- 我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA体外RNA转录物感染性的研究被引量：2
- 2000年
- 目的 :研究我国登革 2型病毒 4 3株 (D2 4 3)基因组全长cDNA体外RNA转录物的感染性 ,为进一步阐明登革 2型病毒的致病机制及探索其新型疫苗奠定基础。方法 :用SP6RNA聚合酶系统制备D2 4 3基因组全长cDNA的体外RNA转录物 ,纯化后经电穿孔法转染C6/ 36细胞 ,观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总RNA ,通过RT PCR扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为RNA转录物感染所致 ;同时收集可产生细胞病变的培养上清 ,再感染C6/ 36细胞以进一步证实该体外RNA转录物感染的稳定性。结果 :以我国D2 4 3病毒株基因组全长cDNA为模板制备的体外RNA转录物可使C6/ 36细胞产生病变 ,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论 :构建的我国D2 4 3株基因组全长cDNA的体外RNA转录物对传代蚊细胞具有感染性 ,表明可产生完整的病毒颗粒。本研究可为阐明登革 2型病毒的致病机制及探索新的预防和治疗措施奠定基础。
- 欧武秦鄂德于曼杨翠红杨佩英
- 关键词：登革热病毒全长CDNA体外转录感染性
- HCV NS3丝氨酸蛋白酶分子间及与其辅助因子NS4A分子间相互作用的研究
- 1998年
- 丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）非结构蛋白ＮＳ３丝氨酸蛋白酶位于ＮＳ３Ｎ端，对病毒前体蛋白的加工和病毒成熟具有重要作用。目的：用近年来发展起来的检测蛋白分子间相互作用的酵母双杂交系统，证实ＮＳ３分子间及与其辅助因子ＮＳ４Ａ分子间存在相互作用。为进一步建立酵母三杂交系统，用以检测针对ＮＳ３的寡肽小分子对ＮＳ３丝氨酸蛋白酶活性的竞争抑制作用奠定基础；并用计算机系统分析ＮＳ３及ＮＳ４Ａ参与分子间相互作用的可能区段，为抗ＨＣＶ的寡肽小分子药物的研究提供依据。方法：用异硫氰酸胍一步法提取病毒ＲＮＡ，经ＲＴ－ＰＣＲ扩增ＮＳ４Ａ基因片段。目的基因片段双酶切后定向克隆构建双杂交质粒ｐＧＰＴ９－ＮＳ３、ｐＧＡＤ４２４－ＮＳ３和ｐＧＢＴ９－ＮＳ４Ａ，然后转化酵母双杂交系统，分别以Ｘ－ｇａｌ和ＯＮＰＧ为底物对蛋白相互作用作定性和定量检测。蛋白疏水性和二级结构分析采用计算机软件进行。统计学处理采用ｔ检验。结果：ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ均出现蓝色反应，表明ＮＳ３／ＮＳ３分子间及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间的确存在相互作用，定量分析表明前者相互作用强于后者（Ｐ＜０．０５）。计算机分析结果显示，ＮＳ３参与分子间相?
- 欧武朱千政朱千政邓小艺于曼杨翠红于曼
- 关键词：NS3丝氨酸蛋白酶NS4A相互作用
- 人胃癌差异表达基因片段的分离与测序被引量：1
- 1999年
- 目的:肿瘤差异表达基因在肿瘤的发生发展中起重要作用,胃癌在我国全部恶性肿瘤死亡构成比中居第一位,本文拟钓取人胃癌差异表达基因片段,探讨胃癌发生发展的机制.方法:应用最新分离差异基因的mRNA差异显示技术,优化反应条件对人胃癌组织中差异表达的基因片段进行分离,测序和Northem验证.结果:获得经Northem杂交证实的在胃癌组织中表达的两个cDNA片段scg1和scg2,序列分析表明长度分别为194bp和343bp,同源性比较结果显示scg1和scg2与GenBank中已发表基因序列均无同源性.结论:本研究初步证实scg1和scg2可能是人胃癌组织中表达的新基因片段,推测与人胃癌发生发展相关.检测全长cDNA序列的深入工作正在进行中.
- 杨翠红朱千政钱振超欧武杨佩英
- 关键词：MRNA基因克隆胃肿瘤
- 凝集素依赖的LAK细胞介导的肿瘤细胞凋亡被引量：16
- 1995年
- 作者采用ＤＮＡ电泳及荧光染色流式细胞仪（ＦＡＣＳ）分析方法，检测了凝集素依赖的ＬＡＫ细胞介导的肿瘤细胞死亡机制。在体外以白血病和实体瘤细胞系为靶细胞，在１μ／ｍｌ的凝集素美洲商陆（ＰＷＭ）存在下，人ＬＡＫ细胞在４小时之内就可诱导这些肿瘤细胞（Ｕ９３７细胞、Ｒａｊｉ细胞，ＳＷ１１１６细胞和Ｈｅｐ２细胞），出现以ＤＮＡ断裂成不连续的片断为特征的细胞调亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）现象。用ＲＮＡ及蛋白合成抑制剂预处理靶细胞并不能阻断其ＤＮＡ断裂。ＦＡＣＳ分析显示在ＰＷＭ存在下ＬＡＫ细胞诱导靶细胞凋亡的程度高于ＬＡＫ细胞单独使用时。而且实验提示ＬＡＫ细胞在与靶细胞相互作用的同时，也会部分地发生细胞死亡。以上结果表明诱导靶细胞凋亡是ＬＡＫ细胞在凝集素存在下杀伤肿瘤细胞的有效手段之一，由此为提高ＬＡＫ细胞疗效提供了新的实验依据。
- 董海东邢嵘郭连英杨翠红钱振超
- 关键词：凝集素LAK细胞细胞凋亡肿瘤细胞凋亡
- 我国登革2型病毒43株基因组全长cDNA的构建被引量：2
- 2001年
- 目的 构建我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA ,为进一步研究其体外RNA转录产物的感染性 ,阐明致病机理及探索新型疫苗奠定基础。方法 根据登革 2型病毒参考株NGC株的核苷酸序列 ,利用DNASTAR软件设计覆盖登革 2型病毒 43株基因组的 6对重叠引物。从感染登革 2型病毒 43株的乳鼠脑中提取病毒基因组RNA ,采用RT PCR分别扩增 6条基因片段 ,并将其分别与pGEM T载体进行连接。重组质粒用PCR进行快速鉴定 ,并在 377A型自动测序仪进行序列分析。然后利用单一酶切位点 ,分别自阳性重组子上切下各基因片段 ,在体外分别进行 5′半分子和 3′半分子的连接 ,最后将 5′和 3′半分子连接成基因组全长的cDNA。扩增各接头两侧长约 45 7～ 6 91bp的基因片段 ,连接至T载体后测序 ,从而对全长cDNA进行鉴定。结果 共扩增出 6条约 1 5～ 2 5kb的基因片段 ,并在体外进行连接 ,获得了全长cDNA。结论 通过测序证实成功地构建了我国登革 2型病毒 43株基因组全长cDNA分子。本研究结果将为阐明我国登革病毒株的毒力及致病机理奠定基础。
- 欧武秦鄂德杨翠红杨佩英于曼
- 关键词：登革病毒感染基因组全长CDNA登革病毒
- 人胃癌差异表达的肿瘤相关抗原基因的分离与测序
- 杨翠红
- 关键词：胃癌肿瘤相关抗原MRNA差异显示
- PHA与rIL-2共同预刺激人PBMC细胞凋亡及其对PHA-LAK细胞培养增殖的影响
- 杨翠红
- 表达纯化的HCV NS3丝氨酸蛋白酶活性的体外分析
- 1998年
- 丙型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ，ＨＣＶ）属于黄病毒科，是单链正股ＲＮＡ病毒。病毒基因组全长约９．３ｋｂ，只有一个开放阅读框，编码一条长约３０１０个氨基酸的前体蛋白。前体蛋白可加工成为Ｃ、Ｅ１、Ｅ２、ｐ７、ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ５４Ａ、ＮＳ...
- 欧武杨佩英秦鄂德杨翠红
- 关键词：NS3丝氨酸蛋白酶活性
- 由构建的基因组全长cDNA所回收的我国登革2型病毒株的鉴定被引量：1
- 2001年
- 目的由构建的病毒基因组全长cDNA回收具有感染性的我国登革2型病毒株,为进一步阐明登革2型病毒的致病机制及其新型疫苗的研制奠定基础。方法用SP6RNA聚合酶系统制备我国登革2型病毒D2-43株基因组全长cDNA的体外RNA转录物,纯化后经电穿孔法转染C6/36细胞,观察致细胞病变作用以判断其感染性。从病变的细胞和培养上清中提取总RNA,通过RT-PCR扩增及克隆测序的方法证实细胞病变确为RNA转录物感染所致。同时收集可产生细胞病变的培养上清,再感染C6/36细胞以进一步证实所回收的登革2型病毒感染的稳定性。结果以我国D2-43病毒株基因组全长cDNA为模板制备的体外RNA转录物可使C6/36细胞产生病变,从病变细胞和培养上清中可扩增获得病毒特异的基因片段。在培养细胞中进行连续传代仍可产生细胞病变作用。结论构建的我国D2-43株基因组全长cDNA的体外RNA转录物对传代蚊细胞具有感染性,表明可产生完整的病毒颗粒。本研究可为阐明登革2型病毒的致病机理及探索新的预防和治疗措施奠定基础。
- 欧武秦鄂德于曼杨佩英杨翠红
- 关键词：登革病毒全长CDNA体外转录感染性
- HCV NS3 N 末端部分氨基酸缺失对NS3/NS3与NS3/NS4A分子间相互作用的影响被引量：5
- 1998年
- 目的旨在弄清ＮＳ３参与分子间相互作用的确切区段，为研究针对ＮＳ３的抗ＨＣＶ寡肽小分子药物的设计提供依据。方法参照ＨＣＶ中国河北株序列设计ＮＳ３引物，将其Ｎ末端的前１５个和前３０个氨基酸分别缺失掉。然后用酵母双杂交系统检测ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用强度在缺失前后的变化，从而判明ＮＳ３Ｎ末端氨基酸在分子间相互作用中的意义。核苷酸序列分析采用ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ３７３Ａ型自动测序仪。结果ＮＳ３Ｎ末端氨基酸缺失前后，ＮＳ３／ＮＳ３分子间及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用的强度相差有显著性（Ｐ＜０．０１），但缺失１５个氨基酸和缺失３０个氨基酸对上述相互作用强度的影响差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论ＮＳ３Ｎ末端的１～３０个氨基酸在ＮＳ３／ＮＳ３及ＮＳ３／ＮＳ４Ａ分子间相互作用中有一定意义，其Ｎ末端前１５个氨基酸（ＡＰＩＴＡＹＳＱＱＴＲＧＬＬＧ）对于分子间相互作用更为关键。本研究结果将为抗ＮＳ３丝氨酸蛋白酶活性的寡肽抑制物的研究打下基础。
- 欧武杨翠红朱千政朱千政于曼于曼杨佩英
- 关键词：NS3寡肽药物设计
