：6
- 2013年
- 目的:探讨自制简易新装置对小鼠断尾取血的采血效果,建立简易、安全、方便、省时的小鼠采血方法。方法:用废弃的50 ml离心管、纸盒、纱布等制作2个采血装置,并列固定于同一6孔板上,对50只6～8周龄的昆明系小鼠进行重复4次断尾采血。结果:自制的固定装置价格低廉、制作简单、操作灵活,并可同时为2只小鼠采血,采血量可达0.25～0.50 ml,实验中小鼠无伤残、无死亡。结论:自制的小鼠固定装置采血量高、安全性好,是理想的小鼠断尾采血装置。
- 崔洁朱玲玉陈兴智赵新秀胡小冬胡守锋杨雯
- 关键词：采血小鼠断尾
- 二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外抗弓形虫速殖子的实验研究被引量：2
- 2013年
- 目的观察二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外对弓形虫RH株速殖子杀伤作用,探讨该药抗弓形虫的效果与机制。方法将二(喹唑啉-4-基)二硒醚,(下称药物)浓度分为4组,即生理盐水对照组(A组)、药物浓度为0.05μg/mL(B组)、0.5μg/mL(C组)、5.00μg/mL(D组),分别加入到含弓形虫速殖子(含虫体4×106个/mL)的24孔培养板中,于1h、2h、4h后收集弓形虫速殖子,以Trypan blue染色法检测弓形虫着色率;C组和A组以MTT法检测弓形虫活性,Giemsa染色法观察虫体形态和结构变化,透射电镜观察弓形虫速殖子超微结构。结果不同浓度(0.05μg/mL、0.5μg/mL、5.00μg/mL)弓形虫经二(喹唑啉-4-基)二硒醚作用1h后的着色率分别为5.00%、26.70%和99.50%,作用2h后的着色率分别为22.00%、98.70%和100.00%,作用4h后的着色率分别为58.30%、100.00%和100.00%;生理盐水组1h、2h、4h后的着色率分别为1.0%、1.20%和1.70%。0.5μg/mL浓度药物组,MTT检测弓形虫活性,OD值随时间延长增长率明显低于生理盐水对照组(P<0.05);Giemsa染色观察,弓形虫速殖子随着时间的延长,逐渐出现肿胀,两端变圆,虫体坏死现象;透射电镜观察随着时间延长,逐渐出现虫体肿胀,胞膜与基质之间空隙明显,越来越多和大的空泡形成,胞膜出现断裂,内部结构溶解模糊。结论二(喹唑啉-4-基)二硒醚体外可部分或全部杀死弓形虫,效果与时间、剂量相关。
- 陈兴智杨雯杨小迪王旗夏惠刘刚沈继龙
- 关键词：刚地弓形虫速殖子体外
- 抗弓形虫药物研究新进展被引量：2
- 2009年
- 弓形虫是重要的机会性感染病原体,可导致人兽共患弓形虫病,目前尚未找到理想的治疗药物。本文综述了抗生素类药物、其它类化学药物、生物制剂及中药抗弓形虫作用的最新研究进展,对抗弓形虫药进行了总结。其中复方中药在治疗急性弓形虫病有很大的应用价值,西药联合用药,可适当减少药量、降低不良反应和耐药性的产生,治疗效果明显优于单独用药。
- 朱穗京田春林杨雯
- 关键词：弓形虫药物
- 弓形虫表面抗原SAG1基因的克隆表达、纯化与鉴定被引量：4
- 2010年
- 目的:构建弓形虫SAG1基因原核表达质粒,诱导表达重组蛋白SAG1,分离纯化并检测其免疫反应性。方法:设计一对特异引物,体外扩增SAG1目的基因(双酶切纯化后)定向克隆至质粒pET29a(+)中,转化到大肠埃希菌(Escherichia coli)BL21,采用PCR、双酶切和测序等方法鉴定,并以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况,经镍离子柱纯化重组蛋白后,用蛋白质印迹(Western blotting)分析与小鼠弓形虫阳性血清的免疫反应性。结果:重组质粒经PCR、双酶切反应和测序鉴定,产物的大小与结构均与预期值相符,经IPTG诱导后,稳定表达相对分子量(Mr)为28950的蛋白,纯化后的重组蛋白经Western blotting分析显示,与小鼠弓形虫感染血清有特异性反应条带。结论:成功构建重组表达质粒pET29a(+)-SAG1,使弓形虫表面抗原SAG1在体外获得表达,分离纯化的SAG1重组蛋白有免疫反应性。
- 杨雯田春林朱穗京刘晓泉
- 关键词：弓形虫SAG1基因克隆表达免疫反应性
