杨海儒
- 作品数：6 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 含HIV-1 env基因的质粒DNA及重组腺病毒载体疫苗的研究
- 自从上世纪80年代发现HIV以来,科学家一直在进行HIV疫苗的研究,但是由于HIV高度的基因变异性和其独特的特性,直到现在仍然没有有效的疫苗问世,HIV给人类医学带来了巨大的挑战。研制出一种安全、有效、价廉的艾滋病疫苗来...
- 杨海儒
- 关键词：HIV-1细胞免疫反应体液免疫反应
- 文献传递
- 表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗免疫原性比较被引量：2
- 2009年
- 目的在小鼠体内比较表达HIV-1 gag基因的重组AAV2／1和Ad5疫苗的免疫原性。方法分别用rAAV2／1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB／c小鼠一次或两次，于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答，用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应。结果单次免疫结果显示，在所有检测点tAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2／1-gag强，抗体反应在免疫后4周无明显差异。两次免疫后4周的检测结果表明，rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTE应答比rAAV2／1-gag强，但抗体反应比rAAV2／1-gag组弱。结论rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应，而rAAV2／1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强，但细胞免疫应答较弱。
- 余双庆冯霞刘红梅杨海儒李红霞曾毅
- 关键词：HIV-1腺病毒科艾滋病疫苗
- 表达HIV-1 B亚型env基因的质粒DNA及腺病毒载体疫苗的免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 目的 构建表达中国B亚型HIV-1流行株env基因的DNA及重组腺病毒载体疫苗,将其用于预防或治疗HIV感染.方法 构建质粒DNA疫苗pVR-gp160及重组腺病毒载体疫苗rAdV-gp160.将这两种疫苗以不同的方式免疫BALB/c小鼠,分别采用ELISPOT方法 和ELISA方法 检测免疫小鼠中HIV-1 Gp120特异性细胞免疫反应及抗体反应.结果 DNA疫苗单独免疫及DNA疫苗初免/腺病毒疫苗加强免疫的联合免疫方案皆可诱导较高水平的Gp120特异性细胞免疫反应;而在体液免疫方面,各实验组产生的Gp120特异性抗体水平都较低.结论 所构建的DNA疫苗及rAdV疫苗能有效表达Gp160蛋白,并可有效激活机体的细胞免疫反应.
- 杨海儒张凌斐冯霞余双庆庄著伦李红霞曾毅
- 关键词：艾滋病疫苗腺病毒科
- HIV11C亚型Gp120蛋白表达、纯化及其抗体制备的研究
- 2009年
- 目的制备HIV-1C亚型Gp120蛋白及其抗体。方法用PCR技术从表达C亚型HIV-1全长gp160基因的质粒上扩增gp120基因羧基末端部分片段，其长度为612个核苷酸，编码204个氨基酸。将测序鉴定正确的gP120基因片段克隆到原核表达载体pET-30a上，以包涵体的形式在大肠埃希菌B121（DE3）中高效表达，Gp120蛋白c端融合6×His标签便于纯化。将纯化的蛋白免疫新西兰大白兔制备C亚型Gp120特异性兔多克隆抗体，用间接ELISA法测定抗体滴度，并用WesternBlot方法验证该抗体是否可识别在哺乳动物细胞内表达的C亚型Gp160蛋白。结果成功地获得高纯度的C亚型Gp120融合蛋白，用其制备的多克隆抗体滴度可达1：204800，该抗体可特异性识别在COS-1细胞中瞬时表达的C亚型Gp160蛋白。结论获得了高纯度的C亚型Gp120融合蛋白及其高效价的抗体。
- 杨海儒冯霞余双庆张晓光张晓梅陈国敏李泽琳曾毅
- 关键词：HIV病毒包膜蛋白质类抗体病毒
- 重组HIV-1 gp120 AAV2/1在小鼠和恒河猴体内的免疫原性被引量：1
- 2010年
- 本文旨在研究表达HIV-1中国流行株gp120基因的重组腺相关病毒疫苗在小鼠和恒河猴体内的免疫原性。用rAAV2/1-gp120免疫BALB/c小鼠和恒河猴,分别用ELISA和HIV-1假病毒中和试验检测免疫动物血清中HIV-1特异性IgG抗体水平和中和抗体水平,用ELISPOT方法和体内杀伤实验检测HIV-1特异性细胞免疫应答水平。结果显示在小鼠体内用rAAV2/1-gp120仅免疫一次就能诱导较高水平的IgG抗体,IgG抗体至少能持续21周,但没有检测到中和抗体。rAAV2/1-gp120在小鼠体内诱导微弱水平的HIV-1特异性细胞免疫应答。rAAV2/1-gp120在恒河猴体内诱导的HIV-1特异性细胞和抗体反应均很弱,且检测不到中和抗体。提示rAAV2/1载体在诱导抗体反应方面具有特殊优势,但若希望诱导HIV-1特异性中和抗体,则需要改造env基因以提高其免疫原性。
- 余双庆冯霞刘红梅杨海儒李红霞曾毅
- 关键词：HIV-1重组腺相关病毒免疫原性
- 河南省有偿供血者HIV-1外膜蛋白env基因序列分析及表型预测被引量：5
- 2009年
- 应用套式聚合酶链反应(nested-PCR)从60例河南省HIV-1抗体阳性有偿献血者的外周血单核细胞的DNA样品中扩增全长env基因并对扩增产物测序,共扩增到21个全长env基因,序列分析发现其中15个env基因有完整的可读框(ORF),14个为B'亚型,与国际参考株RL42的基因离散率为4.87%±0.31%,1个为B亚型,与国际参考株HXB2的基因离散率为5.43%。根据核苷酸序列推导出相应的氨基酸序列,并且分析及比较了重要的功能结构域。发现这15个序列的N糖基化位点和数目没有显著变化;CD4受体结合位点高度保守;根据V3环氨基酸序列及净电荷数目,预测大多数分离株使用CCR5辅助受体;V3环四肽序列以典型欧美B亚型GPGR最多,占40%;gp120/gp41剪切位点高度保守,预测所有gp160前体都能有效剪切;四种广谱中和抗体2G12I、gG1b12、4E10及2F5的识别位点高度保守,表明大多数分离株对这四种中和抗体敏感。有必要进一步阐明env基因型与相关功能的关系,这将为疫苗研究和药物开发提供依据。
- 冯霞杨海儒余双庆周玲李红霞李泽琳曾毅
- 关键词：供血者HIV-1
